PBC患者中医证型、EB病毒壳抗原IgA抗体表达情况与临床特征及病理分期的研究

目的:分析原发性胆汁性胆管炎(PBC)患者中医证型及EB病毒壳抗原IgA抗体(EB VCA-IgA)阳性表达情况,了解不同证型与EB病毒(EBV)感染对PBC患者病情影响及其与病理分期的关系。方法:分析2019年12月至2022年6月于江苏省中医院感染科住院的87例PBC确诊患者的临床资料,采集患者的症状体征等四诊资料进行辨证分型。同时行肝穿刺活组织检查、完善实验室检查包括血清EB VCA-IgA等检测。根据血清EB VCA-IgA是否阳性表达,将患者分为EB VCA IgA(+)组和EB VCA IgA(-)组,比较两组患者临床及病理资料差异。同时分析患者中医证型与血清EB VCA-IgA阳性表达、肝脏病理分期的关系。结果:气阴两虚证组中肝脏病理为进展期的EB VCA IgA(+)患者比例较肝郁脾虚证组显著升高(P<0.05)。与EB VCA IgA(-)组患者比较,EB VCA-IgA(+)组患者血清IgG、IgA水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。肝脏病理为进展期、炎症活动等级较高(G3)EBV VCA-IgA(+)患者比率高,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析提示,中医证型为气阴两虚、肝脏病理分期为进展期、高IgG、高IgA水平是影响PBC患者EB VCA-IgA阳性表达的独立危险因素。结论:气阴两虚证PBC患者存在更严重的肝脏炎症及纤维化,更易合并EBV感染;气阴两虚证、肝脏病理进展期、高IgG、高IgA水平是PBC患者EB VCA-IgA阳性表达的独立危险因素。

基于猪流行性腹泻病毒变异毒株重组全长S2蛋白IgA抗体ELISA检测方法的建立及应用

【目的】建立一种猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的IgA抗体ELISA检测方法。【方法】以PEDV流行株CH/HNPJ/2017(MF152604.1)为生物材料,通过RT-PCR扩增出S 2基因(2368—4170 bp),并将其插入到原核表达载体pET-24a中,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,利用IPTG诱导表达,经镍柱纯化。Western blotting验证重组蛋白S2与PEDV阳性血清的反应原性和特异性。将其作为包被抗原,建立一种基于PEDV变异毒株重组全长S2蛋白的IgA抗体ELISA方法,用棋盘法确定该方法的最优检测条件,对其敏感性、特异性和重复性进行测定,并初步应用于130份猪血清和40份猪口腔黏液的检测。【结果】通过RT-PCR方法扩增出S 2基因,成功构建重组表达载体pET-24a-S2,转化大肠杆菌经诱导表达纯化后获得重组S2蛋白。SDS-PAGE结果显示,纯化的S2蛋白条带特异且无杂带;Western blotting试验表明该蛋白与PEDV阳性猪血清具有良好的反应性。ELISA方法反应条件优化结果显示,重组S2蛋白的最佳包被条件为每孔0.5μg、4℃过夜包被;血清最佳反应条件为1∶160稀释,37℃孵育60 min;酶标二抗最佳反应条件为1∶5000稀释,37℃反应30 min;TMB最佳显色时间为室温下10 min。待检样品S/P值≥0.04时为阳性,S/P值≤0.02时为阴性,S/P值介于0.02~0.04之间为可疑。利用本试验建立的ELISA方法检测猪瘟病毒、猪圆环病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪德尔塔冠状病毒标准阳性血清,S/P值均<0.02,显示为阴性,说明该方法具有良好的特异性;将PEDV阳性血清进行640倍稀释时利用该方法检测仍为阳性,说明该方法具有良好的敏感性;利用该方法进行批间批内试验,变异系数均小于8%(在10%以内),表明该方法具有良好的重复性。利用该方法检测保存的130份猪血清,结果与IDEXX IgA抗体检测试剂盒的符合率为90.77%;该方法对40份猪口腔黏液的检测结果表明,阳性检出率为90.0%,阴性检出率为为93.3%。【结论】本研究成功构建pET-24a-S2重组质粒,获得纯度较高的重组S2蛋白,并以此作为包被蛋白建立了基于全长S2蛋白IgA抗体ELISA检测方法。该方法能同时有效检测血清和口腔黏液样本,且敏感性强、特异性高、稳定、重复性好,该方法对PEDV的临床诊断及防控具有重要临床实践意义。

