淫羊藿苷对体外培养成人骨髓基质干细胞增殖与成骨性分化的影响

目的研究淫羊藿苷对体外培养成人骨髓基质干细胞(human bone marrow stromal stem cells,hBMSCs)增殖与成骨性分化的影响。方法取住院患者术后骨髓标本(男,40岁),利用骨髓细胞处理试剂盒分离单核层细胞,培养于含10%FBS的DMEM培养液中,3d后首次换液,12d后传代培养。培养基中淫羊藿苷终浓度分别为5×10-5、1×10-5、5×10-6、1×10-6、5×10-7、1×10-7mol/L。增殖分析采用MTT法,于成骨性诱导培养第8d测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,第14d进行茜素红染色及钙化结节计数。结果原代培养细胞呈典型成纤维细胞样形态;淫羊藿苷剂量依赖性抑制hBMSCs增殖,但能显著促进其向成骨性分化,表现为提高hBMSCs的ALP活性,增加钙化结节数量。结论终浓度为5×10-5mol/L淫羊藿苷显著促进hBMSCs的成骨性分化,证明淫羊藿苷是中药淫羊藿抗骨质疏松的有效成分。

淫羊藿苷和仙茅苷协同抑制破骨细胞的形成、分化和骨吸收功能

目的研究淫羊藿苷和仙茅苷配伍抑制破骨细胞形成、分化和骨吸收的相互作用关系。方法用1,25-(OH)_2Vitamin D_3和地塞米松;或人巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导骨髓单核细胞使其分化为破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色进行阳性破骨细胞鉴定;磷酸苯二钠法测定抗酒石酸酸性磷酸酶活性;将破骨细胞和骨片共同培养,以计算机图像分析测定骨吸收陷窝的面积;以Hoechst 33258和罗丹明-鬼笔环肽染色,激光共聚焦显微镜观察破骨细胞肌动蛋白环(F-actin Ring)的形态;用Weste rn-blot分析细胞骨架相关蛋白的表达。结果淫羊藿苷和仙茅苷在1×10^(-6)mol/L浓度下可协同抑制破骨细胞的形成、降低抗酒石酸酸性磷酸酶的活性,减少破骨细胞在骨片上形成的骨吸收陷窝面积,抑制破骨细胞骨架F-actin环的构建及其调控因子Rho GTPases和灶性黏附激酶(focal adhesion kinase,FAK)的表达。结论淫羊藿苷和仙茅苷协同抑制破骨细胞性的骨吸收,为药对淫羊藿仙茅的配伍提供了实验依据。

淫羊藿苷和尼莫地平对脑缺血再灌小鼠行为学变化的影响

目的探讨淫羊藿苷和尼莫地平对脑缺血再灌小鼠行为学变化的影响。方法采用双侧颈总动脉夹闭合并取血降压再灌注的方法建立小鼠脑缺血再灌损伤模型,随机分为假手术组、模型组、淫羊藿苷防治组和尼莫地平防治组,检测各组小鼠自发活动和跳台成绩的变化。结果与假手术组(149.2±34.6)次相比,脑缺血再灌模型组小鼠自发活动显著下降[(102.4±31.2)次,P<0.01]。跳台实验中假手术组小鼠的上台潜伏期为(6.45±6.35)s,24h后的错误次数为(1.36±1.21)次、下台潜伏期为(217.1±65.6)s;而模型组小鼠相应成绩分别为(13.09±5.94)s(P<0.05)、(3.91±2.43)次(P<0.01),(18.3±21)s(P<0.01)。淫羊藿苷(30、100mg/kg)或尼莫地平(20mg/kg)灌胃可明显提高损伤小鼠的自发活动,分别为(135.5±35.7)次(P<0.05)、(154.5±37.7)次(P<0.01)、(131.8±32.1)次(P<0.05);缩短小鼠的上台潜伏期,分别为(9.9±6.51)s、(7.45±5.45)s(P<0.05)、(10.55±7.49)s;明显减少小鼠24h后的错误次数,分别为(1.20±1.03)次(P<0.01)、(0.91±1.58)次(P<0.01)、(0.82±0.87)次(P<0.01);显著增加下台潜伏期,分别为(156.1±123.3)s(P<0.01)、(209.7±123.7)s(P<0.01)、(200.3±125.6)s(P<0.01)。结论淫羊藿苷和尼莫地平可阻遏脑缺血再灌损伤致小鼠行为学的改变。

