检测人血清中肺炎球菌10A型荚膜多糖IgG抗体的包被抗原适用性研究

目的 确定用于23价肺炎多糖疫苗免疫后临床血清样本检测的包被用10A型肺炎球菌荚膜多糖(Pn10A)。方法 根据WHO推荐的检测人血清中肺炎球菌荚膜多糖IgG抗体含量的ELISA(PnPSELISA),包被不同来源(ATCC、A公司、B公司、5个公司混合)的10A多糖[Pn10A(ATCC)、Pn10A(A)、Pn10A(B)、Pn10A(mix)],检测38份血清中Pn10AIgG抗体的几何平均浓度(GMC)和相同样本免疫前、后的阳转率(免疫后/免疫前≥2为阳转),确定用于临床血清检测的包被Pn10A。结果 用Pn10A(ATCC)、Pn10A(A)、Pn10A(B)包被检测38份相同样本免疫前、后血清中Pn10AIgG抗体的GMC和阳转率,Pn10A(A)与Pn10A(ATCC)包被的检测结果差异无统计学意义(P>0.05),数据一致性好(r>0.9);Pn10A(B)与Pn10A(ATCC)包被的检测结果差异有统计学意义(P<0.05),数据一致性差(r<0.8);再以Pn10A(A)、Pn10A(ATCC)、Pn10A(mix)包被检测另46份相同样本免疫前、后血清中Pn10AIgG抗体的GMC和阳转率,Pn10A(A)、Pn10A(mix)与Pn10A(ATCC)包被的检测结果差异无统计学意义(P>0.05),数据一致性好(r>0.9),免疫前、后GMC值相近,阳转率相近,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Pn10A(A)、Pn10A(mix)与Pn10A(ATCC)均可以作为包被多糖用于检测人血清中肺炎球菌Pn10AIgG抗体;但从长久使用相同抗原检测大批量临床样本的需求考虑,Pn10A(mix)更具有足量、经济的优势。

2、9N、17F及20型肺炎链球菌荚膜多糖血清IgG抗体定量检测ELISA法的验证

目的验证2、9N、17F及20型肺炎链球菌荚膜多糖血清IgG抗体定量检测ELISA法。方法采用ELISA法检测2、9N、17F及20型肺炎链球菌荚膜多糖血清Ig G抗体含量,并验证该方法的准确性、精密性、特异性、线性、最低检测限及检测范围。结果 3次加标回收测定各型肺炎链球菌多糖IgG抗体回收率为77.47%~99.33%;连续11次测定质控血清2009S、QC5及QC6各型别多糖抗体的CV值为8.97%~18.38%;随着多糖浓度的增高,对抗体的抑制率也增高,呈浓度依赖性,相应其他22型多糖混合物对抗体的抑制率较低;线性R^2均>0.99;2、9N、17F及20型肺炎链球菌荚膜多糖血清IgG抗体的检测限分别为0.630、0.592、0.478及0.594 ng/ml,检测范围分别为0.125~30.6、0.08~19.425、0.104~25.325及0.089~21.825 ng/ml。结论该方法具有良好的准确性、精密性及特异性,可用于肺炎球菌疫苗临床血清的检测。

4、6B、9V型肺炎链球菌荚膜多糖血清IgG抗体定量ELISA检测方法的初步验证

目的 对4、6B、9V型肺炎链球菌荚膜多糖血清IgG抗体定量ELISA检测方法进行初步验证。方法 以国际参考血清007sp为标准,测定4份国际质控血清的4型、6B型及9V型IgG抗体值,绘制标准曲线,确定检测范围、线性（R2）、检测限及定量限;连续测定该4份国际质控血清的4、6B、9V型IgG抗体各10次,计算回收率,验证该方法的准确性;在同一次试验内连续测定3份本室制备的质控血清的4、6B、9V型IgG抗体各10次,计算变异系数（CV）,验证方法的试验内精密性;在不同次试验间连续测定15份质控血清的4、6B、9V型IgG抗体各10次,计算CV值,验证方法的试验间精密性;利用3份本室制备的质控血清进行抑制试验,验证方法的特异性。结果 该方法检测4、6B、9V型IgG抗体的范围分别为0.034～8.325、0.093～22.625和0.066～16.400 ng/ml,R2均大于0.99,检测限分别为0.41、0.64和0.77 ng/ml,定量限分别为1.60、2.66和2.80 ng/ml;该方法检测4份国际质控血清的4、6B、9V型IgG抗体,除96/728和96/770质控血清的4型抗体测定值远远超出理论值外,其他检测结果准确性均良好;该方法的试验内变异系数均小于15%,试验间变异系数绝大多数小于20%;多糖抗原与血清抗体的反应具有特异性,其中,检测4型抗体的特异性最高,检测6B型抗体的特异性略差。结论 该方法的检测范围、线性、检测限和定量限均达到可接受标准,准确性、精密性和特异性良好,可用于肺炎球菌疫苗临床血清的检测。

