流式细胞术结合Ig基因重排在B细胞淋巴瘤细针穿刺标本诊断中的应用

目的探讨流式细胞术(flow cytometry,FCM)结合PCR检测Ig基因重排在B细胞淋巴瘤(B-celllymphoma,B-NHL)细针穿刺小标本诊断中的应用价值。方法对经组织学确诊的36例B-NHL和28例反应性增生的浅表淋巴结肿大病例行细针穿刺,对其组织学形态、免疫组化染色、FCM免疫表型及细胞学形态进行回顾性分析,并采用BIOMED-2系统引物分析Ig基因重排情况,总结B-NHL各亚型的FCM免疫表型特点及细胞学特点,以及对比分析FCM与Ig基因重排联合诊断与组织学诊断之间的符合率。结果 36例组织学诊断的B-NHL中,31例经FCM/Ig基因重排可确诊(符合率为86.1%),23例可以区分亚型(符合率为63.9%)。28例组织学诊断的反应性增生中,27例经FCM/Ig基因重排可确诊(符合率为96.4%)。结论 FCM免疫表型联合Ig基因重排在对B-NHL诊断和分型方面有较高的应用价值,尤其适用于细针穿刺小标本,但对富于T细胞性大B-NHL和淋巴瘤结内非弥漫性病变的病例诊断意义不大。

儿童急性B淋巴细胞白血病中相关融合基因检测结合BIOMED-2标准化Ig基因重排的应用研究

目的:探讨ALL相关基因检测与BIOMED-2标准化Ig基因重排技术在儿童B-ALL诊治中的应用以及两者的之间的相关性。方法:采用ALL相关基因检测试剂盒与BIOMED-2系统引物,分别进行RNA/DNA的多重PCR扩增,并应用RQ-PCR进行荧光检测及PCR片段分析法进行Ig基因重排的克隆性分析。结果:251例B-ALL患儿中TEL-AML1^+77例,E2A-PBX1^+28例,MLL-AF4^+10例,BCR-ABL^+11例,总阳性率为50.2%;IgH V_H-J_H重排阳性率为82.5%,IgK重排阳性率为53.4%。融合基因与基因重排的联合检出率为99%。E2A-PBX1^+组及MLL-AF4^+组中Ig H及Ig K分别与阴性对照组相比,其中Ig K阳性率的差异具有统计学意义(P<0.001及P=0.005)。对105例融合基因阳性患者同时检测染色体荧光原位杂交,其阳性符合率均大于94%。结论:ALL相关融合基因筛查与BIOM ED-2标准化Ig基因重排技术相结合,不仅可以大大提高在儿童B-ALL的检出率,还可以对疾病预后进行较为精确地分组,同时相对于染色体FISH检测更加快速灵敏。

SET-NUP214融合基因阳性儿童白血病/淋巴瘤Ig/TR基因重排模式及其临床特征

为分析3例少见SET-NUP214融合基因阳性儿童免疫球蛋白和T细胞受体基因(Ig/TR)重排模式及其临床特征,采用逆转录巢式聚合酶链反应(RT-nested PCR)检测SET-NUP214融合基因表达;采用欧洲BIOMED-2协作组设计的多重PCR体系,分析Ig/TR重排模式,并根据连接区序列设计特异性引物监测微小残留病(MRD)。结果表明,在mRNA水平3例患儿融合基因的融合位点位SET基因的第7外显子和NUP214基因的第18外显子之间。3例患儿分别诊断为混合表型急性白血病(MPAL,患儿1)、急性T淋巴细胞白血病(T-ALL,患儿2)和Ⅳ期T淋巴母细胞淋巴瘤(T-LBL,患儿3)。患儿1治疗反应极差,在造血干细胞移植后6个月复发;患儿2在诱导缓解治疗结束时(第33天)MRD>10-2,提示预后较差,在巩固治疗期死于中毒性表皮坏死溶解症导致的严重感染;患儿3在第15天时即获得血液学完全缓解(CR),第33天时MRD转阴,CR已30个月。3例患儿均检出TR基因克隆性重排,患儿1和患儿3检出TRD、TRG、TRB基因重排;患儿2只有TRD、TRB基因重排,还检出IgH以及IgKKde重排。3例患儿共检出6个TRB基因重排,均为不完全重排;TRD、TRG基因重排中,85.7%(6/7)为完全重排,14.3%(1/7)为不完全重排。结论:SET-NUP214+白血病/淋巴瘤细胞发生恶性转化的阶段可能在TRG、TRD基因重排之后、TRB基因重排开始不久。患儿1、患儿2的肿瘤细胞的不成熟程度较高,可能与预后或治疗反应差存在一定相关性。

