IgH、TCR-γ基因重排与免疫组化诊断非霍奇金淋巴瘤的价值

目的 探讨基因重排与免疫组化在诊断非霍奇金淋巴瘤(non Hodgkin’slymphoma,NHL)中的价值。方法 对131 例NHL的石蜡包埋组织进行免疫组化和基因重排检测。结果 60例B细胞NHL中51例IgH基因重排检测为阳性,阳性率 85%;50例T细胞NHL中38例TCR -γ基因重排检测为阳性,阳性率76%;HE形态学和免疫组化分型诊断率为84%(110 例),加用IgH和TCR -γ基因重排,分型诊断率达94.6%(124例),两分型诊断率差异有显著性(P<0.05)。6例巨大淋巴结 增生和3例血管免疫母细胞性淋巴结病IgH和TCR -γ基因重排检测均为阴性。基因重排与形态学和免疫组化结果不相符的 病例有7例。结论 联合运用免疫组化和基因重排技术,可提高NHL的分型诊断率。

MALToma Ig重链蛋白、IgH基因重排/断裂检测的临床意义

目的探讨Ig重链蛋白、IgH基因重排/断裂在黏膜相关淋巴组织淋巴瘤(mucosa-associated lymphoid tissue lymphoma,MALToma)诊断中的应用价值。方法选取40例MALToma作为实验组,15例反应性淋巴组织增生(reactive lymphoid hyperplasia,RLH)作为对照组,应用免疫组化、PCR、FISH技术分别检测两组中Ig重链蛋白、IgH基因重排、IgH基因断裂情况。结果(1)Ig重链蛋白表达根据免疫组化结果可分为三种模式:单种Ig重链蛋白表达(模式Ⅰ)、Ig重链蛋白全阴性(模式Ⅱ)、多种Ig重链蛋白表达(模式Ⅲ)。实验组模式Ⅰ/Ⅱ的阳性率(87.5%)显著高于对照组(0)(P<0.01)。(2)实验组IgH基因重排、IgH基因断裂的阳性率分别为72.5%(29/40)、32.5%(13/40),而对照组未检出IgH基因重排、IgH基因断裂(P<0.01,P<0.05)。(3)Ig重链蛋白模式Ⅰ/Ⅱ和IgH基因重排联合检测以及Ig重链蛋白模式Ⅰ/Ⅱ、IgH基因重排和IgH基因断裂联合检测的阳性率均高达97.5%。(4)在Ig重链蛋白模式Ⅱ中,有9例检出IgH基因断裂(90%);在模式Ⅰ/Ⅲ中,仅有4例检出IgH基因断裂(13.3%),两组相比差异有统计学意义(P<0.01)。Ig重链蛋白表达和IgH基因断裂呈正相关(r s=0.323,P<0.05)。结论联合检测Ig重链蛋白表达模式和IgH基因重排可有效辅助鉴别MALToma和RLH;IgH基因断裂可能与Ig重链蛋白表达缺失高度相关。

IgH基因重排在B淋巴瘤微小残留病中的应用

目的 探讨IgH基因重排在B细胞淋巴瘤临床诊治中的应用。方法 应用半巢式PCR技术对IgH基因的CDRⅡ区和CDRⅢ区进行基因重排检测。共检测 4 5例骨髓标本。其中正常标本 8例 ,淋巴瘤标本 37例 (B细胞淋巴瘤 2 7例 ,T细胞淋巴瘤 10例 )。结果 8例正常标本未检测到FR2A或FR3A的重排 ;2 7例B细胞淋巴瘤中 ,2 3例 (85 .2 % )可检测到FR2A或FR3A重排 ,其中FR2A重排 16例 (5 9.3% ) ,FR3A重排 2 0例 (74 .1% ) ,FR2A、FR3A均有重排者 13例 (48.1% ) ;10例T淋巴瘤中FR2A重排 1例 ,FR3A重排 3例。骨髓穿刺检查 :2 7例B淋巴瘤中 5例原幼淋细胞 >5 % ,FR2A和FR3A阳性各 4例 ;2 2例原幼淋细胞 <5 %者 ,FR2A阳性 12例 ,FR3A阳性 16例。

