IgM单抗体内、外杀伤日本血吸虫的研究

本文报道应用急性感染日本血吸虫的Ｂａ１ｂ／ｃ小鼠脾细胞和ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，获得了一株具有抗血吸虫攻击感染保护作用的ＩｇＭ单抗ｓｓｊ１４。在被动免疫转移试验中，这株单抗在小鼠体内提供了２７．６９％～６８．５％的减虫率。体外ＡＤＣＣ试验显示该单抗参与了巨噬细胞和嗜酸性粒细胞介导的杀伤血吸虫童虫的作用，免疫化学特性测定表明该单抗同时对血吸虫尾蚴、成虫和虫卵三期虫体抗原起反应，靶抗原的分子量为２９０ＫＤ，分别位于血吸虫童虫和成虫的表膜及虫卵的卵壳。靶抗原表位的化学性质为多糖类，它同时被辐照致弱尾蚴免疫的大鼠血清、血吸虫慢性感染人血清和小鼠血清所识别。本文结果表明，ＩｇＭ抗体和多糖类抗原在血吸虫病免疫保护作用中发挥了重要的作用。

人IgMμ链恒定区各肽段的基因合成原核表达及免疫原性分析

目的全基因合成并原核表达免疫球蛋白M的重链(IgMμ链)及其各肽段,与天然的IgM、IgMμ链和IgG进行免疫原性的分析比较,进一步了解IgMμ链恒定区的结构与功能。方法根据GenBank数据库IgMμ链恒定区(CH1-CH4)的cDNA序列并进行必要的大肠杆菌密码子优化,利用重叠延伸PCR(OE-PCR)体外基因合成人IgMμ链恒定区全长(CH1-CH4)及其截断片段CH1-CH2和CH3-CH4。原核表达并纯化相应的3种融合蛋白PET32a-rMμCH1-CH4、PET32a-rMμCH1-CH2和PET32a-rMμCH3-CH4,并分别免疫BALB/c小鼠。同时设天然人IgM、IgMμ链和IgG免疫组为对照。再用ELISA法检测6种血清,分析比较其抗原性及免疫原性。结果利用OE-PCR方法体外成功合成1 359 bp的IgMμ链(CH1-CH4)全长基因、651 bp的IgMμ链CH1CH2和708 bp的IgMμ链CH3CH4,并构建相应原核表达质粒PET32a-rMμ1-4、PET32a-rMμ1-2和PET32a-rMμ3-4,血清ELISA检测结果显示:①IgG免疫原性>IgM>IgMμ链>rMμ1-4>rMμ1-2>rMμ3-4;②IgM免疫的血清与IgG有较强的交叉反应性,IgG免疫的血清与IgM也存在较强的交叉反应性;IgMμ链和重组μ链的各肽段免疫的血清与IgG均无明显的交叉反应性。结论重组的IgMμ链及其各肽段与天然IgMμ链有着相似的免疫原性和特异性,为基因工程得到抗人IgMμ链单克隆抗体奠定了研究基础。

鼠源性抗人IgMμ链单克隆抗体的制备和鉴定

目的 :建立能稳定分泌高效价抗人 Ig Mμ链单克隆抗体的细胞株 ,收获并纯化抗体用于进一步研究。方法 :小鼠免疫脾细胞与骨髓瘤细胞用 PEG融合 ,小鼠体内诱生腹水的方法收获大量单克隆抗体 ,辛酸硫酸铵提纯 ,并鉴定其纯度。结果 :获得 3个稳定分泌抗体的细胞株 M1、M2、M3,鉴定其亚类分别为 Ig G3、Ig G2 a、Ig G1;腹水抗体纯化后获得纯化抗体含量分别为 0 .36 mg/ ml、0 .2 8mg/ ml、3.71mg/ ml。结论 :用 PEG进行细胞融合 。