BIOMED-2标准化Ig基因重排在多发性骨髓瘤中的应用研究

目的探讨BIOMED-2标准化Ig基因重排技术在多发性骨髓瘤（MM）诊治中的应用以及采用PCR片段分析毛细管电泳法（简称毛细管电泳法）进行克隆性检测的意义。方法选取2009年至2013年167例MM患者骨髓标本，以20例反应性浆细胞增多症患者骨髓标本作为对照，采用BIOMED．2系统引物，进行多重PCR扩增并采用毛细管电泳法进行Ig基因重排的克隆性分析。结果①167例MM患者中IgHVH-JH重排阳性者107例，阴性者60例，两组患者中IgHDH-JH重排发生率差异有统计学意义（14．0％对30．0％，P=0．013）；121例（72．4％）患者存在IgK重排。IgHVH-JH、IgHDH-JH、IgK联合检查，阳性检出率为94．6％。对照组Ig基因重排检测结果均为阴性。②琼脂糖电泳法结果示167例MM患者中9例（5．4％）患者IgH重排基因克隆性阳性，而毛细管电泳法结果则示为多克隆重排。③53例MM患者同时进行Ig基因重排检测和染色体荧光原位杂交IgH检测，两种方法的IgH阳性检出率差异有统计学意义（67．9％对49．1％，P=0．049）。结论IgHVH-JH、IgHDH-JH、IgK联合检测可大大提高MM患者Ig基因重排克隆性的检出率，尤其对于IgHVH-JH重排阴性者IgHDH-JH重排的补充检测尤为重要。基因重排检测采用毛细管电泳法可有效地区分单克隆、多克隆和寡克隆。Ig基因重排检测较染色体荧光原位杂交技术的IgH阳性检出率高。应用BIOMED-2标准化Ig基因重排技术检测对于MM的诊断有指导意义。

免疫球蛋白基因重排在B细胞非霍奇金淋巴瘤诊断中的意义

目的探讨骨髓及外周血免疫球蛋白(Ig)基因重排在B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)诊断中的临床意义。方法采用多重聚合酶链反应(mPCR)技术并根据BIOMED-2引物系统对103例B-NHL患者及20例反应性淋巴组织增生患者骨髓及外周血标本基因组DNA进行扩增,对PCR产物进行IgH、IgK基因重排的克隆性分析。结果103例B-NHL患者中IgH和IgK单克隆重排阳性率分别为41.7%和50.5%,IgH和IgK联合检出率为64.1%。59例慢性淋巴细胞白血病(CLL)/小B细胞淋巴瘤(SLL)患者中共检出Ig基因单克隆重排49例(83.1%);除CLL/SLL以外的其他44例B-NHL患者中有17例(38.6%)检出Ig基因单克隆重排,而在20例反应性淋巴组织增生患者中均未检出。70例B-NHL患者外周血标本Ig基因重排检出率与骨髓标本之间的差异无统计学意义(45.7%vs 54.3%,χ2=1.03,P=0.31);26例CLL/SLL患者外周血Ig基因重排率与骨髓标本之间的差异无统计学意义(69.2%vs 80.8%,χ2=0.92,P=0.34);44例非CLL/SLL患者外周血Ig基因重排率与骨髓标本之间的差异亦无统计学意义(31.8%vs 38.6%,χ2=0.45,P=0.50)。结论Ig基因重排可用于B-NHL的临床诊断,外周血与骨髓Ig基因重排检测具有同等的诊断价值。