淫羊藿甙对成骨细胞凋亡的影响

目的通过研究淫羊藿甙对体外培养的成骨细胞凋亡的影响,探讨淫羊藿甙防治骨质疏松的可能机制。方法采用酶消化法和机械分离法获得新生SD大鼠成骨细胞,取第四代细胞随机分为,雌二醇组(1×10-8mmol/l),淫羊藿甙低剂量组(1 ng/ml),中剂量组(10 ng/ml),高剂量组(100 ng/ml)对照组,经药物处理48 h后,用TUNEL和扫描电镜的方法检测成骨细胞的凋亡。结果与对照组相比较,淫羊藿甙各剂量组的凋亡指数均下降(P<0.05),其中淫羊藿甙中剂量组的凋亡指数下降明显,差异有高度统计学意义(P<0.01);扫描电镜显示淫羊霍甙各组的凋亡细胞较对照组减少,尤以淫羊霍甙中剂量组最少。结论淫羊藿甙可以通过抑制成骨细胞的凋亡,促进骨形成,减少骨吸收,从而发挥抗骨质疏松的作用。

淫羊藿苷对糖尿病大鼠睾丸中亚硝基谷胱甘肽还原酶及Bcl-2的影响

目的：初步探讨淫羊藿苷（ICA）干预下亚硝基谷胱甘肽还原酶（GSNOR）及B细胞淋巴瘤/白血病-2基因（Bcl-2）在糖尿病大鼠睾丸中表达。方法：链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型，低、中、高（30、 70、 100mg/kg）淫羊藿苷灌胃21d，光镜观察大鼠睾丸形态学变化，检测外周血血糖、雌二醇及睾酮水平。免疫组织化学检测GSNOR及Bcl2在睾丸中的表达。结果：中剂量组血糖明显降低，低、中剂量组睾酮与雌二醇比值升高；GSNOR主要表达在精母细胞及精子细胞，与对照组相比，低、中剂量组灰度值较高。Bcl-2蛋白主要表达在睾丸间质细胞，与对照组相比，低、中剂量组阳性细胞数明显增多。结论：淫羊藿苷可稳定糖尿病大鼠血糖，提高睾酮与雌二醇比值对睾丸有保护作用，其作用可能与减少睾丸间质细胞凋亡，提高Bcl-2及GSNOR蛋白表达，抵抗亚硝化应激有关。

淫羊藿苷对三氯化铝诱导痴呆大鼠模型脑内胆碱能系统的影响

目的观察淫羊藿苷(icariin,Ica)对三氯化铝(AlCl3)诱导的痴呆大鼠模型脑内胆碱能系统的影响。方法通过饮用1.6g/L AlCl3溶液诱导大鼠的痴呆模型,Ica灌胃3月后免疫组化法检测鼠脑海马内乙酰胆碱酯酶(AChE)、胆碱乙酰转移酶(ChAT)表达,并通过BI2000图像处理软件半定量分析;化学法检测大鼠大脑皮层及海马组织中AChE活性。结果Ica连续灌胃给药3个月后,与AlCl3诱导的痴呆大鼠模型对照组比较,Ica可以降低海马内AChE表达,减少AChE活性,抑制ChAT表达下降。结论Ica对AlCl3诱导痴呆大鼠模型学习记忆保护作用的机制可能与促进大鼠脑内胆碱能神经功能恢复有关。

乳疾灵颗粒辐照前后淫羊藿苷含量变化研究

目的：对比乳疾灵颗粒辐照前后淫羊藿苷含量差异。方法：采用HPLC色谱法,色谱柱为Thermo ODS-2 HYPERSIL色谱柱（250 mm ×4.6 mm,5μm）；流动相为乙腈-0.033 mol·L^-1磷酸二氢钾（30∶70）；检测波长为265 nm；流速为1.0 ml· min^-1；柱温30℃。结果：淫羊藿苷在浓度3.44~34.40μg·ml^-1范围内呈现良好的线性关系,r=0.9997（n=6）；平均回收率为98.18%,RSD=0.32%。乳疾灵颗粒辐照前后淫羊藿苷含量变化差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：常规剂量照射处理对乳疾灵颗粒中淫羊藿苷影响较小。