IgH重排的实时定量PCR检测及反应参数研究

为了探讨以通用引物应用PCR技术扩增克隆性免疫球蛋白重链基因(IgH)重排的最佳实验条件及SYBRGreenⅠ实时定量PCR检测该基因的可行性,以通用引物对克隆性IgH重排进行扩增,对影响PCR扩增的退火温度、引物浓度、Taq酶用量、dNTP浓度、镁离子浓度、循环次数等实验因素进行了系统研究,找出最佳反应参数,并以通用引物进行了SYBRgreenⅠ实时定量PCR对IgH重排基因的检测,测定了该法检测IgH重排基因的敏感性。结果表明:最佳退火温度为60℃,最佳引物浓度为0.8μmol/L,0.5U的Taq酶量效果满意,最适dNTP浓度为100μmol/L,最适镁离子浓度为3.0mmol/L,最佳循环次数为40次。SYBRGreenⅠ实时定量PCR可以实现对克隆性IgH重排的扩增和荧光信号的检测分析,其对IgH重排基因检测的敏感性为104/ml。结论:确定了应用PCR技术检测克隆性IgH重排的最适反应条件,实现了用通用引物对克隆性IgH重排稳定、特异的扩增,初步实现了以通用引物和应用SYBRGreenⅠ实时定量PCR对IgH重排的检测。

多重PCR快速检测弥漫性大B细胞淋巴瘤患者骨髓BCL2/IGH与BCL6/IGH融合基因的临床意义

弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)是最常见的侵袭性非霍奇金淋巴瘤,其临床表现、分子生物学特点都有显著的异质性。本研究旨在探讨多重PCR技术在DLBCL患者骨髓BCL2/IGH及BCL6/IGH等融合基因检测中的临床意义。利用多重巢式PCR技术对80例初治DLBCL患者的骨髓标本进行BCL2/IGH及BCL6/IGH融合基因检测。结果表明,80例患者骨髓标本中携带目的融合基因共12例,阳性率为15%;其中BCL2-IGH阳性患者为6例,BCL6-IGH阳性患者为6例。DLBCL患者携带不同的融合基因具有不同的临床特点。结论:运用多重PCR方法对DLBCL患者进行分子生物学检测具有快速、准确的优点。但需进一步深入研究改善方法,使之对融合基因能做定量或半定量分析,这对于DLBCL患者的诊断、协助分期、预后评估、微小残留病变的估测,指导临床治疗DLBCL有重要意义。

实时定量PCR法检测淋巴瘤患者Bcl-2／IgH融合基因及其临床意义

本研究目的是检测滤泡性淋巴瘤和弥漫大B细胞淋巴瘤患者bcl-2/IgH融合基因的表达水平,以探讨其临床意义。以SYBRGreenⅠ荧光染料实时定量PCR方法检测20例患者外周血和(或)骨髓bcl-2/IgH融合基因的表达水平,并对其中4例患者bcl-2/IgH融合基因的表达水平进行动态监测。结果表明,在bcl-2/IgH融合基因阳性表达的病例中,骨髓和外周血bcl-2/IgH融合基因的相对拷贝数分别为4.23和2.73,统计学分析差异无显著性(p=0.107),而治疗前后融合基因的相对拷贝数均数分别为3.61和2.69,统计学分析差异有显著性(p=0.000),初诊及复发组的bcl-2/IgH融合基因表达水平明显高于缓解组(p=0.008),在4例患者的外周血bcl-2/IgH融合基因动态监测结果中,1例患者在临床复发前3个月bcl-2/IgH融合基因表达水平明显上升。结论:bcl-2/IgH融合基因表达水平与患者的疾病状态有一定的相关性,初诊及复发患者融合基因的表达水平高,而缓解患者融合基因的表达水平低,治疗后融合基因表达水平较治疗前明显下降,bcl/IgH融合基因表达水平的变化可能与临床疾病进程有关,检测外周血是比较可行的。