肺炎链球菌型特异性IgG抗体定量ELISA方法建立与验证

目的建立WHO推荐的肺炎链球菌血清型特异性IgG抗体定量ELISA检测方法。方法参照WHO Pn PS ELISA操作手册,采用ATCC来源肺炎链球菌荚膜多糖4、6B、9V、14、18C、19F、23F型为包被抗原,以007sp为标准血清建立本实验室的人血清中肺炎链球菌血清型特异性IgG抗体定量ELISA检测方法。并用WHO校准血清盘(12/278)和内部质控血清PnG对所建方法准确性、稳定性进行验证。结果确定了4、6B、9V、14、18C、19F、23F共7个血清型荚膜多糖的抗原包被浓度;建立了适用于本实验室的人血清中肺炎链球菌血清型特异性IgG抗体定量ELISA检测方法。12份WHO校准血清的验证结果显示,所测7个血清型IgG抗体中,均有>75%的检测值落在WHO参比实验室赋值的±40%范围之内,总符合率达到86.9%,相关性曲线斜率(slope)=0.94,R2=0.99,达到了WHO规定的室间评价要求。此外,连续20次的内部质控血清PnG的检测结果显示,不同批次检测值的变异系数(CV)均≤15%,达到了WHO规定的室内评价要求。结论本实验室成功建立WHO推荐的检测人血清中肺炎链球菌血清型特异性IgG抗体定量ELISA检测方法,并经验证所建方法结果准确,方法稳定,具备了开展疾病监测与疫苗效果评价应用要求。

09CS中11个血清型肺炎球菌荚膜多糖抗体IgG含量质控检测范围的建立

目的建立09CS中11个血清型(2、8、9N、10A、11A、12F、15B、17F、20、22F、33F)肺炎球菌(pneumococcus,Pn)荚膜多糖抗体IgG含量的质控检测范围。方法将细胞壁C多糖(CPS)分别与Pn22F、Pn25两个型别多糖混合,制备CPS+Pn22F和CPS+Pn25两种样品吸收液,稀释09CS后,ELISA法检测13价肺炎链球菌结合疫苗(pneumococcal conjugate vaccine,13PCV)的13个血清型IgG抗体水平,验证两种吸收液检测结果的一致性。将09CS作为待测血清(用CPS+Pn25稀释),第二代国际肺炎参考血清007sp为标准血清(用CPS+Pn25稀释),第一代国际参考血清89SF为质控血清(用仅含CPS的吸收液稀释),采用ELISA法连续检测待测血清52次,计算11个血清型抗体浓度平均值(GMC)、标准偏差(SD)和变异系数(CV)、U检验中99%置信区间下的正态分布范围。结果 09CS经两种吸收液吸收后,13个型别的检测结果一致性较好,r2=0. 983 5,且差异无统计学意义(P> 0. 05)。11个血清型有效定值异常率均低于20%,异常率最大的型别为Pn20,异常率为17. 3%;各型的CV为7. 55%~12. 86%,均低于15%;Pn2、Pn8、Pn9N、Pn10A、Pn11A、Pn12F、Pn15B、Pn17F、Pn20、Pn22F、Pn33F血清型荚膜多糖抗体IgG含量的质控检测范围分别为18. 56~31. 45、13. 35~26. 61、11. 90~23. 63、14. 23~25. 74、5. 96~8. 84、3. 70~6. 47、23. 89~37. 50、10. 68~16. 90、15. 97~24. 31、10. 63~17. 61、24. 24~47. 55μg/mL。结论建立了09CS中11个血清型Pn荚膜多糖抗体IgG含量的质控检测范围,可应用于Pn疫苗临床血清荚膜多糖抗体IgG含量的ELISA法检测。

肺炎疫苗应用于支气管扩张症及慢性阻塞性肺疾病患者的效果

目的:探究23价肺炎球菌多糖疫苗预防支气管扩张症(支扩)及慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者下呼吸道感染(LRTIs)的有效性以及安全性。方法:ELISA法检测20例支气管扩张症及12例COPD患者,接种肺炎疫苗前后,血清抗肺炎链球菌荚膜多糖IgG抗体含量。随访患者接种疫苗后不良反应情况,以及免疫前后1年各患者病情急性加重情况变化。结果:受试者免疫后抗体总体水平较前升高3.98倍,阳性率为78.13%(25/32例)。亚组分析结果显示,19F血清型免疫前抗体水平女性组较男性组低、免疫后浓度高于男性组,支扩组免疫后抗体浓度显著高于COPD组,23F血清型免疫后支气管扩张组抗体浓度低于COPD组,老年组免疫后抗体水平高于<65岁组,其余各血清型组间对比无明显统计学差异。临床结果显示免疫后下1年住院次数≥2次的人数、抗生素治疗次数、静脉使用糖皮质激素的次数均较免疫上1年明显下降,平均住院天数较上1年无明显统计学差异。结论:对支气管扩张及COPD患者,接种23价肺炎球菌多糖疫苗能有效预防下呼吸道感染,减少抗生素使用、减少住院次数,同时该疫苗具有安全性。

老年人自然免疫状态下抗肺炎链球菌抗体的检测

目的探讨自然免疫状态下血清抗肺炎链球菌荚膜多糖特异性抗体值,为老年人是否需常规使用PPV23免疫提供参考。方法健康人85例(健康组),分为青年、中年、老年组;老年COPD患者18例(COPD组),ELISA检测血清特异性抗体。结果健康组:IgA老年组同中、青年组差异无统计学意义;IgM青年组高于其他两组(P<0.05);总IgG差异无统计学意义,IgG4老年及中年组高于青年组(P<0.05)。IgM浓度与年龄负相关(r=-0.274,P<0.05),IgG4与年龄正相关(r=0.342,P<0.05)。COPD组和健康老年人组差异无统计学意义。结论未发现健康及COPD老年人血清抗肺炎链球菌保护性抗体整体水平低下,不支持该人群常规使用PPV23。