不同厂家PEDV-IgA抗体ELISA检测试剂盒的对比分析

为比较市面上常用PEDV-IgA抗体ELISA试剂盒检测结果之间的相关性,挑选不同厂家生产的3款试剂盒检测了68份母猪初乳及78份免疫前后的后备母猪血清,并对检测结果进行了相关性分析。结果表明:不同试剂盒检测初乳和血清PEDV-IgA抗体结果差异较大,在进行实验室检测时,应注意合理选择试剂盒,并科学地分析和利用实验室检测结果。

化学发光法检测EB病毒衣壳抗原IgA抗体(VCA-IgA)的最佳截断值(肇庆地区)及其在鼻咽癌诊断的价值

目的:本研究旨在探究EB病毒衣壳抗原IgA(VCA-IgA)抗体化学发光法在鼻咽癌高发区(肇庆地区)的最佳截断值.方法:收集2019年1月-2021年12月肇庆市第一人民医院的鼻咽癌患者和正常人血清1583例.根据临床诊断将病例分为正常对照组、鼻咽癌组、鼻咽良性疾病组和其他肿瘤组.采用回顾性分析方法,分别比较不同性别、年龄及组间血清VCA-IgA抗体的水平.并通过绘制ROC曲线,分析EB病毒衣壳抗原IgA(VCA-IgA)抗体化学发光法在肇庆地区的最佳截断值.结果:鼻咽癌患者VCA-IgA水平显著高于正常人组、鼻咽良性疾病组和其他肿瘤组(P<0.05);在正常人群中,男性VCA-IgA水平显著高于女性(P<0.05),年龄大于40岁的人群中,男性的鼻咽癌患病率显著大于女性(p<0.05);VCA-IgA水平随年龄增长而升高,且男性患病率与年龄成正相关(P<0.05);鼻咽癌各分期之间的VCA-IgA水平比较无显著差异;当截断值为4AU/mL时,其诊断的灵敏度为82.35%,特异性为80.96%,当截断值为4.42 AU/ml时,约登指数最大,其诊断的灵敏度为82.35%,特异性为83.12%.结论:NPC患者血清VCA-IgA水平明显升高,VCA-IgA是诊断鼻咽癌的良好指标;肇庆地区大于40岁的中老年男性是鼻咽癌高危人群,应对这类VCA-IgA阳性人群重点关注,增加随访频次.4.42AU/mL应作为肇庆地区VCA-IgA新的截断值,这将提高其对于鼻咽癌的诊断效能.

肺炎支原体特异性IgA抗体检测的临床意义

为探讨肺炎支原体特异性IgA抗体在肺炎支原体感染患儿中的临床意义 ,采用酶联免疫吸附试验 (ELISA)对296例临床疑诊肺炎支原体肺炎患儿进行特异性抗体MP -IgA检测 ,并与同时采用日本富士明胶颗粒凝集法测定的特异性MP -IgM抗体比较 ;对其中57例进行了为时2月～5.5月随访。结果显示 ,MP -IgA与MP -IgM测定结果高度一致 ,其阳性率随MP -IgM滴度上升及病程延长而增加 ,而MP -IgM滴度大部分在感染后3个月左右下降 ,部分持续时间较久 ;在呼吸道感染患儿中 ,MP -IgA阳性率增加明显 ,而MP -IgM下降速度显著减慢。结果表明 :MP特异抗体IgA测定对提高MP感染诊断的敏感性。

