淋球菌IgA蛋白酶基因中和表位片段的克隆、表达和鉴定

目的 克隆和表达编码淋球菌IgA蛋白酶中和表位的基因。方法 通过PCR扩增淋球菌IgA蛋白酶编码基因 16 0 1～ 2 72 2位序列 ,克隆后在大肠杆菌中表达 ,表达产物用重组淋球菌IgA蛋白酶免疫血清作Western印迹。并用表达产物免疫小鼠血清与产IgA蛋白酶的标准菌株培养上清作用 ,观察免疫血清对酶活性的影响。结果 所克隆的基因在大肠杆菌中获得高效表达 ,表达产物能与重组淋球菌IgA蛋白酶免疫血清反应 ,表达产物的免疫血清能中和淋球菌IgA蛋白酶的活性。结论 所克隆的基因序列中含有淋球菌IgA蛋白酶的中和表位 。

抗淋球菌IgA蛋白酶单克隆抗体的研制

抗淋球菌ＩｇＡ蛋白酶单克隆抗体的研制白光春，马文煜，李元，许福明，肖毅，李别虎，张海（第四军医大学微生物学教研室，西安７１００３２）淋球菌感染所引起的淋病是一种常见的性传播疾病（ＳＴＤ）。近年来，广泛存在的耐药性使淋病的治疗遇到了新的问题。由于淋球菌...

ELISA阻断法快速检测淋球菌IgA蛋白酶

ＩｇＡ蛋白酶是近年发现由少数细菌所分泌的一种胞外酶。本文选取淋球菌临床标本，建立ＥＬＩＳＡ阻断法快速检测ＩｇＡ蛋白酶。实验中采集了历份急性淋病患者的临床分离标本，制成悬液后对其上清进行检测，结果有１４份标本ＩｇＡ蛋白酶阳性，其它对照菌皆为阴性。取其中一份菌种上清作倍比系列稀释，ＩｇＡ蛋白酶阳性的最高稀释度为１：８，表明此法可简便、敏感、快速检测淋球菌ＩｇＡ蛋白酶。

抗淋球菌IgA蛋白酶单克隆抗体特性的初步研究

本文对以重组淋球菌ＩｇＡ蛋白酶为抗原制备的７株特异性ＭｃＡｂ的特性进行了初步研究。结果有５株（１Ｃ８、１Ｅ５、１Ｆ１１、１Ｇ３和２Ｅ６）能中和淋球菌ＩｇＡ蛋白酶活性。经相加试验初步证明，其中１Ｆ１１、１Ｇ３与其它３株ＭｃＡｂ的作用位点不同。因此，淋球菌ＩｇＡ蛋白酶至少存在３个中和表位。

利用IgA蛋白酶β结构域为骨架构建细菌表面展示随机肽库

以IgA蛋白酶β结构域为骨架构建细菌表面展示随机肽库。设计合成两条寡核苷酸双链,链1含有一个随机编码序列(NNK)10,其3'端可与链2互补。通过两条链的退火、延伸、酶切、回收后与酶切、去磷酸化的载体以最佳连接比连接,采用酚∶氯仿抽提去除残留的连接酶,分批进行电转化,获得一库容量为5×106的随机肽库。随机挑选10个克隆进行测序,结果显示所构建肽库的基本框架与预期设计相符,四个寡核苷酸出现的频率也与理论值相接近,表明所构建的随机肽库是成功的。

奈瑟氏淋球菌IgA蛋白酶基因的克隆

IgA蛋白酶(IgA protease)可由多种病原微生物产生并分泌,例如肺炎双球菌(Haemophilus),奈瑟氏菌(Neisseria)等。其中奈瑟氏菌的IgA蛋白酶属于丝氨酸蛋白酶类,其切割底物的核心序列为—ProPro/XxxPro,其中Xxx可以是Thr、Ala和Ser三个氨基酸中任何一种。IgA蛋白酶的切割具有特异、高效的特点,另一突出优点是它可用重组大肠杆菌进行表达制备。

淋球菌IgA蛋白酶免疫学研究的最新进展

淋球菌和脑膜炎球菌的ＩｇＡ蛋白酶在作用原理、抗原特性和基因结构上均有很大的相同性，统称为奈瑟氏菌ＩｇＡ蛋白酶。ＩｇＡ蛋白酶的免疫原性很强，由其诱生的抗体能中和ＩｇＡ蛋白酶的活性。中和活性主要取决于酶的中和表位。本文综述了近年来淋球菌ＩｇＡ蛋白酶的免疫学研究进展。

IgA蛋白酶在IgA肾病治疗中的潜在价值

Ig A肾病（Immunoglobulin A nephropathy,Ig AN）是最常见的原发性肾小球肾炎疾病,但Ig AN的发病机制仍有许多不清楚的地方,其治疗手段也十分有限。由于Ig AN病理发生过程中均存在系膜区Ig A1（galactose-deficient Ig A1,Gd-Ig A1）沉积这一共同特征,Ig A1的系膜区沉积也被认为是疾病肾脏病变的主要原因。

细菌及支原体的IgA1蛋白酶

有些致病菌能分泌IgA1蛋白酶,此酶能特异地将IgA1分子降解成完整的Fab段与Fc段。尽管不同细菌的IgA1蛋白酶在生化特性上各不相同,但在各自的酶分子间也存在相同的抗原表位。细菌基因组间水平性遗传交换导致的IgA1蛋白酶基因的特殊的镶嵌样结构是产生该蛋白酶抗原性存在差异的遗传基础。本文对细菌IgA1蛋白酶及其基因特点和此酶在感染中可能作用方面的研究作一综述。

IgA1蛋白酶的生物学作用

IgA1蛋白酶是由一组病原菌分泌的蛋白水解酶,可以特异水解人类IgA1铰链区一段特殊的多肽序列TPPTPSPSTPPTPSPS,产生Fab、Fc段。近来的研究发现具有和IgA1铰链区特异多肽序列结构相似的蛋白也是IgA1蛋白酶的底物,比如人类溶酶体膜蛋白(LAMP1)、人类绒毛膜促性腺激素(HCG)、TNF-RⅡ、CD8分子和粒-巨细胞刺激因子(GM-CSF)、突触小泡蛋白Ⅱ等,而且IgA1蛋白酶还可以诱导T细胞特异反应,起免疫调剂作用,尤其是刺激促炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8的释放等,这些都反映了该酶在病原体致病机制中有重要作用。同时也有很多研究利用IgA1蛋白酶的生物特性探索新的生物治疗方法。