甲醛交联法研究高温条件下大肠杆菌体内小分子热休克蛋白IbpB的客户蛋白

目的：研究高温条件下小分子热休克蛋白IbpB在大肠杆菌体内的客户蛋白以及在此温度下IbpB对其客户蛋白的作用。方法构建表达IbpB蛋白的重组质粒pBAD－ibpB，pBAD质粒为对照，转化到BW25113－ΔibpB菌株。转化pBAD－ibpB质粒的BW25113－ΔibpB菌株在45℃热处理之后加入甲醛进行交联，亲和层析法对交联产物进行纯化，质谱法对捕获的客户蛋白进行鉴定，过氧化氢酶活性测定和蛋白热聚集体分离的方法检测IbpB对其客户蛋白的作用。结果质谱鉴定结果表明IbpB在高温条件下互相作用的客户蛋白主要是过氧化氢酶KatG、色氨酸降解酶TnaA和延伸因子EF－Tu；在ibpB敲除株中回补IbpB可以减少过氧化氢酶在高温条件下的活性丧失，可以阻止TnaA和EF－Tu在高温条件下发生的热聚集。结论 KatG、TnaA和EF－Tu是IbpB在高温条件下相互作用的主要客户蛋白，IbpB在高温条件下对上述客户蛋白具有明显的保护作用。