用抗人IgM(μ链)单克隆抗体早期诊断风疹病毒感染

An indirect ELISA by using monoclonal antibody (McAb) against hutnan IgM (μ chain)as the antibody labeled with horseradish peroxidase (second antibody) is used in detecion Rubela virus - specific IgM for early diagnosis of Rubella virus infection. Through the detection and verifition of a large number of sera from normal population, the population closely contacted with Rubella virus and IgM - positive sera samples of Measles virus, cycoegaforirm and Toxplasma Gondii, it is indicated that this method is specific, seusiuive, simple, rapid and no cross - reaction with the positive sera of the pathogens menticned above, It can be used for early diagnosis of Rubella virus infection and epidemiological survey.

用抗人IgM(μ链)单克隆抗体诊断血吸虫病的研究

本文报告用抗人IgM(μ链)单克隆抗体ELISA法诊断血吸虫病。检测急性血吸虫病150例、慢性血吸虫病208例、经吡喹酮治疗后6个月粪检转阴的慢性血吸虫病28例、肝吸虫32例,阳性检出率分别为100.00％、88.46％、3.57％、15.63％;检测健康人50例均为阴性。动物实验早期诊断,观察3只感染血吸虫病猴,检测IgM(μ链)抗体,第28d均呈现阳性,比IgG-ELISA 42d、COPT 41d、粪检45d呈现阳性时间早。表明抗人IgM(μ链)单克隆抗体用于诊断血吸虫病,具有高度敏感性和特异性及疗效考核价值。

免疫聚合酶链反应新技术的建立及其在消化道肿瘤血清诊断中的应用

本研究报道了以聚合酶链反应技术（ＰＣＲ）的建立及在检测非核酸物质─肿瘤相关抗原的应用。首先制备了肿瘤单克隆抗体。重组ＤＮＡ联合体，（ＭＧ或ＭＣ－ＰＸＪ１９）以此将抗原抗体反应的特异性同ＰＣＲ技术的高敏感性相结合，建立了免疫聚合酶链反应技术（免疫ＰＣＲ技术），胃癌卑抗（ＭＧ系列）及结肠癌单抗（ＭＣ系列）均为本室制备。基础研究中以该技术检测胃印戒细胞癌株ＫＡＴＯⅢ上肿瘤相关抗原，并与ＥＬＩＳＡ法比较其敏感性，结果表明，ＫＡＴＯⅢ细胞数目在２０个时即可出现阳性结果，敏感性较ＥＬＩＳＡ法高出１０倍。若以０．２５％戊二醛固定相同数量（２×１０６／ｍｌ）ＫＡＴＯⅢ细胞后加入ＭＧ－ＰＸＪ１９嵌合体及单独ＭＧ分别以免疫ＰＣＲ及ＥＬＩＳＡ法进行检测，免疫ＰＣＲ检测结果呈阳性所需ＭＧ－ＰＸＪ１９为３．８×１０－１４ｍｏｌ，而ＥＬＩＳＡ法为３．０×１０－１１ｍｏｌ。临床研究中以该技术分别检测了４１６例胃癌、４６例结肠癌患者，其血清诊断阳性率分别为８３．３％及７２．９％，明显高于其它检测方法。将ＰＣＲ扩增产物进行定量研究表明，胃癌伴发转移者明显高于不伴有转移及早期癌肿患者。此外该方法还可用于高危人群普查，胃癌术后监测等。总之，免疫?