EB病毒VCA-IgA抗体及病毒DNA载量在系统性红斑狼疮患者中的表达

目的:检测EB病毒VCA-IgA抗体及病毒DNA载量在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血中的表达,探讨EB病毒与SLE的相关性。方法:分别采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法和实时定量PCR方法检测EB病毒VCA-IgA抗体和EB病毒DNA载量。同时分析EB病毒VCA-IgA抗体与SLE患者的实验室指标抗Sm抗体、抗dsDNA抗体、补体C3和C4的相关性。结果:248例SLE患者中,49例EBV-VCA-IgA抗体阳性,167例健康对照者中12例阳性,SLE患者阳性率明显高于健康对照者(19.8%vs7.2%;P<0.001);SLE患者EB病毒载量也明显高于健康对照者。EB病毒VCA-IgA抗体阳性与抗Sm抗体、抗dsDNA抗体、补体C3和C4不相关。结论:EB病毒感染与SLE相关,EB病毒VCA-IgA抗体阳性者有较高的DNA载量,SLE的发病危险性亦高,EB病毒重新活化与SLE活动有关。

抗α-胞衬蛋白多肽IgA抗体对干燥综合征的诊断价值

目的以α-胞衬蛋白(α-Fodrin)多肽为抗原,采用ELISA检测干燥综合征(Sjgren's syndrome,SS)患者血清抗α-Fodrin多肽IgA抗体(α-Fodrin-derived polypeptide antibody,αF5-IgA),并分析其与SS临床表现和其他实验室指标的关系。方法以固相法合成的α-Fodrin 37-59多肽(αF5)为包被抗原,ELISA定量检测169例原发性干燥综合征(primary Sjgren's syndrome,pSS)、31例继发性干燥综合征(secondary Sjgren syndrome,sSS)、221例其他结缔组织病患者及88名健康对照者血清抗α-Fodrin37-59多肽IgA(αF5-IgA)抗体水平,并分析其与SS患者临床表现及自身抗体、IgG、IgA、血沉及血常规等的相关性。结果 ELISA定量检测抗αF5-IgA抗体,pSS和sSS组的阳性率分别为73.4%和64.5%,而类风湿关节炎、系统性红斑狼疮和健康对照组的阳性率分别是27.3%、17.8%和2.3%,抗αF5-IgA抗体在SS患者的阳性率显著高于其他结缔组织病患者及健康对照组(χ2=114.5～234.1,P<0.01)。抗αF5-IgA抗体对SS诊断的特异性为86.1%,在抗SSA、抗SSB抗体和ANA阴性的pSS患者中,抗αF5-IgA抗体的阳性率分别为48.9%、46.6%和57.1%。抗αF5-IgA抗体阳性pSS患者的肾脏受累率高于抗αF5-IgA抗体阴性患者(χ2=3.0,P<0.05)。抗αF5-IgA抗体阳性pSS患者IgG、IgA升高,血沉增快,白细胞与血小板下降的概率明显高于抗体阴性的患者(χ2=17.9～73.5,P<0.05)。结论 ELISA法可用于检测SS患者血清抗αF5-IgA抗体,该抗体为诊断SS较为特异的自身抗体之一,且抗αF5-IgA抗体对其他自身抗体阴性的SS的诊断有参考意义。

特异性IgA抗体:心脑血管病慢性肺炎衣原体感染的标志

目的 :探索心脑血管病慢性肺炎衣原体 ( CP)感染的血清学证据。 方法 :采用 Micro- IF检测血清特异性CP抗体。 结果 :发现约 37%心脑血管病患者血清特异性 CP- Ig A抗体水平升高 ,与献血员组 ( 3% )比差异非常显著 ( P<0 .0 1) ;特异性 CP- Ig G、CP- Ig M抗体阳性率与献血员组无显著差异 ( P>0 .0 5 )。 结论 :CP特异性 Ig A抗体与 CP慢性感染相关 ,是慢性 CP感染的标记物 ,可应用于心脑血管病慢性 CP感染 (带毒 )

