BIOMED-2引物系统检测T淋巴母细胞性淋巴瘤/急性淋巴细胞白血病中Ig/TCR基因重排

目的探讨BIOMED-2引物系统检测T淋巴母细胞性淋巴瘤(T lymphoblastic lymphoma,T-LBL)/急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)患者免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)/T细胞受体基因(T-cell receptor,TCR)重排的敏感性,分析Ig/TCR基因重排方式。方法采用BIOMED-2引物系统扩增35例T-LBL/ALL中Ig/TCR重排基因,核酸分子异源双链凝胶电泳分析基因重排结果。结果 35例T-LBL/ALL中16例检测出TCR基因重排,检出率为45.7%,其中TCRβ单重排6例(37.5%),TCRγ单重排4例(25.0%),TCRβ和TCRγ双重排3例(18.8%),TCRδ单重排2例(12.5%),TCRγ和TCRδ双重排1例(6.3%)。4例患者同时检测出Ig和TCR基因重排,Ig基因检出率为11.4%。28例T-LBL中11例检测出TCR基因重排(39.3%),7例T-ALL中6例检测出TCR基因重排(85.7%)。结论利用BIOMED-2引物系统可检测出部分T-LBL患者的Ig/TCR基因重排,是一种辅助诊断工具。

恶性淋巴瘤诊断中Ig/TCR基因重排的分子病理检测分析

目的探讨B细胞性淋巴瘤中Ig基因重排和T细胞性淋巴瘤中TCR基因重排的特点。方法回顾性分析213例恶性淋巴瘤和24例淋巴反应性增生组织样本,利用3730毛细血管电泳对提取的DNA进行PCR扩增,检测B细胞性淋巴瘤中Ig基因重排和T细胞性淋巴瘤中TCR基因重排。结果 B细胞性淋巴瘤中IgHA的总阳性率为43.21%,IgHB的总阳性率为29.63%,IgHC的总阳性率为30.25%,IgHD的总阳性率为16.67%,IgHE的总阳性率为3.09%,IgLκA的总阳性率为42.59%,IgLκB的总阳性率为23.46%,IgLλA的总阳性率为25.93%,IgH(A+B+C+D+E)+IgLκ(A+B)+IgLλA的总阳性率为88.27%;T细胞性淋巴瘤中TCRB-A的总阳性率为31.37%,TCRB-B的总阳性率为58.82%,TCRB-C的总阳性率为23.53%,TCRG-A的总阳性率为60.78%,TCRG-B的总阳性率为21.57%,TCRD的总阳性率为29.41%,TCRβ+TCRγ+TCRδ的总阳性率为78.43%。结论Ig基因重排和TCR基因重排分别对B细胞性和T细胞性淋巴瘤的诊断具有重要价值。

RQ-PCR检测Ig/TCR基因重排监测急性淋巴细胞白血病患儿治疗过程微小残留白血病

目的研究RQ-PCR检测急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿Ig/TCR基因重排在微小残留白血病(MRD)监测中的作用。方法以2009年3月至2011年3月在广州市妇女儿童医疗中心血液肿瘤科确诊和治疗的ALL患儿为研究对象,PCR检测初诊ALL患儿的Ig/TCR基因重排;基因扫描分析初诊患儿Ig/TCR基因重排的克隆特性;对ALL患儿的单克隆性Ig/TCR基因重排进行测序,RQ-PCR检测不同治疗阶段Ig/TCR基因重排的表达量。结果 86例ALL患儿进入分析,男52例,女34例;年龄1～13(4.3±3.0)岁,随访时间1～26(14.3±7.0)个月。①83例(96.5%)检出1种或以上Ig/TCR基因重排,共检出209个Ig/TCR基因重排;②91.8%(56/61例)检出1种或以上单克隆性Ig/TCR基因重排;61例172个Ig/TCR基因重排中,单克隆性、寡克隆性和多克隆性Ig/TCR基因重排的检出率分别为58.1%(100个)、30.8%(52个)和11.0%(19个),差异有统计学意义(P=0.000);③26例完成连续3次随访,其中22例持续完全缓解患儿的Ig/TCR基因重排平均相对表达量持续下降,在维持治疗前均为MRD阴性(≤1.0×10-4);4例复发患儿在诱导缓解治疗后至复发前各检测时点Ig/TCR基因重排表达量均>1.0×10-4,并在复发前已有回升,从开始回升至临床复发的平均时间为3.75(2～8)个月。结论 Ig/TCR基因重排相对表达量可反映MRD水平,可作为判断预后、监测复发和指导治疗的有效手段。