儿童急性祖B淋巴细胞白血病Ig和TCR基因重排的特征及其临床意义

目的探讨儿童急性祖B淋巴细胞白血病(ALL) Ig和TCR基因重排与临床特征的关系及其对预后的影响。方法纳入2003年4月至2009年12月首都医科大学附属北京儿童医院血液肿瘤中心收治的祖B-ALL患儿,采用多重PCR联合异源双链电泳及测序方法检测IgH、IgK、IgL、TRD、TRG和TRB基因重排,其中单克隆、双克隆和寡克隆重排为阳性组,多克隆和未重排者为阴性组;各标志阳性组中根据基因克隆特性分为单克隆亚组和双/寡克隆亚组。采用卡方检验比较阳性组和阴性组临床特征的差异; Kaplan-Meier生存分析比较阳性组和阴性组、单克隆和双/寡克隆亚组无事件生存率(EFS)的差异。结果 40例祖B-ALL患儿进入本文分析,均检测到至少1种Ig或TCR克隆性重排,IgH、IgK和IgL的检出率依次为90.0%、32.5%和10.0%;跨系TCR基因重排的比例为72.5%,TRD、TRG和TRB的检出率分别为52.5%、30.0%和17.5%。TRD基因单克隆性重排比例最高(95.2%),主要为Vδ-Dδ和Dδ-Dδ不完全重排。TRD基因重排阳性患儿白血病细胞表达CD22的频率显著低于未重排者。MLL基因重排阳性患儿未检测到TRB基因重排。各标志重排阳性组与阴性组泼尼松反应、微小残留病水平及预后差异均无统计学意义。IgH双/寡克隆亚组患儿EFS显著低于IgH单克隆亚组患儿,5年EFS分别为(58.8±12.3)%和(84.2±8.4)%,P=0.044。结论祖B-ALL患儿TRD基因重排与CD22表达相关,IgH单克隆性重排患儿的预后优于双/寡克隆性重排者。

淋巴系恶性肿瘤的基因重排

淋巴系恶性肿瘤是淋巴系统造血细胞分化早期的克隆性增生,其最可靠的基因标志是细胞表面的免疫球蛋白(Ig)基因和T细胞受体(TC)基因发生重排。本文就淋巴系恶性肿瘤的Ig和TCR基因重排以及用Ig和TCR基因检测残留淋巴系白血病的研究进展作一综述。

BIOMED-2标准化基因重排检测在非霍奇金淋巴瘤诊断中的意义

目的:利用BIOMED-2标准化免疫球蛋白(Ig)/T细胞受体(TCR)基因重排检测非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者骨髓Ig或TCR基因重排,探讨Ig/TCR基因重排在非霍奇金淋巴瘤诊断中的应用意义。方法:从骨髓及石蜡包埋组织(FFPE)标本中提取基因组DNA,采用BIOMED-2系统引物,进行多重PCR扩增并利用PCR片段分析法进行Ig/TCR基因重排的克隆性分析。结果:在235例T细胞非霍奇金淋巴瘤(T-NHL)中,TCRγ和TCRx单克隆重排阳性率分别为57.9%和50.2%,TCRγ和TCRβ的联合检出率为71.9%。在583例B细胞非霍奇金淋巴瘤(BNHL)IgH和IgK单克隆重排阳性率分别为70.7%和69.3%,IgH和IgK的联合检出率为81.6%。套细胞淋巴瘤与滤泡淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤IgH(84.8%对34.0%(P<0.001);84.8%对9.2%(P=0.025)和IgK(75.8%vs 50.9%,P<0.001;75.8%vs 16.1%(P<0.001)重排阳性率差异具有统计学意义。Ig基因重排阳性BNHL患者中,65例(13.7%)患者存在TCR重排阳性。TCR重排阳性T-NHL患者中,未见Ig基因重排阳性。30例弥漫大B细胞淋巴瘤患者FFPE标本有25例(83.3%)检出Ig基因重排,与骨髓标本重排检出率相比较,差异具有统计学意义(P<0.001)。结论:利用BIOMED-2标准化Ig/TCR基因重排检测对于淋巴瘤的诊断有辅助性作用,并且利用序列分析法可提高重排检测的敏感性和特异性,对于淋巴瘤的早期诊断有很高的价值。

Ig/TCR基因重排检测在淋巴系统恶性增殖性疾病诊断及疗效监控中的意义

目的:评估Ig/TCR抗原受体基因重排技术在可疑淋巴系统增殖性疾病中的鉴别诊断意义及其在疾病监控中的作用。方法:使用BIOMED-2多重聚合酶链反应技术,检测405例患者的515份样本,分析受体基因重排结果,并与其最终诊断及疾病状态的相关性进行分析。结果:在确诊的118例淋巴细胞增殖性疾病中,共有82例标本(69.5%)检测到单克隆抗原受体基因重排,其中多发性骨髓瘤78.6%(11/14),急或慢性淋巴细胞白血病74.4%(29/39),非霍奇金淋巴瘤骨髓浸润65.7%(23/35),非霍奇金淋巴瘤病理确诊组织样本63.3%(19/30)。组织标本阳性检出率明显高于骨髓标本(50.0%∶12.5%,P<0.05)。对部分初诊时抗原受体基因重排阳性,但治疗后达完全缓解的患者进行随访发现,达到完全缓解的患者骨髓均未检测出单克隆性抗原受体基因重排。不伴骨髓浸润的非霍奇金淋巴瘤的58份骨髓标本和非淋巴系统增殖性疾病的204份样本,均未发现单克隆性抗原受体基因重排(特异性100%)。结论:抗原受体基因重排单克隆检测对淋巴系统增殖性疾病的诊断、鉴别诊断及治疗后疗效评价有重要意义。