乳汁中猪流行性腹泻IgA抗体间接ELISA方法的建立

为建立检测母猪乳汁中猪流行性腹泻病毒(PEDV)IgA抗体的间接ELISA方法,研究以PEDV重组N蛋白和纯化全病毒作为包被抗原,方阵滴定法优化反应条件,建立了两种检测猪乳汁中PEDV IgA抗体的间接ELISA方法。结果显示,重组N蛋白和纯化全病毒的最佳包被抗原浓度均为2μg/mL,检测样品最佳检测稀释度分别为1∶10和1∶30,重复性试验的变异系数均小于10%,PEDV阳性乳汁的最低检测稀释倍数分别为1∶320和1∶960,对猪传染性胃肠炎病毒、猪伪狂犬病病毒等阳性乳汁均无交叉反应性,两种方法对临床样品检测符合率为97.48%。表明两种方法均具有良好的敏感性、特异性和重复性,可用于检测和评价乳汁中特异性PEDV IgA抗体的水平。

血清唾液酸和EB病毒壳抗原IgA抗体检测在喉部肿瘤诊断中的临床价值

目的探讨血清唾液酸(SA)和EB病毒壳抗原IgA(VCA-IgA)抗体检测在喉部肿瘤诊断中的临床价值。方法选取2014年2月-2019年1月广元市中心医院的经临床病理检查确诊为喉部恶性肿瘤患者85例设为恶性组,将同期经临床病理检查确诊为喉部良性病变患者85例设为良性组,对所有患者均行SA和VCA-IgA抗体检测,比较两组SA、VCA-IgA抗体水平,以ROC曲线分析SA、VCA-IgA抗体检测及其两者联合对喉部肿瘤良恶性的诊断价值,比较恶性组不同TNM病理分期、不同预后结局患者SA、VCA-IgA抗体水平差异。结果恶性组SA、VCA-IgA抗体水平明显高于良性组(P<0.05);ROC曲线分析结果显示,SA、VCA-IgA抗体检测及其两者联合对喉部肿瘤良恶性均具有一定的诊断价值(P<0.05),且SA联合VCA-IgA抗体检测的AUC大于单一的SA、VCA-IgA抗体检测,差异均具有统计学意义(P<0.05);对恶性组85例患者进行病理TNM分期,其中Ⅰ期25例,Ⅱ期34例,Ⅲ期19例,Ⅳ期7例,结果显示,Ⅰ期SA、VCA-IgA水平低于Ⅱ期,Ⅱ期SA、VCA-IgA水平低于Ⅲ期(P<0.05),Ⅲ期、Ⅳ期SA、VCA-IgA水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);病情进展组SA、VCA-IgA水平均高于无进展组(P<0.05)。结论SA和VCA-IgA抗体检测对鉴别喉部肿瘤良恶性均具有一定的诊断价值,且SA联合VCA-IgA抗体检测的诊断效能大于单一指标检测;不同病理TNM分期患者体内SA、VCA-IgA抗体水平存在差异,SA、VCA-IgA抗体水平检测对患者预后结局具有一定预测价值。

