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静注人免疫球蛋白中IgG二聚体含量对IgG Fc段与THP-1细胞表面受体结合能力的影响
1
作者
雷婷婷
张巍
+3 位作者
李长清
叶生亮
杜晞
马莉
《中国输血杂志》
CAS
2023年第2期125-129,共5页
目的研究静注人免疫球蛋白(Intravenous immunoglobulin,IVIG)中免疫球蛋白G(Immunoglobulin G,IgG)二聚体含量对IgG Fc段与THP-1细胞表面受体结合能力的影响。方法利用蛋白纯化技术和高效液相色谱(HPLC)技术,制备不同浓度的IgG二聚体,...
目的研究静注人免疫球蛋白(Intravenous immunoglobulin,IVIG)中免疫球蛋白G(Immunoglobulin G,IgG)二聚体含量对IgG Fc段与THP-1细胞表面受体结合能力的影响。方法利用蛋白纯化技术和高效液相色谱(HPLC)技术,制备不同浓度的IgG二聚体,然后采用直接添加的方式,制备得到含有不同浓度IgG二聚体的IVIG。最后利用本实验室已建立的IgG Fc段与THP-1细胞表面Fc段受体结合能力的检测方法,考察IgG二聚体含量对IgG Fc段与细胞表面受体结合能力的影响。结果当IVIG中IgG二聚体含量为1.11%~10.30%时,其与THP-1细胞表面Fc段受体的结合能力为97.67%~135.33%,且这种结合能力与IgG二聚体的含量呈正相关。当IgG二聚体含量超过13.22%时,IgG Fc段与THP-1细胞表面受体的结合能力与IgG二聚体含量则没有相关性。结论一定浓度的IgG二聚体对IVIG中IgG Fc段与THP-1细胞表面受体的结合能力具有促进作用,但尚需动物实验和临床数据进一步验证。
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关键词
静注人免疫球蛋白(IVIG)
igg二聚体
igg
Fc段
THP-1细胞
受
体
结合能力
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职称材料
人MR1/IgG1Fc二聚体融合蛋白的构建、表达及功能检测
2
作者
赵桂华
龚业莉
翁秀芳
《华中科技大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第5期649-655,共7页
目的构建MR1/IgG1Fc融合蛋白杆状病毒表达载体并使其在昆虫细胞内表达获得MR1/IgG1Fc二聚体,制备人工抗原提呈细胞用于黏膜相关恒定T细胞(MAIT)反应性代谢物及MAIT细胞功能调控研究。方法从人外周血单个核细胞中扩增β2m编码基因。商业...
目的构建MR1/IgG1Fc融合蛋白杆状病毒表达载体并使其在昆虫细胞内表达获得MR1/IgG1Fc二聚体,制备人工抗原提呈细胞用于黏膜相关恒定T细胞(MAIT)反应性代谢物及MAIT细胞功能调控研究。方法从人外周血单个核细胞中扩增β2m编码基因。商业化合成MR1胞外段和IgG1Fc融合基因的全序列基因MR1/IgG1Fc,与β2m基因重组构建pFastBac^(TM)Dual+[β2m+MR1/IgG1Fc]表达载体;利用Bac-to-Bac昆虫表达系统表达MR1/IgG1Fc二聚体融合蛋白,并通过双抗体夹心ELISA、Western blot及流式细胞术进行检测。建立MR1/IgG1Fc二聚体加载的人工抗原提呈细胞(artificial antigen presenting cells,aAPCs),即MR1aAPCs,提呈大肠埃希菌(DH5α)来源的代谢物,与人外周血单个核细胞共培养,检测MAIT细胞的活化和增殖水平。结果经PCR及测序鉴定证实pFastBac^(TM)Dual+[β2m+MR1/IgG1Fc]载体中MR1/IgG1Fc与β2m具有正确序列。ELISA、Western blot及流式细胞术检测结果表明MR1/IgG1Fc二聚体在重组杆粒感染的Sf9细胞培养上清富集,具有正确构象。加载DH5α来源代谢物的MR1aAPCs能够促进MAIT细胞活化和增殖。结论成功构建pFastBac^(TM)Dual+[β2m+MR1/IgG1Fc]重组质粒,并在Sf9细胞中表达MR1/IgG1Fc二聚体,制备获得MR1aAPCs,为研究MAIT细胞反应性代谢物及MAIT细胞功能提供了新的工具。
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关键词
黏膜相关恒定T细胞
MR1/
igg
1Fc
二
聚
体
人工抗原提呈细胞
反应性代谢物
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职称材料
题名
静注人免疫球蛋白中IgG二聚体含量对IgG Fc段与THP-1细胞表面受体结合能力的影响
1
作者
雷婷婷
张巍
李长清
叶生亮
杜晞
马莉
机构
中国医学科学院北京协和医学院输血研究所
出处
《中国输血杂志》
CAS
2023年第2期125-129,共5页
基金
国家药品监督管理局血液制品质量控制重点实验室开放性课题(KF2021011)
中国医学科学院医学与健康科技创新工程项目(2021-12M-1-060)。