脾脏原发性非霍奇金淋巴瘤1例报告及文献复习

目的通过对一疑难病例的分析从而提高对脾原发性非霍奇金淋巴瘤的诊断水平及改善其疗效。方法整理收集1例疑难病例的临床资料及病理诊断结果,记录其疗程及疗效并结合相关文献进行回顾分析。结果该病例影像学检查示脾进行性肿大,腹腔、纵膈均未见淋巴结肿大;骨穿示正常骨髓象及病理活检提示无明显异常;生化肿瘤指标无异常。免疫组化:CD 20(+++),CD 79a(+++),bcl-2(-);基因重排检测IgK可见单克隆性重排,IgH?IgL未见克隆性重排。结论患者为原发脾脏边缘区B细胞型非霍奇金淋巴瘤(splenic marginal zone lymphoma,SMZL)。脾脏原发性非霍奇金淋巴瘤的确诊须综合影像学、病理组织形态、免疫组化及Ig基因重排检测,脾切除有助于明确诊断,也是有效治疗手段。

以Ig／TCR基因重排为靶目标检测微小残留白血病的研究进展

微小残留白血病（MRD）是引起白血病复发的主要原因，准确检测MRD对判断预后、评价疗效、监测复发和指导治疗都具有十分重要的意义。免疫球蛋白／T细胞抗原受体（immunoglobulin／T cell receptor，Ig／TCR）基因重排具有高特异性和高发生率，是检测白血病MRD的分子基础。目前，国际上已建立了基于Ig／TCR基因重排、多中心、大样本、结合临床的实时定量聚合酶链反应监测标准，为临床上判断MRD水平并据此确定治疗方案提供了指导。本文就近年来以Ig／TCR基因重排作为MRD检测靶目标的研究进展作一综述。

黏膜相关淋巴组织淋巴瘤诊断进展

黏膜相关淋巴组织(mucosa-associated lymphoid tissue,MALT)淋巴瘤是起源于生发中心后边缘区记忆B细胞,常发生于黏膜获得性淋巴组织的淋巴瘤。MALT淋巴瘤组织学形态多样,缺乏特异性的免疫表型,诊断较困难,目前主要采用排除性的诊断方法。随着分子病理学技术快速发展,鉴别诊断手段日益增多,如采用PCR技术检测MALT淋巴瘤Ig基因重排,荧光原位杂交技术检测MALT淋巴瘤中Ig H基因断裂以及t(11;18)(q21;q21)、t(1;14)(p22;q32)、t(14;18)(q32;q21)、t(3;14)(p14;q32)4种独特的染色体改变等。该文对MALT淋巴瘤的病因学、临床病理学特征、遗传学特征等研究进展进行综述,探讨其对MALT淋巴瘤诊断及鉴别诊断、治疗和预后判断的临床意义。

19例初发多发性骨髓瘤MICM分型分析

目的探讨多发性骨髓瘤(MM)患者MICM分型的特征及应用价值。方法对19例初发多发性骨髓瘤患者的MICM进行回顾性分析。结果骨髓形态学显示,幼稚+成熟浆细胞比例为2.5%~75.5%;多参数流式分析异常浆细胞比例为1.4%~32.8%。抗原阳性表达比例分别为CD138 100%,CD38 100%,CD56 63.1%,CD117 42.1%,CD130%,CD33 26.3%,CD20 5.2%,CD22 0%,CD10 0%,CD19 0%。免疫球蛋白胞浆限制性表达,其中Cκ9例,Cλ10例。免疫固定电泳显示Ig G+κ型4例,Ig A+κ型2例,Ig G+λ型4例,Ig A+λ型1例,。Ig基因重排分析IGH FR1-JH重排阳性者8例,IGH FR2-JH重排阳性者11例,IGH DH-JH重排阳性者2例,IGK Vk-Jk重排阳性者11例,IGK Vk-Kde+intron-Kde重排阳性者8例。结论 MICM分型,对患者治疗方案选择及预后的判断均具有临床价值。