B细胞恶性肿瘤患者血浆游离DNA中IgH基因重排检测及临床意义

目的探讨检测B细胞肿瘤患者血浆DNA标本IgH基因重排对辅助诊断及判断预后的临床意义。方法采集83例B细胞急性淋巴细胞白血病（B-ALL）、B细胞非霍奇金淋巴瘤（B-NHL）及多发性骨髓瘤（MM）患者共110份血浆标本，提取血浆游离DNA，PCR检测IgH基因重排。结果63例初发B细胞肿瘤患者IgH基因重排检测阳性率为77．8％，而缓解病例的阳性率为27．6％，初发患者检测阳性率显著高于缓解病例（P〈0．01）。结缔组织病、感染性疾病及健康人均呈阴性结果。IgH基因重排检测阳性率与B-NHL和MM的分期、血清β2-微球蛋白（β2-Me）和乳酸脱氢酶（LDH）水平无关（P〉0．05）。追踪检测16例患者显示12例初发检测阳性者治疗缓解后转为阴性，其中3例缓解后6-9个月检测血浆IgH基因重排再次转为阳性，随后此3例患者均出现临床复发，检测转阳较临床复发提前1-4个月。1例在初诊和完全缓解期间检测均为阳性ALL患者，经异基因干细胞移植后转为阴性；3例检测始终阳性的患者疗效不佳，始终未获缓解。结论初治B细胞肿瘤患者血浆游离DNA中检测IgH基因重排阳性率高、特异性强、取材简便，有望用于B细胞肿瘤辅助诊断，追踪检测还有助于判断预后。

不明原因发热患者检测淋巴细胞IgH和TCR基因重排的意义

目的:探讨不明原因发热(FUO)患者淋巴细胞免疫球蛋白重链(Ig H)和T细胞受体-γ(TCR-γ)基因重排的临床意义。方法:采用半巢式PCR方法检测110例FUO患者骨髓淋巴细胞Ig H和TCR-γ基因重排的阳性率。结果:84例淋巴瘤发热患者中,Ig H基因重排阳性34例,TCR-r基因重排阳性29例,两者阳性率达75%;26例非淋巴瘤发热患者中,Ig H基因重排阳性0例,TCR-r基因重排阳性1例,基因重排阳性率3.8%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:对于FUO患者行基因重排有助于淋巴瘤的早期诊断,特别是对无法取得病理组织的患者意义更大。

非霍奇金淋巴瘤IgH和TCRγ基因重排临床分析

目的探讨骨髓IgH和TCRγ基因重排检测对NHL诊断及骨髓浸润的临床价值。方法收集确诊的NHL患者55例,对其骨髓IgH和TCRγ基因重排检测结果进行统计分析,并与骨髓活检进行对照分析。结果 B细胞淋巴瘤(B-NHL)IgH基因重排总阳性率42.86%,T细胞淋巴瘤(T-NHL)TCRγ基因重排总阳性率84.62%。骨髓IgH和TCRγ基因重排阳性往往提示骨髓浸润,提示更差的分期及预后。结论 IgH和TCRγ基因重排作为分子标志,对NHL的诊断和检测骨髓浸润及指导治疗、提示预后有重要的临床应用价值。

IgH基因重排对骨髓瘤患者监测的临床意义

目的:探讨免疫球蛋白重链(IgH)基因重排在多发性骨髓瘤(MM)患者治疗过程中监测的临床意义。方法:回顾分析41例经治疗后达到非常好的部分缓解(VGPR)或以上疗效的MM患者外周血的PCR的结果,包括自体外周血干细胞移植(ASCT)患者21例和未移植患者20例。观察患者确诊时的IgH阳性率、达到上述疗效时的转阴率,以及两组患者的复发率和持续缓解时间(DOR)的差异。结果:41例患者IgH克隆性重排阳性35例(85.4%),经化疗后达疗效时IgH转阴率为25.6%。移植组未转阴者复发率为7/12,DOR为22.5个月,转阴者复发率为1/5,DOR为42.5个月。未移植组未转阴者复发率为7/13,DOR为22个月,转阴者复发率为1/5,DOR为21个月。结论:PCR技术检测MM患者IgH基因重排可作为诊断、疗效观察、预后判断及微小残留病灶监测的参考指标之一。