文摘
目的研究静注人免疫球蛋白(Intravenous immunoglobulin,IVIG)中免疫球蛋白G(Immunoglobulin G,IgG)二聚体含量对IgG Fc段与THP-1细胞表面受体结合能力的影响。方法利用蛋白纯化技术和高效液相色谱(HPLC)技术,制备不同浓度的IgG二聚体,然后采用直接添加的方式,制备得到含有不同浓度IgG二聚体的IVIG。最后利用本实验室已建立的IgG Fc段与THP-1细胞表面Fc段受体结合能力的检测方法,考察IgG二聚体含量对IgG Fc段与细胞表面受体结合能力的影响。结果当IVIG中IgG二聚体含量为1.11%~10.30%时,其与THP-1细胞表面Fc段受体的结合能力为97.67%~135.33%,且这种结合能力与IgG二聚体的含量呈正相关。当IgG二聚体含量超过13.22%时,IgG Fc段与THP-1细胞表面受体的结合能力与IgG二聚体含量则没有相关性。结论一定浓度的IgG二聚体对IVIG中IgG Fc段与THP-1细胞表面受体的结合能力具有促进作用,但尚需动物实验和临床数据进一步验证。
关键词
静注人免疫球蛋白(IVIG)
igg二聚体
igg
Fc段
THP-1细胞
受
体
结合能力
Keywords
IVIG
igg
dimer
igg
Fc fragment
THP-1 cells
receptor binding ability
分类号
R457.11 [医药卫生—治疗学]
R392.11 [医药卫生—免疫学]
R446.62 [医药卫生—诊断学]
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职称材料
题名
人MR1/IgG1Fc二聚体融合蛋白的构建、表达及功能检测
2
作者
赵桂华
龚业莉
翁秀芳
机构
江汉大学医学部免疫学教研室
华中科技大学同济医学院基础医学院免疫学系
出处
《华中科技大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第5期649-655,共7页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.32170920)
江汉大学校级自然科学基金项目(N0.2021yb135)。
文摘
目的构建MR1/IgG1Fc融合蛋白杆状病毒表达载体并使其在昆虫细胞内表达获得MR1/IgG1Fc二聚体,制备人工抗原提呈细胞用于黏膜相关恒定T细胞(MAIT)反应性代谢物及MAIT细胞功能调控研究。方法从人外周血单个核细胞中扩增β2m编码基因。商业化合成MR1胞外段和IgG1Fc融合基因的全序列基因MR1/IgG1Fc,与β2m基因重组构建pFastBac^(TM)Dual+[β2m+MR1/IgG1Fc]表达载体;利用Bac-to-Bac昆虫表达系统表达MR1/IgG1Fc二聚体融合蛋白,并通过双抗体夹心ELISA、Western blot及流式细胞术进行检测。建立MR1/IgG1Fc二聚体加载的人工抗原提呈细胞(artificial antigen presenting cells,aAPCs),即MR1aAPCs,提呈大肠埃希菌(DH5α)来源的代谢物,与人外周血单个核细胞共培养,检测MAIT细胞的活化和增殖水平。结果经PCR及测序鉴定证实pFastBac^(TM)Dual+[β2m+MR1/IgG1Fc]载体中MR1/IgG1Fc与β2m具有正确序列。ELISA、Western blot及流式细胞术检测结果表明MR1/IgG1Fc二聚体在重组杆粒感染的Sf9细胞培养上清富集,具有正确构象。加载DH5α来源代谢物的MR1aAPCs能够促进MAIT细胞活化和增殖。结论成功构建pFastBac^(TM)Dual+[β2m+MR1/IgG1Fc]重组质粒,并在Sf9细胞中表达MR1/IgG1Fc二聚体,制备获得MR1aAPCs,为研究MAIT细胞反应性代谢物及MAIT细胞功能提供了新的工具。
关键词
黏膜相关恒定T细胞
MR1/
igg
1Fc
二
聚
体
人工抗原提呈细胞
反应性代谢物
Keywords
mucosal associated invariant T cell
MR1/
igg
1Fc dimer
artificial antigen presenting cell
reactive metabolite
分类号
R392.9 [医药卫生—免疫学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
静注人免疫球蛋白中IgG二聚体含量对IgG Fc段与THP-1细胞表面受体结合能力的影响
雷婷婷
张巍
李长清
叶生亮
杜晞
马莉
《中国输血杂志》
CAS
2023
0
下载PDF
职称材料
2
人MR1/IgG1Fc二聚体融合蛋白的构建、表达及功能检测
赵桂华
龚业莉
翁秀芳
《华中科技大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2023
0
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职称材料
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