儿童急性祖B淋巴细胞白血病Ig和TCR基因重排的特征及其临床意义

目的探讨儿童急性祖B淋巴细胞白血病(ALL) Ig和TCR基因重排与临床特征的关系及其对预后的影响。方法纳入2003年4月至2009年12月首都医科大学附属北京儿童医院血液肿瘤中心收治的祖B-ALL患儿,采用多重PCR联合异源双链电泳及测序方法检测IgH、IgK、IgL、TRD、TRG和TRB基因重排,其中单克隆、双克隆和寡克隆重排为阳性组,多克隆和未重排者为阴性组;各标志阳性组中根据基因克隆特性分为单克隆亚组和双/寡克隆亚组。采用卡方检验比较阳性组和阴性组临床特征的差异; Kaplan-Meier生存分析比较阳性组和阴性组、单克隆和双/寡克隆亚组无事件生存率(EFS)的差异。结果 40例祖B-ALL患儿进入本文分析,均检测到至少1种Ig或TCR克隆性重排,IgH、IgK和IgL的检出率依次为90.0%、32.5%和10.0%;跨系TCR基因重排的比例为72.5%,TRD、TRG和TRB的检出率分别为52.5%、30.0%和17.5%。TRD基因单克隆性重排比例最高(95.2%),主要为Vδ-Dδ和Dδ-Dδ不完全重排。TRD基因重排阳性患儿白血病细胞表达CD22的频率显著低于未重排者。MLL基因重排阳性患儿未检测到TRB基因重排。各标志重排阳性组与阴性组泼尼松反应、微小残留病水平及预后差异均无统计学意义。IgH双/寡克隆亚组患儿EFS显著低于IgH单克隆亚组患儿,5年EFS分别为(58.8±12.3)%和(84.2±8.4)%,P=0.044。结论祖B-ALL患儿TRD基因重排与CD22表达相关,IgH单克隆性重排患儿的预后优于双/寡克隆性重排者。

探讨恶性淋巴瘤诊断中Ig/TCR基因重排的分子病理检测

目的总结恶性淋巴瘤诊断中Ig/TCR基因重排的分子病理特点,为该病的基因检测提供依据。方法研究时间在2016年1月至2018年6月,研究对象为180例恶性淋巴瘤患者以及30例淋巴反应性增生患者,提取不同样本的DNA,借助于PCR扩增方法分析Ig基因重排和TCR基因重排情况。结果 B细胞淋巴瘤对应的IgHA、IgHB、IgHC、IgHD、IgHE、IgLA、IgLB、IgLA、IgH(A+B+C+D+E)+IgL(A+B)+IgLA阳性率分别为47.69%、33.07%、35.38%、19.23%、6.92%、45.38%、22.30%、30.00%、96.15%。TCR基因重排中TCRB-A、TCRB-B、TCRB-C、TCRG-A、TCRG-B、TCRTCRD、TCRβ+TCR+TCRδ对应的阳性率分别为32.00%、56.00%、22.00%、60.00%、22.00%、34.00%、78.00%。结论恶性淋巴瘤诊断中Ig/TCR基因重排的分子病理特点可作为B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤诊断的重要参考。

淋巴系恶性肿瘤的基因重排

淋巴系恶性肿瘤是淋巴系统造血细胞分化早期的克隆性增生,其最可靠的基因标志是细胞表面的免疫球蛋白(Ig)基因和T细胞受体(TC)基因发生重排。本文就淋巴系恶性肿瘤的Ig和TCR基因重排以及用Ig和TCR基因检测残留淋巴系白血病的研究进展作一综述。

BIOMED-2标准化基因重排检测在非霍奇金淋巴瘤诊断中的意义

目的:利用BIOMED-2标准化免疫球蛋白(Ig)/T细胞受体(TCR)基因重排检测非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者骨髓Ig或TCR基因重排,探讨Ig/TCR基因重排在非霍奇金淋巴瘤诊断中的应用意义。方法:从骨髓及石蜡包埋组织(FFPE)标本中提取基因组DNA,采用BIOMED-2系统引物,进行多重PCR扩增并利用PCR片段分析法进行Ig/TCR基因重排的克隆性分析。结果:在235例T细胞非霍奇金淋巴瘤(T-NHL)中,TCRγ和TCRx单克隆重排阳性率分别为57.9%和50.2%,TCRγ和TCRβ的联合检出率为71.9%。在583例B细胞非霍奇金淋巴瘤(BNHL)IgH和IgK单克隆重排阳性率分别为70.7%和69.3%,IgH和IgK的联合检出率为81.6%。套细胞淋巴瘤与滤泡淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤IgH(84.8%对34.0%(P<0.001);84.8%对9.2%(P=0.025)和IgK(75.8%vs 50.9%,P<0.001;75.8%vs 16.1%(P<0.001)重排阳性率差异具有统计学意义。Ig基因重排阳性BNHL患者中,65例(13.7%)患者存在TCR重排阳性。TCR重排阳性T-NHL患者中,未见Ig基因重排阳性。30例弥漫大B细胞淋巴瘤患者FFPE标本有25例(83.3%)检出Ig基因重排,与骨髓标本重排检出率相比较,差异具有统计学意义(P<0.001)。结论:利用BIOMED-2标准化Ig/TCR基因重排检测对于淋巴瘤的诊断有辅助性作用,并且利用序列分析法可提高重排检测的敏感性和特异性,对于淋巴瘤的早期诊断有很高的价值。