间接法原位PCR在cHL IgH基因重排研究中的应用

目的 :探索在石蜡切片上进行间接法原位PCR的可行性及利用产物探针检测IgH克隆性基因重排的意义。 方法 :选取获得IgH克隆性基因重排的经典型霍奇金淋巴瘤 (cHL) ,纯化产物合成探针 ,进行间接法原位PCR。 结果 :在H/RS细胞和周围背景细胞核内均发现棕褐色杂交颗粒 ,利用产物探针互测时也能出现杂交颗粒。结论 :在石蜡切片上进行间接法原位PCR是可行和有效的 ,但产物探针的精确性仍有待进一步证实。

外周血Bcl-2/IgH融合基因检测的可行性探讨

目的探讨外周血作为Bcl-2/IgH融合基因检测的标本来源的可行性。方法以SYBR GreenⅠ荧光染料实时定量PCR方法检测20例患者外周血和5例骨髓Bcl-2/IgH融合基因的阳性率及表达水平。结果骨髓和外周血Bcl-2/IgH融合基因的阳性检出率分别是80%与65%,两者阳性率经统计学分析差异无显著性(P=0.64);外周血和骨髓融合基因相对拷贝数x軃±sd分别为2.73±2.54和4.23±4.06,经统计学分析差异无显著性(P=0.107)。结论以外周血作为Bcl-2/IgH融合基因观测的标本来源有一定的可行性,值得进一步研究。

IgH基因克隆性重排检测在B细胞淋巴瘤诊断中的应用

目的建立B-NHL临床诊断中Ig H基因克隆性重排检测基本方法。方法应用PCR方法,采用IgHFR3A引物,检测了7例B-NHL及4例反应性增生的淋巴结石蜡样本中IgH基因重排情况。结果黏膜相关型边缘区B细胞淋巴瘤(MALT)3例中有2例(2/3),弥漫大B细胞淋巴瘤2例中2例(2/2),滤泡淋巴瘤1例中0例(0/1),套细胞淋巴瘤1例中1例(1/1)检测到IgH基因的克隆性重排。总检测率为5/7(71%),4例淋巴结反应性增生病例病例均为IgH基因的多克隆性重排。结论PCR-FR3A在鉴别淋巴组织肿瘤性或反应性增生和最终确诊B-NHL上是一项有效的辅助方法。

B细胞淋巴瘤中18号染色体上微卫星位点与bcl-2/IgH基因重排的相关性

目的探讨B细胞淋巴瘤中18号染色体上微卫星位点D18S64、D18S61与bcl-2/IgH基因重排的相关性。方法采用巢式PCR方法对37例B细胞非霍奇金淋巴瘤bcl-2/IgH基因重排主要断裂点(MBR)进行检测,PCR-SSCP方法检测bcl-2基因内部、基因周围微卫星位点D18S64、D18S61的MSI和LOH情况。采用DNA抽提试剂盒提取石蜡包埋组织基因组DNA、全血基因组DNA-PCR扩增-变性聚丙烯酰烯酰胺凝胶垂直电泳-银染法-全自动凝胶成像系统对样本进行MSI和LOH分析。结果 37例B细胞非霍奇金淋巴瘤中,bcl-2/IgH基因重排阳性率为24.3%(9/37)。各位点MSI、LOH频率分别介于16.2%-18.9%和16.2%-21.6%。D18S61位点MSI阳性组的bcl-2基因重排阳性率均高于MSI阴性组(P<0.05),而D18S64位点则与之相反(P>0.05);D18S61位点LOH阳性组的bcl-2基因重排阳性率明显高于LOH阴性组(P<0.05),D18S64位点与之相反(P>0.05)。结论 bcl-2/IgH基因重排与微卫星位点D18S61的MSI/LOH有显著相关性,表明D18S61可能是bcl-2基因周围区域与bcl-2基因关系较为密切的微卫星位点。

