IgM-ELISA法用于日本血吸虫病早期诊断初探

目的 验证血清特异性IgM抗体检测对急性日本血吸虫病的早期诊断价值。方法 采用IgM-ELISA方法检测感染血吸虫的小鼠和急性血吸虫病人血清中的特异性IgM抗体水平，与IgG—ELISA相比较，并与急性血吸虫病人的流行病学调查资料相比对。结果 感染4周时小鼠血清中特异性IgM抗体水平显著升高，5周时阳性检出率达100％，比IgG-ELISA提早2-3周。检测急性血吸虫病人血清阳性率达100％，IgG—ELISA为91．4％。急血病人接触疫水后5周，特异性IgM抗体水平明显高于IgG。7周时两者水平相近，8周时IgG抗体水平超过IgM。结论 IgM—ELISA具有早期诊断急性血吸虫病的价值.

检测NDV特异性IgG、IgM、IgA的间接ELISA方法的建立

本试验以新城疫病毒 (NDV)感染的鸡胚尿囊液经差速离心 ,庶糖密度梯度离心提纯的NDV为包被抗原 ,以纯化的鸡IgG、IgM及IgA免疫兔 ,制备辣根过氧化物酶标记的兔抗鸡IgG、IgM及IgA ,分别建立了检测NDV特异性IgG、IgM、IgA的间接ELISA方法 ,抗原最适包被量为 1.34μg/孔。酶标兔抗鸡IgG、IgM、IgA的最佳稀释度分别为 1∶40 0 ,1∶40 0 ,1∶10 0 ;血清样品检测IgG时 ,最适工作浓度为 1∶40 0 ,检测IgM时为 1∶5 0。该方法具有特异性强、灵敏度度、快速简便等优点 ,适合于对各类新城疫特异性抗体的动态监测和大批检测 。

非洲马瘟VP7蛋白多克隆抗体的制备及IgM捕获ELISA检测方法的建立

为建立早期快速检测非洲马瘟抗体的IgM捕获ELISA(MAC-ELISA)方法,本试验利用大肠杆菌表达出具有良好抗原性的VP7蛋白,并制备该蛋白的多克隆抗体,通过优化抗原浓度、血清稀释度及酶标抗体稀释度等,建立了检测非洲马瘟的MAC-ELISA方法,并进行了初步应用。结果表明,利用重组表达的VP7蛋白成功建立了检测非洲马瘟的MAC-ELISA方法。

TORCH-IgM捕获法ELISA试剂盒的研制和应用

目的 为了发展TORCH近期感染的IgM酶免疫诊断技术。方法 以抗人IgMMcAb包板 ,加待检血清、TORCH抗原 ,接着加酶标记的抗TORCH McAb ,最后加 3,3’ ,5 ,5’ 四甲基联苯胺 (TMB)显色。用这种自制的捕获法ELISA(C ELISA)试剂盒和HOPE公司的间接法ELISA(I ELISA)试剂盒平行检测 1196份孕妇血清TORCH IgM。结果 C ELISA试剂盒检出阳性血清 6 7份 ,并经其他试验证实为阳性。其中 4份用I ELISA试剂盒检测为阴性。由乳胶凝集试验诊断为类风湿因子(RF)阳性的 2份血清 ,经I ELISA试剂盒检测为阳性 ,但经C ELISA试剂盒检测为阴性。结论 在检测孕妇TORCH IgM方面 ,C ELISA比I ELISA有更强的敏感性和更高的特异性。C

IgM捕捉ELISA检测肾综合征出血热试剂盒研制

目的开发可靠、稳定、方便的肾综合征出血热诊断试剂。方法羊抗人μ链抗体包被聚苯乙烯酶标板,纯化抗汉坦病毒核蛋白单克隆抗体,并用辣根过氧化物酶标记后与纯化的汉坦病毒汉滩型(HTNV)核蛋白抗原一起使用作示踪剂,结合四甲基联苯胺-过氧化氢(TMB/H2O2)酶底物系统,制成检测肾综合征出血热早期特异性IgM抗体捕捉ELISA试剂盒。结果与间接ELISA试剂同步检测46份出血热病人血清和46份正常人血清进行对比,2种试剂检测结果完全相符,特异性、稳定性和重现性好。结论重组抗原IgM捕捉ELISA检测试剂盒敏感、可靠,方便基层医院和门诊使用,可用于肾综合征出血热的早期诊断及监测。