非霍奇金淋巴瘤抗原受体基因重排检测中双重重排现象的初步研究

目的 检测非霍奇金淋巴瘤 (NHL)抗原受体基因双重重排的发生率及初步探讨其病理意义和可能机制。方法 采用PCR方法 ,联合使用IgHFR3A及FR2A、TCRγ、TCRβ引物 ,检测 12 5例NHL患者IgH基因及TCR基因克隆性重排 ;检测B NHL和T NHL中抗原受体基因双重重排的发生率 ,并对其中的 117例NHL患者采用免疫组织化学EnVision两步法检测Ki6 7蛋白表达并计算增殖指数 ,分析NHL不同重排类型与增殖指数间的关系。结果 联合使用IgHFR3A及FR2A、TCRγ、TCRβ引物 ,96例B NHL患者中有 8例 (8% )检测到发生双重重排 ,2 9例T NHL患者中有 5例 (17% )检测到发生双重重排。B NHL中 6 5例检测到IgH基因克隆性重排 ,8例发生双重重排 ,15例为多克隆重排 ;T NHL中有 15例检测到TCR基因克隆性重排 ,5例发生双重重排 ,9例为多克隆重排。上述病例同时平行检测了Ki6 7,并计算增殖指数 ,经One way检验 ,在B NHL和T NHL中 ,克隆性重排、双重重排及多克隆重排的淋巴瘤增殖指数差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 淋巴瘤抗原受体基因的双重重排在成熟NHL中并非罕见 ;

Ig/TCR基因重排检测在淋巴系统恶性增殖性疾病诊断及疗效监控中的意义

目的:评估Ig/TCR抗原受体基因重排技术在可疑淋巴系统增殖性疾病中的鉴别诊断意义及其在疾病监控中的作用。方法:使用BIOMED-2多重聚合酶链反应技术,检测405例患者的515份样本,分析受体基因重排结果,并与其最终诊断及疾病状态的相关性进行分析。结果:在确诊的118例淋巴细胞增殖性疾病中,共有82例标本(69.5%)检测到单克隆抗原受体基因重排,其中多发性骨髓瘤78.6%(11/14),急或慢性淋巴细胞白血病74.4%(29/39),非霍奇金淋巴瘤骨髓浸润65.7%(23/35),非霍奇金淋巴瘤病理确诊组织样本63.3%(19/30)。组织标本阳性检出率明显高于骨髓标本(50.0%∶12.5%,P<0.05)。对部分初诊时抗原受体基因重排阳性,但治疗后达完全缓解的患者进行随访发现,达到完全缓解的患者骨髓均未检测出单克隆性抗原受体基因重排。不伴骨髓浸润的非霍奇金淋巴瘤的58份骨髓标本和非淋巴系统增殖性疾病的204份样本,均未发现单克隆性抗原受体基因重排(特异性100%)。结论:抗原受体基因重排单克隆检测对淋巴系统增殖性疾病的诊断、鉴别诊断及治疗后疗效评价有重要意义。

以Ig/TCR基因重排为分子标志的儿童急性淋巴细胞性白血病微小残留病检测的技术方案

微小残留病（minimal residual disease,MRD）是儿童急性淋巴细胞性白血病（acute lymphoblastic leukemia,ALL）的重要预后指标.目前普遍认为,MRD检测在评价治疗效果、判断预后及实施个体化治疗中具有重要的指导意义[1-2].如果诱导缓解治疗结束时MRD呈阴性,则患儿预后极佳,已有研究探讨降低化疗强度的可能性;而此时甚至到巩固治疗时MRD水平仍较高的患儿,则预后较差,需要更为强烈的化疗,甚至造血干细胞移植.

以Ig／TCR基因重排为靶目标检测微小残留白血病的研究进展

微小残留白血病（MRD）是引起白血病复发的主要原因，准确检测MRD对判断预后、评价疗效、监测复发和指导治疗都具有十分重要的意义。免疫球蛋白／T细胞抗原受体（immunoglobulin／T cell receptor，Ig／TCR）基因重排具有高特异性和高发生率，是检测白血病MRD的分子基础。目前，国际上已建立了基于Ig／TCR基因重排、多中心、大样本、结合临床的实时定量聚合酶链反应监测标准，为临床上判断MRD水平并据此确定治疗方案提供了指导。本文就近年来以Ig／TCR基因重排作为MRD检测靶目标的研究进展作一综述。

肝脾T细胞淋巴瘤13例临床病理分析及预后

目的探讨肝脾T细胞淋巴瘤(HSTCL)的临床病理学特点、诊断及鉴别诊断。方法收集13例HSTCL的临床资料并进行形态学观察,应用免疫组化和TCR基因重排检测,并复习相关文献。结果13例瘤细胞CD2、CD3、CD7均阳性,T细胞限制性胞内抗原TIA-1、CD56部分阳性,细胞毒性相关分子粒酶B(Granzyme-B)、EBER阴性。11例标本TCR克隆性重排检测阳性。13例患者临床治疗方案不同(脾切除术后化疗,保脾化疗,自体造血干细胞移植),随访6~58个月,预后均较差。结论HSTCL是一类罕见的结外侵袭性外周T细胞淋巴瘤,其病理表现多样且独特,结合免疫表型、TCR基因重排可确诊。