淫羊藿苷对牛Ⅱ型胶原诱导型关节炎小鼠IL-17/RANKL轴的影响

目的初步观察淫羊藿苷(Icariin,ICA)对牛Ⅱ型胶原诱导型关节炎(typeⅡcollagen-induced arthritis,CIA)DBA/1小鼠IL-17/RANKL的调节作用。方法除正常对照组(N组,灌胃给予生理盐水3 ml·kg-1·d-1)外以牛Ⅱ型胶原和弗氏不完全佐剂注射诱导DBA/1小鼠关节炎模型;将32只建模成功(关节炎指数评分≥4分)DBA/1小鼠随机分为模型对照组(Con组,灌胃给予生理盐水3 ml·kg-1·d-1)、甲氨喋呤组(MTX组,灌胃给予每周MTX 1.5 mg·kg-1)、淫羊藿低剂量组(IL组,灌胃给予ICA 5 mg·kg-1·d-1)和淫羊藿苷高剂量组(IH组,灌胃给予ICA 20 mg·kg-1·d-1),每组8只,连续干预15 d,并于第3,7,11,15 d记录各组小鼠关节炎指数评分值。干预结束后检测各组关节炎小鼠血清白介素-17(IL-17)、白介素-23(IL-23)、NF-KB配体的受体或激活因子(RANKL)和抗酒石酸酸性磷酸酶(Tracp)含量。结果第2次免疫后1周左右,Con组足趾肿胀明显,关节炎指数评分明显高于N组,差异具有显著性(P<0.01);干预15 d后,与N组比较,Con组IL-23、Tracp、IL-17和RANKL浓度升高,在IL-23和Tracp水平上差异有统计学意义(P<0.05),而IL-17和RANKL两个指标差异无统计学意义(P>0.05);与Con组比较,MTX组血清IL-23水平降低(P<0.05),IL组IL-23和RANKL含量降低(P<0.01,P<0.05),IH组IL-17、IL-23、RANKL和Tracp水平均显著降低(P<0.01);IH组与IL组相比,RANKL和Tracp均明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论淫羊藿苷能改善CIA DBA/1小鼠足趾局部肿胀程度,下调血清IL-23和IL-17、RANKL和Tracp水平,具有调节骨免疫系统的潜能。

HPLC测定补肾化瘀膏中淫羊藿苷的含量

目的:建立补肾化瘀膏中淫羊藿苷的HPLC含量测定方法。方法:采用Gimini色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.03M醋酸铵(含0.25%甲酸)(28:72)作为流动相,流速1.0 ml·min^(-1);检测波长269 nm,柱温:40℃。结果:淫羊藿苷浓度在0.1～2.0μg·ml^(-1)的范围内线性关系良好,回收率为99.51%,RSD为1.40%(n=6)。结论:本方法简便、灵敏、准确、重复性好,能有效控制补肾化瘀膏的含量。

参芪二仙片质量标准研究

目的:建立参芪二仙片的质量标准。方法:采用反相高效液相色谱法对参芪二仙片中主要成分淫羊藿苷进行定量分析,同时对制剂中的主要药味红参、当归、黄柏进行薄层鉴别。结果:用高效液相色谱法测定淫羊藿苷的含量,在0.022～0.110μg范围内,淫羊藿苷面积值与进样量有良好的线性关系,r为0.999 9。平均加样回收率为97.5%,RSD=1.32%(n=6),薄层图谱斑点清晰,阴性对照无干扰。结论:本方法简便,重现性好,可有效控制制剂的质量。

制备单味淫羊藿汤剂的最佳条件考察

以淫羊藿主要成分淫羊藿甙为指标,采用正交实验法考察煎制(浸泡)时间,煎出量、煎制方式对主成分的影响,从而找出这三种因素对其影响的显著顺序:煎得量>煎制时间>煎制方式。

正交设计优化淫羊藿总黄酮最佳提取条件

目的:研究淫羊藿总黄酮最佳提取条件。方法:采用正交设计试验研究不同浓度的乙醇,溶剂体积和提取时间对淫羊藿总黄酮回流提取的影响;采用紫外分光光度法和HPLC法测定提取物中总黄酮和淫羊藿苷含量。结果:淫羊藿总黄酮最佳提取条件是采用90%乙醇,20倍量提取溶剂,提取时间为1h。结论:采用以上提取条件,所得提取物中总黄酮和淫羊藿苷含量最高。

复方培元颗粒的提取工艺研究

目的优选复方培元颗粒的提取工艺。方法以总多糖含量、人参皂苷Rb1和淫羊藿苷总含量、出膏率为评价指标,选取溶剂用量、提取时间、提取次数等为考察因素,采用L9(34)正交试验法优选复方培元颗粒的最佳提取工艺。结果最佳提取工艺参数为加12倍量水,提取3次,每次提取1h。结论优选的提取工艺切实可行,可为复方培元颗粒的质量控制提供依据。

淫羊藿苷对骨髓间充质干细胞表达GATA-4的影响

目的:探讨淫羊藿苷(ICA)对骨髓间充质干细胞(MSCs)表达锌指转录因子(GATA-4)的影响。方法:把MSCs随机分为6组:正常对照组、4个浓度的ICA组(10-6M、10-7M、10-8M、10-9M)、5-氮胞苷组,每组又分为4个诱导时间组:24 h+1 d、24 h+1 w、48 h+1 d、48 h+1 w。利用RT-PCR方法检测各组的GATA-4表达量。结果:与其他时间组相比,各组在培养24 h+1 w时,GATA-4表达量最高。结论:ICA与MSCs共培养24 h+1 w时,能更好的促进GATA-4的表达。

