白血病患者白细胞中分化抑制因子Id2 mRNA的表达

目的:探讨分化抑制因子Id2基因在白血病白细胞中的表达状况。方法:应用RT-PCR半定量分析16例急性非淋巴细胞白血病(ANLL),10例慢性粒细胞白血病(CML)白细胞中Id2的mRNA表达水平。结果:Id2基因在急性非淋巴细胞和慢性粒细胞白血病患者外周血白细胞中的表达水平均增高,有统计学意义(P<0.05),但两者间比较无统计学意义。结论:Id2基因在白血病细胞中的表达明显增高,可能与白血病的发病有一定相关性。

用于双分子荧光互补技术的Olig1/Id2基因真核表达载体的构建和鉴定

目的:构建pBiFC-VN173-Olig1和pBiFC-VC155-Id2真核表达质粒,并进行鉴定。方法:以pEGFP-N3-Olig1真核表达质粒为模板扩增出Olig1基因,与pBiFC-VN173载体连接,构建pBiFC-VN173-Olig1真核表达质粒;利用RT-PCR方法从新生大鼠脊髓中提取Id2基因片段,与pBiFC-VC155载体连接,构建pBiFC-VC155-Id2真核表达质粒。对此2种质粒进行酶切鉴定、测序。结果:通过酶切鉴定、测序,证明pBiFC-VN173-Olig1和pBiFC-VC155-Id2重组质粒序列和编码框均正确构建成功。结论:成功构建了pBiFC-VN173-Olig1和pBiFC-VC155-Id2真核表达质粒,为进一步在活细胞内研究Olig1和Id2的相互作用提供了实验基础。

外源性分化抑制因子Id2在C_2C_(12)细胞中的表达

目的:构建大鼠Id2基因真核荧光表达载体,并观察外源性Id2基因C_2C_(12)细胞中的表达。方法:RT-PCR扩增出Id2全长cDNA,T4 DNA连接酶将载体pGEM-T和Id2 cDNA进行连接,构建克隆载体,经限制性内切酶EcoR I酶切pGEM-Id2克隆载体和pEGFP-C2真核表达栽体,构建出重组真核表达载体pEGFP-C2-Id2,经酶切分析、PCR鉴定及DNA测序证实cDNA片段大小和序列的正确性;通过电穿孔转染法将外源性Id2基因导入C_2C_(12)成肌细胞中。分别于转染4、8、12、24、36、72 h后通过荧光倒置显微镜下观察细胞整体情况,并计算转染效率。结果:经酶切分析和序列测定证实pEGFP-C2-Id2含大小正确的正向Id2 cDNA片段,获得高转染率和高表达外源性Id2基因的C_2C_(12)细胞,转染8 h时,转染效率约为(10.5±2.8)%;转染12 h后,转染效率约为(20.9±3.1)%;转染24 h后,转染效率最高,约为(60.8±3.2)%。结论:成功构建了同时携带有G418筛选位点和Id2基因的真核表达载体;并获得高表达外源性Id2基因的C_2C_(12)细胞。