甘薯IbHQT1启动子的克隆及上游调控因子的鉴定

羟基肉桂酰辅酶A奎尼酸羟基肉桂酰转移酶(hydroxycinnamoyl CoA quinate hydroxycinnamoyl transferase,HQT)是绿原酸生物合成的最后一步限速酶。IbHQT1是甘薯绿原酸生物合成的关键HQT基因,为进一步揭示HbHQT1在甘薯绿原酸生物合成中的作用和转录调控机制,克隆其启动子,构建甘薯叶酵母单杂交cDNA文库,通过酵母单杂交方法筛选与IbHQT1启动子结合的上游调控因子。结果表明,1500 bp的IbHQT1启动子序列中含有多种激素调节与防御相关的顺式元件及转录因子结合元件。构建的cDNA文库库容为1.15×107CFU,插入片段长度平均约1200 bp。通过酵母单杂交筛选获得2个转录因子IbMYB11和IbTGA2.2,可以与IbHQT1启动子结合。IbMYB11、IbTGA2.2和IbHQT1在甘薯(QS80-12-11)不同组织和发育阶段表达类似,与绿原酸的积累存在明显的相关性。