Bcl-2／IgH和IgH基因重排与非霍奇金淋巴瘤诊断和化疗效果的相关性研究

目的:通过对Bcl-2/IgH及IgH基因重排的联合检测,探讨两种标志物与B细胞型非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)诊断与疗效的相关性。方法:对49例初治的B-NHL患者采用以CHOP方案为基础的化疗,在化疗前及化疗后6周期时以PCR一步法进行上述指标的检测。结果:化疗前49例患者的Bcl-2/IgH和IgH基因重排联合检测率达到91.8%,治疗后达到CR的21例病例中,4例IgH基因重排转阴,2例Bcl-2/IgH转阴。结论:Bcl-2/IgH联合IgH基因重排检测作为分子学标志物比单纯采用Bcl-2/IgH或是单纯IgH重排更为敏感,但是取得CR的病例中,Bcl-2/IgH和IgH基因重排在化疗前后无明显变化,提示短期内对于临床CR的患者,上述指标不能做为适时的分子学指标。

非霍奇金淋巴瘤患者骨髓单个核细胞BCL-2/IgH、IgH基因重排的检测

本研究检测非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者BCL-2/IgH基因主要断裂区重排、IgH基因重排,并探讨其对疾病的早期诊断、疗效评价等方面的意义。分别提取70例NHL(60例B-NHL、10例T-NHL)、7例淋巴结炎性肿大患者、20名正常人的骨髓单个核细胞DNA,通过PCR方法检测BCL-2/IgH、IgH基因重排,以凝胶电泳出现相应条带者为阳性,并与患者病理组织学检查进行比较,探讨此两种基因重排发生的相关因素,比较化疗后的动态变化。结果表明,①30例弥漫大B细胞淋巴瘤患者(DLBCL)中,10例骨髓BCL-2/IgH重排阳性(33.3%),与30例其它B-NHL(除外滤泡淋巴瘤FL及DLBCL)阳性率(6.7%)、20名正常人阳性率(5%)比较均有显著性差异(p均<0.05)。所有T-NHL及7例淋巴结炎性肿大患者BCL-2/IgH重排均为阴性;②对8例BCL-2/IgH基因重排阳性患者进行动态监测,经2个疗程R-CHOP治疗后BCL-2/IgH基因重排明显减少,PCR半定量结果均值由初治0.59降至0.16(p<0.05),6个疗程R-CHOP治疗后PCR半定量均值为0,BCL-2/IgH基因重排完全转阴;③BCL-2/IgH基因重排阳性患者中LDH水平升高占81.8%,在重排阴性患者中占28.6%,两组间有统计学差异(p<0.05)。然而,BCL-2/IgH基因重排与淋巴瘤分期、是否伴有全身症状、β2-MG水平、骨髓侵犯、肝脏脾脏侵犯均无显著相关性;④20例DLBCL(均为初治)骨髓单个核细胞DNA检测显示,9例IgH基因重排阳性(45%);30例其它B-NHL(均为初治或复发患者,DLBCL除外)中14例IgH基因重排阳性(46.7%),其两组间无统计学差异性(p>0.05),但对照组20名正常人、10例T细胞淋巴瘤患者及7例淋巴结炎性肿大患者均为阴性;⑤对7例IgH基因重排阳性患者进行动态监测表明,1个疗程的R-CHOP治疗就能显著减少IgH基因重排,PCR半定量结果均值由初治0.42降至0.13(p<0.05),2个疗程后PCR半定量均值为0,重排完全消除;⑥IgH基因重排阳性患者中LDH水平升高占90%,在重排阴性患者中占30%,两组间有统计学差异(p<0.05);IgH基因重排与淋巴瘤分期、是否伴有全身症状、β2-MG水平、骨髓侵犯、肝脏脾脏侵犯均无显著相关性。结论:BCL-2/IgH、IgH基因重排均可作为B-NHL早期诊断及评价疗效的特异性指标,这两种重排均与LDH水平相关;BCL-2/IgH基因重排对DLBCL特异性较高。