血吸虫病患者血清CIC解离后特异性抗原／抗体检测的研究

将受检者血清免疫复合物（ＣＩＣ）用改进方法解离后，以多克隆、单克隆抗体（ＰｃＡｂ、ＭｃＡｂ）及可溶性血吸虫卵抗原（ＳＥＡ）作ＥＬＩＳＡ检测血吸虫特异性抗原（Ａｇ）及抗体（Ａｂ）。结果表明，检测ＣＩＣ解离后的Ａｇ（称为非游离性循环抗原，ＮＦ一ＣＡｇ）和Ａｂ（称为非游离性循环抗体，ＮＦ一ＣＡｂ），均显示满意的特异性和敏感性；用抗ＳＥＡ一ＰｃＡｂ与抗ＳＥＡ一ＭｃＡｂ和抗ＣＣＡ一ＭｃＡｂ对比检测ＮＦ一ＣＡｇ时，显示相似的检测效果；该法具有诊断病人和考核治疗效果的价值，且有互补诊断血吸虫病的效果。血清中ＣＩＣ解离后检测血吸虫特异性的ＮＦ一ＣＡｇ／ＮＦ一ＣＡｂ可望成为血吸虫病血清学诊断的新途径。

多价单克隆抗体检测血吸虫循环抗原现场诊断血吸虫病的价值

采用多价单克隆抗体Dot-ELISA试验,检测了血吸虫病流行区居民血清219份,并以单克隆抗体Dot-ELISA、环卵沉淀试验和粪检作为对照.结果:多价单抗Dot-ELISA、单克隆Dot-ELISA、DGS-COPT和粪便孵化阳性检出率分别为20.6%、31.1%、36.1%、11.4%.多价单抗Dot-ELISA检出率明显低于DGS-COPT,两法总符合率为80.8%,25例粪阳病人3种血清学方法检出率分别为52.0%、88.0%、100.0%.提示:多价单抗Dot-ELISA阳性检出率仍处于较低水平,其敏感性并未提高.

双特异性嵌合抗体的制备及斑点红细胞免疫技术的建立

目的 建立一种简便、直观的检测血吸虫循环抗原的方法。方法 以N 琥珀酰亚胺基 3 (2 吡啶基二硫 )丙酸酯为交联剂制备了抗血吸虫单克隆抗体与抗人“B”型红细胞单克隆抗体的双特异性嵌合抗体 ,并建立了以人“B”型红细胞为标志物的斑点红细胞免疫技术 (Dot RCIA)用以检测血吸虫抗原。结果 初步应用于检测血吸虫循环抗原表明 ,本方法具有较好的检测效果 ,同时方法简单、可肉眼判读结果。

单克隆抗体反向间接血凝诊断血吸虫病的现场应用研究

在现场条件下,用双盲法对单克隆抗体反向间接血凝试验(McAb—RIHA)诊断血吸虫病的效果进行了观察。结果显示,McAb—RIHA 与 Kato 法粪检总的样本检测符合率达80.0%,与粪检阳证样本的符合率(校正)达83.9%,对粪检阳性,McAb-RIHA 阴性的样本复查排除37.5%(3/8)的粪检假阳性,对粪检阴性,McAb—RIHA 阳性的样本Kato 法复查一次(3张涂片)检出24.6%的样本阳性(14/57),是总样本粪阳率6.79%(34/501)的2.62倍,与单克隆抗体斑点酶联免疫吸附试验(McAb—Dot—ELISA)的检测结果比较,两法无显著性差异。实验结果表明,McAb-RIHA 在现场用于诊断血吸虫病具有较为理想的准确性,且其操作简便、诊断快速,具有较高的现场实用性。

McAb-Dot-ELISA检测血吸虫循环抗原的现场查病应用

将 McAb-Dot-ELlSA 检测循环抗原法应用于血吸虫病疫区现场查病125例。结果:居民循环抗原阳性率为44.0%,较粪检虫卵阳生率26.4%高(P<0.01),两者符合率为83.3%;治疗后3个月循环抗原阴转率为63.6%,较抗体阴转率10.9%高(P<0.01)。提示:McAb-Dot-ELISA 检测循环抗原法较粪检法检出率高,与 IHA 检测抗体法比较具有近期疗效考核价值。