HPLC法测定补肾强身片中淫羊藿苷的含量

目的建立补肾强身片中淫羊藿苷的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法测定。色谱柱：Kromasil C18柱，流动相：乙腈-水（28：72），流速：1．0ml·min^-1，检测波长：270nm。结果淫羊藿苷在0．11216～1．1216μg之间线性关系良好，r=0．9999；平均加样回收率为98．6％，（n=6，RSD=0．61％）。结论试验表明，该方法操作简单，分离效果好，重复性好，可以用于补肾强身片的质量控制。

Effects of Icariin on Expression of OPN mRNA and Type ⅠCollagen in Rat Osteoblasts in Vitro

To study the effects of Icariin on expression of osteopontin （OPN） mRNA and type Ⅰ collagen in rat osteoblasts in vitro and to explore its possible mechanisms in preventing osteoporosis. OB was isolated from calvaria of new-born new-born fetal Sprague-Dawley （SD） rats by means of modified sequential collagenase digestion and incubated in MEM medium and the cell morphology was observed under inverted phase contrast microscope, OB was identified by alkaline phosphatase （ALP） staining. Different concentration （0.1μg/mL, 1.0 μg/mL, 10 μ/mL） of Icariin was added to the OB and incubated. The effect of Icariin on the proliferation and osteogenesis of OB was monitored by MTT analysis. The expression of type l collagen was estimated with immunohistochemistry techniques. The expression levels of mRNA of OPN in the cells in every group were examined by reverse-transcriptase ploymerase chain reaction （RT-PCR）. The expression of OPN mRNA and type Ⅰ collagen was strengthened gradually with the increase of Icariin concentration and peaked with 10 μg/mL Icariin on the 5th day. Icariin could significantly promote the expression of OPN mRNA and type Ⅰ collagen in rat osteoblasts in vitro. The levels of expression of OPN mRNA and type Ⅰ collagen were changed with different concentration of Icariin. Icariin could effectively prevent and treat osteoporosis and promote the bone formation.

保健食品中淫羊藿苷测定方法研究

〔目的〕研究保健食品中淫羊藿苷的测定 ,并比较紫外分光光度计法与高效液相色谱法的测定效果〔方法〕采用经乙酸乙酯萃取 ,并经大孔树脂分离提纯 ,分别对固体粉状试样、含油软胶囊试样、口服液试样用二种不同的方法测定淫千藿苷的含量。〔结果〕经问收率试验和实际样品检测 ,方法的回收率分别为 93.0 %～ 98.0 % ,95 .0 %～ 99.0 % ,实际样品测定RSD分别为 1.2 1%～3.37% ,1.2 9%～ 3.92 %。〔结论〕二种方法测定的结果均较为满意 ,可根据实验室条件自行选择 ,但紫外分光光度计更适用于检测成分比较单一的试样。

高效液相色谱法测定补肾强身片中淫羊藿苷的含量

用HPLC法测定补肾强身片中淫羊藿苷的含量，采用SHIM-PACK VP-ODS C18色谱柱；乙腈-水（30：70）为流动相；检测波长为270nm。线性范围0．22～4．34μg（r=1．0000）；平均回收率为100．07％，RSD为1．13％（n=6）。本方法简便、准确，可用于补肾强身片中淫羊藿苷的含量测定。

平糖胶囊C方(浓缩型)中阿魏酸和淫羊藿苷的含量测定

目的 测定平糖胶囊C方（浓缩型）中阿魏酸和淫羊藿苷的含量.方法 采用高效液相色谱法测定,阿魏酸的色谱条件为：色谱柱：XDB-C18（4.6×250mm,5μm）,流动相：甲醇-0.5%醋酸水（25：75）,流速：1mL·min-1,检测波长：320nm,检测温度：25℃;淫羊藿苷的色谱条件为：色谱柱为XDB-C18（4.6×250mm,5μm）流动相：乙腈-水（23.5：76.5）,流速：1mL·min-1,检测波长：270nm,检测温度：25℃.结果 阿魏酸和淫羊藿苷在各自色谱条件下均得到很好的分离,分别在2.6～52μg·mL-1和40～200μg·mL-1范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为102.896%和102.4044%.结论 该方法简便、准确、可靠,可用于该制剂的质量控制.

淫羊藿苷分子印迹聚合物吸附性能研究

以沉淀聚合法制备了淫羊藿苷分子印迹聚合物(MIPs).并用动态吸附、静态吸附和选择性吸附实验研究了制备的分子印迹聚合物对模板分子淫羊藿苷的吸附性能.结果表明制备的淫羊藿苷分子印迹聚合物对模板分子淫羊藿苷具有较好的吸附能力和识别能力,可以作为固相萃取材料来分离提取中草药淫羊藿中的淫羊藿苷.