抗毒化浊方对EB病毒感染后衣壳抗原IgA抗体和早期抗原-IgA抗体的影响

目的观察抗毒化浊方治疗EB病毒感染疗效及对衣壳抗原IgA抗体(VCA-IgA)和早期抗原-IgA抗体(EA-IgA)的影响。方法将80例EB病毒感染患者随机分为2组,对照组40例给予更昔洛韦治疗,观察组45例在此基础上加用抗毒化浊方治疗,统计2组患者症状体征缓解时间及近期疗效、VCA-IgA和EA-IgA转阴率,观察2组治疗前后VCA-IgA、EA-IgA、T淋巴细胞亚群、自然杀伤细胞(NK)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-2(IL-2)及IL-6水平变化情况。结果观察组退热时间、咽痛缓解时间、扁桃体肿大缓解时间及颈淋巴结肿大缓解时间均显著短于对照组(P均<0. 05);治疗后2组VCA-IgA、EA-IgA、TNF-α及IL-6水平均显著降低(P <0. 05),IL-2水平显著提高(P <0. 05),且观察组以上指标改善情况均显著优于对照组(P均<0. 05);对照组治疗前后CD3+、CD4+、CD4+/CD8+及NK细胞水平比较差异无统计学意义(P均> 0. 05),观察组治疗后以上指标水平均显著高于对照组(P <0. 05);观察组近期治疗总有效率、VCA-IgA和EA-IgA转阴率均显著高于对照组(P <0. 05)。结论抗毒化浊方治疗EB病毒感染患者可有效加快病情康复进程,促进VCA-IgA和EA-IgA转阴,具有抗炎、改善免疫系统功能作用。

不同人群血清巨细胞病毒和单纯疱疹病毒特异性IgA抗体的测定

不同人群血清巨细胞病毒和单纯疱疹病毒特异性ＩｇＡ抗体的测定郭永建ＣＡＨａｒｔ①福建医科大学临床微生物学教研室（福州３５０００４）①英国利物浦大学医学院医学微生物教研室为探讨免疫机能健全人群血清中的ＣＭＶ—ＩｇＡ的存在率与消长情况及ＣＭＶ和ＨＳＶ复...

不育症及反复自然流产患者血清抗弓形虫IgA抗体的检测及其意义

目的 :检测不育症及反复自然流产患者血清抗弓形虫IgA抗体并探讨其临床意义。方法 :用ELISA间接法分别检测不育症、反复自然流产患者及健康孕妇血清抗弓形虫IgA、IgM抗体。结果 :不育症组抗弓形虫IgA、IgM抗体的检出率分别为18.4 %和21.1 %,反复自然流产组抗弓形虫IgA、IgM抗体的检出率分别为35.7 %和38.1 %,均显著高于正常对照组5.8 %和7.3 %(P<0.01)。两类抗体检出率之间无显著性差异(P>0.05)。结论 :对不育症及反复自然流产患者同时进行特异IgA、IgM抗体的检测 ,可显著提高急性弓形虫感染的检出率。对临床急性弓形虫感染的早期诊断和疗效观察具有重要意义。

用重组Epstein-Barr病毒早期蛋白P83为抗原检测鼻咽癌病人血清中IgA抗体

以重组EB病毒早期蛋白P83为抗原,用Western blot检测了135份鼻咽癌病人和100份正常人血清中IgA/P83抗体,阳性率分别为96％和0,以常规的间接免疫酶法检测这两种血清中IgA/EA抗体,阳性率分别为71％和0。IgA/P83抗体的几何平均滴度较IgA/EA高4倍以上。这表明,用Western blot查IgA/P83敏感、特异,可替代用间接免疫酶法查IgA/EA用于鼻咽癌的早期诊断。

汉坦病毒重组蛋白检测血清中特异性IgA抗体动态变化的研究

目的探讨重组蛋白检测血清中特异性IgA抗体的动态变化及其诊断价值。方法用杆状病毒表达的汉坦病毒重组核蛋白(rNP)和糖蛋白(rGP)为抗原,检测14例61份急性期SEO型病人系列血清中的特异性IgA抗体,寻找肾综合征出血热(HFRS)病人IgA抗体的动态变化规律。结果几乎所有HFRS病人早期即有强烈的IgA应答,尤其是针对rNP的抗体出现早且滴度高,抗rGP出现亦早,但滴度偏低。结论应用rNP和rGP为抗原,在发病早期检测IgA抗体,具有较好的特异性诊断价值,特别是对HFRS早期临床表现不典型的病例。