抗SARS-CoV-2 S蛋白IgM单克隆抗体的表达及鉴定

为了寻求SARS-CoV-2 IgM抗体阳性血清质控品的替代品,本研究成功表达纯化出抗SARS-CoV-2 S蛋白IgM单克隆抗体。研究确定了IgM单克隆抗体最佳表达载体为含增强子sp163和信号肽2的组合以及第5d为目的蛋白收获的最佳时间。此外在研究J链的作用时发现转染细胞时不添加J链(nCoV-163-IgM3)的表达量明显高于添加J链(nCoV-163-IgM3 J)时的表达量,J链对蛋白稳定性也无明显影响,且nCoV-163-IgM3和nCoV-163-IgM3 J抗原结合活性之间的差别无统计学意义(P>0.05),nCoV-163-IgM3和nCoV-163-IgM3 J对本研究所检测的WTS1、Alpha-S1、Beta-S1、Delta-S1、Omicron-S1、BA.2-S1、BF.7-RBD、XBB.1-S1、BQ1.1-S1等九种抗原均有结合活性,只有一株(BA.2.75-RBD)逃逸。纯化后的目的蛋白经还原剂(β-ME)还原后显示重链分子量大小为70kD左右,轻链分子量大小为25kD左右。目的蛋白均可与新型冠状病毒抗体检测试剂盒(胶体金,INNOVITA)、SARS-CoV-2 S蛋白IgM抗体酶联免疫吸附测定试剂盒(Elabscience)、抗SARS-CoV-2 S-RBD蛋白人IgM抗体酶联免疫吸附测定试剂盒(Proteintech)等三种试剂盒反应。

抗山羊IgMμ链单克隆抗体的制备及鉴定

将构建的山羊IgMμ链的原核表达重组质粒pET30a-IgMμ转化至大肠杆菌BL21中,诱导表达获得重组蛋白His-IgMμ;以Ni-NTA亲和层析法纯化His-IgMμ重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,经细胞融合、抗体筛选和细胞克隆等杂交瘤细胞技术,筛选能稳定分泌抗山羊IgMμ链单克隆抗体的杂交瘤细胞株;采用小鼠腹腔诱生腹水的方法制备出抗IgMμ链单抗,并鉴定单抗的生物学特性。结果,成功构建了重组表达载体pET30a-IgMμ,诱导表达、纯化得到了目的蛋白;获得了4株能稳定分泌抗山羊IgMμ链单克隆抗体的杂交瘤细胞株,4株单抗腹水的效价均达到了1×10^（-4）以上,其中1D8、5D1和6G10株单抗亚型为IgG1,9H8株的亚型为IgG 2a,轻链均为κ;1D8、5D1、6G10和9H8的亲和力平衡解离常数KD分别为1.87×10^（-11）、8.46×10^（-7）、4.26×10^（-9）和4.07×10^（-10）;经Western-blot鉴定,单克隆抗体6G10能特异性识别原核表达的HisIgMμ蛋白。上述研究结果表明,本研究获得了4株高亲和力和效价的抗山羊IgMμ链特异性单克隆抗体,这为山羊感染性疾病的早期诊断、预报预警和防控提供了基础条件。

免疫聚合酶链反应新技术在胃癌血清诊断中的应用

应用本所建立的免疫聚合酶链反应技术(IMMUNO-PCR)检测胃癌患者血清中的肿瘤相关抗原MG7Ag,以探讨其在胃癌诊断中的价值。结果发现,在198例胃癌患者血清中MG7Ag阳性者164例,阳性率为82.8％,其他肿瘤患者的阳性结果分别为:食管癌(15/86),结肠癌(40/90),肝癌(0/84),卵巢癌(1/45),子宫癌(0/27),肺癌(4/66),在非癌患者的检测结果:溃疡病(6/78),慢性胃炎(7/118),慢性肠炎(2/60),正常献血员(2/236)。结果提示,免疫PCR技术对于胃癌包括部分早期胃癌的论断具有重要价值,同时也可能成为肿瘤普查时筛选高危人群的一种有用的工具。