基于捕获法的靶向测序技术在弥漫大B细胞淋巴瘤IgH基因重排检测中的应用价值

目的探讨基于捕获法的靶向测序技术在弥漫大B细胞淋巴瘤IgH基因克隆性重排检测中的应用价值。方法收集2020年3月~2022年1月苏州大学附属第一医院送检的DLBCL标本99例,提取患者基因组DNA,使用基于捕获法的靶向测序技术进行IgH基因克隆性重排检测。结果27.3%(27/99)患者检测到IgH基因完全IgHV-IgHD-IgHJ重排,50.5%(50/99)患者检测到IgH基因不完全IgHD-IgHJ重排,IgH基因克隆性重排联合检出率为66.7%(66/99)。27例患者检测到32种IgHV-IgHD-IgHJ重排,50例患者检测到52种IgHD-IgHJ重排,在IgHV-IgHD-IgHJ重排中,IgHV3、IgHD3和IgHJ4家族基因的取用频率最高,在IgHD-IgHJ重排中,IgHD3和IgHJ4家族基因的取用频率最高。3例患者捕获到未知IgH基因融合伴侣,其中2例为MIR4507-IgH融合,1例为IRF8-IgH融合。结论基于捕获法的靶向测序技术不仅可以检测IgH基因克隆性重排具体方式,还能发现IgH基因未知融合伴侣,对DLBCL诊断及个体化治疗策略制定具有重要意义。

B-NHL患者骨髓和外周血细胞克隆性IgH基因重排的检测及临床意义

为探讨骨髓 (BM )和外周血 (PB)细胞克隆性免疫球蛋白重链 (IgH)基因重排在B细胞非霍奇金淋巴瘤 (B NHL)分期、疗效及预后判断方面的价值 ,采用半巢式PCR ,对治疗前B NHL患者BM 4 6例和PB 38例及治疗缓解后的BM和PB 10例进行了该标志的检测。对照组为非肿瘤或非B细胞来源肿瘤患者的BM或PB共 33例。结果显示 :在B NHL组 ,治疗前形态学有瘤细胞侵犯的 3例BM及 2例PB ,克隆性IgHCDR3重排阳性 ;在形态学未见异常的BM和PB中克隆性IgH重排阳性率分别为 6 5 .1%及 4 4.4 % ,与B NHL分期及有无全身症状无关。 10例病理组织克隆性IgH重排阳性的病人 ,7例缓解后BM和PB重排转为阴性 ,处于持续完全缓解状态 ;2例行自体外周血干细胞移植后BM或PB重排持续阳性者复发 ;1例移植后 10个月BM克隆性IgH重排阳性 ,仍处于完全缓解。对照组 33例中仅 1例克隆性IgH重排阳性 ,本方法的特异性为 97%。研究提示 ,PCR法能早期诊断BM及PB的瘤细胞浸润。临床缓解期BM或PB克隆性IgH重排阳性预示可能近期复发 ,阴性者可能持续缓解 ,个别IgH阳性者仍长期生存 。

化疗前后B-NHL淋巴瘤IgH基因重排变化的研究

目的B-NHL是我国较多见的肿瘤之一。通过对B-NHL患者化疗前后IgH基因重排变化的观察,探讨IgH基因单克隆重排带对B-NHL的诊断价值及能否作为B-NHL化疗缓解后的分子指标之一。方法对20例B-NHL初治化疗前及化疗缓解后患者用两种PCR方法进行IgH基因重排物的检测,同时用10例非淋巴瘤肿瘤组化疗前及化疗缓解后患者及10例健康人以作对照。结果20例初治化疗前B-NHL患者18例检测到IgH基因单克隆重排带,化疗缓解后此18例中1例IgH基因单克隆重排带转阴,另出现2或3克隆性重排带各2例,总变化率为27.8%,余未变化。2例IgH基因单克隆重排带阴性者化疗后依然阴性。对照的非淋巴瘤肿瘤组化疗前及化疗缓解后患者及健康人IgH基因单克隆重排带均为阴性,患者治疗后也未见改变。结论IgH基因单克隆重排带,可以作为B-NHL及其微小残留灶克隆性变化的辅助诊断指标之一。

实时定量PCR检测Bcl-2/IgH融合基因在淋巴瘤中的应用

Bcl-2/IgH融合基因是淋巴瘤的肿瘤特异性标志,见于85%～90%的滤泡性淋巴瘤及30%的弥漫性大B细胞淋巴瘤患者。大量研究表明,该融合基因与滤泡性淋巴瘤和弥漫性大B细胞淋巴瘤有很好的相关性,对Bcl-2/IgH的定量检测能反应淋巴瘤的临床进程。现就实时定量PCR技术对Bcl-2/IgH融合基因的检测在淋巴瘤的分期、疗效评价、预测复发和预后评估等方面的临床意义进行综述。