两种检测EB病毒衣壳抗原IgA抗体的酶联免疫吸附试验试剂盒性能比较

人体感染EB病毒（EBV）后会产生多种抗体,EBV衣壳抗原IgA抗体（VCA-IgA）是其中一种,使用酶联免疫吸附试验（ELISA）法可以检测出其存在与否[1,2],但市场上检测VCA-IgA的ELISA试剂盒多种多样。临床实验室所选择的试剂盒由于供货、招标或其他因素等有时需要更换试剂盒,

猪流行性腹泻病毒IgA抗体间接ELISA方法的建立

为建立检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)血清特异性IgA抗体的间接ELISA方法,本研究利用融合PCR的方法,将PEDV G2型LNct2a株S蛋白的S1基因片段与人源IgG分子的Fc基因片段融合,克隆于真核表达质粒pAAV-IRES-hr GFP中,构建真核表达质粒pAAV-LNCT2-S1-Fc并转染293T细胞,表达并纯化了S1蛋白。以纯化的S1蛋白作为包被抗原,以羊抗猪IgA-HRP为二抗,通过优化反应条件,建立了检测PEDV G2型特异性IgA抗体的间接ELISA方法,并对该方法进行了特异性、敏感性及重复性试验。特异性试验结果显示该方法对猪传染性胃肠炎病毒、轮状病毒、猪德尔塔冠状病毒和圆环病毒的阳性血清均无交叉反应;敏感性试验结果显示该方法能够检测出400倍稀释的阳性血清;批内和批间重复性变异系数均小于10%。利用该间接ELISA方法和间接免疫荧光方法(IFA)同时对临床样品检测,结果显示二者总符合率为98.6%。本研究建立的ELISA方法特异性强、敏感性高、重复性好,能够用于检测及评价血清中PEDV特异性IgA抗体的水平,为PEDV流行情况及免疫效果评价提供了有效的手段。

IgA抗体的结构、功能与调控

IgA抗体是介导机体粘膜免疫的主要因子,其在粘膜分泌物中能有效地阻止外界抗原(包括可溶性抗原、病原微生物以及存在于食物中的致癌物质)附着或侵入粘膜上皮,从而避免这些外来物给机体造成损伤,保持机体粘膜完整并避免胃肠道疾病、呼吸道疾病及泌尿生殖道各种疾病的发生。为了能有效地利用IgA抗体的免疫保护功能,解决诸多困扰人类的粘膜性疾病,前人从很多方面对IgA抗体做了大量的研究,得到很多有意义的结果。本文试图总结这些研究成果,结合最新的研究进展,对IgA抗体的结构、功能及调控等进行评述。

基于单克隆抗体捕获的猪血清和乳汁中PEDVIgA抗体间接ELISA方法的建立和评估

为快速准确地评价猪血清和乳汁中猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)IgA抗体水平,本研究从4株PEDV单克隆抗体中筛选得到1株可高效捕获PEDV全病毒粒子(灭活的病毒细胞培养原液)的特异性IgG单克隆抗体8A3,将其用作检测孔内的包被抗体以捕获病毒粒子制备抗原板,从而建立了用于检测母猪血清和乳汁中PEDV特异性IgA抗体的间接ELISA方法。该方法中,单克隆抗体8A3的最适包被浓度为6.0μg/mL,阴性判定临界值(D450 nm)为0.34,且在检测中不与常见的猪病毒阳性血清反应。与传统的免疫过氧化物酶单层检测(immuno-peroxidase monolayer assay,IPMA)相比,所建立的ELISA方法检测阳性和阴性血清的符合率分别为98.7%(152/154)和98.0%(145/148);检测初乳和乳汁样品的阳性和阴性符合率分别为100%(60/60)和95.8%(23/24);检测初乳和泌乳期样品中的IgA水平与中和效价的趋势高度相关(kappa=0.835)。本研究建立的检测PEDV IgA的间接ELISA方法灵敏度、敏感性和特异性与传统方法高度一致,可简化检测步骤,适用于大规模评价临床样本乳汁和血清中PEDV IgA抗体的快速检测。