ELISA检测梅毒IgM抗体在早期梅毒诊断中的应用

为探讨ELISA法检测梅毒螺旋体IgM抗体 (Tp -IgM)在早期梅毒诊断中的意义 ,本文对确诊的 6 7例早期梅毒、3例早期神经梅毒、3例不定期潜伏梅毒患者与 2 6名非梅毒对照 ,采用ELISA方法 ,进行血清 /脑脊液的梅毒螺旋体IgM抗体检测 ,同时作RPR及TPPA检测。结果表明 ,ELISA、RPR及TPPA的特异性分别为10 0 %、88.5 %和 10 0 % ;ELISA法对于早期梅毒的敏感性 (95 .5 % )高于RPR和TPPA(均为 83.6 % ) ,而在 3例不定期潜伏梅毒血清和 3例早期神经梅毒脑脊液中 ,ELISA各检出 2例阳性。提示ELISA法检测Tp -IgM对早期梅毒的诊断价值优于RPR和TPPA 。

捕捉法ELISA检测流行性乙型脑炎IgM抗体用于早期快速诊断

以流行性乙型脑炎(乙脑)病毒感染C6/36细胞制备的乙脑抗原,用于捕捉法ELISA检测病人血清或脑脊液中的乙脑IgM抗体,可早期快速诊断乙脑病人。检测了62份可疑乙脑病人的血清,並以血凝抑制法作对照。结果,血凝抑制法的阳性检出率为35％(其中包括IgM阴性IgG阳性的6例),而捕捉法ELISA IgM的检出率为46.6％。另有6例双份血清,血凝抑制法有4倍升高,临床确诊为乙脑,经本法检测IgM抗体全部阳性。用本法查病人脑脊液中的IgM抗体,阳性检出率达到88.8％。结果可靠,还可将乙脑与疱疹病毒脑炎区别开。

单抗捕获ELISA法检测禽多杀性巴氏杆菌特异性IgM抗体

本试验采用纯化的鸡IgG和环磷酰胺预处理后,再以亲和层析纯化的鸡IgM免疫BALB/C小鼠,运用淋巴细胞杂交瘤技术,以间接ELISA法筛选,获得了5株能稳定地分泌抗鸡IgM(μ链)特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经ELISA交叉反应性试验和羊抗鸡IgM(μ链)抗血清阻断试验,证明这5株单克隆抗体均是抗鸡IgM(μ链)特异性的。应用该抗鸡IgM(μ链)单克隆抗体建立了检测鸡抗多杀性巴氏杆菌血清中特异性IgM抗体的抗体捕获ELISA(Mac-ELISA),本法具有很高的特异性和良好的重复性。用于检测鸡抗多杀性巴氏杆菌的特异性IgM抗体发现:鸡在注射免疫接种多杀性巴氏杆菌灭活菌苗后,第4天即可检测到IgM抗体,并且上升较快,峰值在第2周,滴度较高(1∶5120);鸡在口服免疫接种多杀性巴氏杆菌弱毒活菌苗后IgM抗体上升缓慢,峰值在第4周左右,滴度较低(9∶320);鸡由不同途径感染不同的多杀性巴氏杆菌强毒后第8天时,IgM抗体滴度均明显上升。我们认为,Mac-ELISA方法是检测鸡抗多杀性巴氏杆菌特异性IgM抗体的良好方法,本项试验方法对建立检测鸡抗其它病原微生物的特异性IgM抗体方法具有借鉴意义。

用捕捉ELISA法检测类脊髓灰质炎患者血清中肠道病毒71型IgM抗体以进行早期诊断

以肠道病毒71型(EV71)感染Vero细胞制备的EV71抗原,用于IgM捕捉ELISA法检测类脊髓灰质炎(类脊灰)患者血清中EV71 IgM抗体,特异性高,敏感性及稳定性良好。154例脊髓灰质炎(脊灰)病毒IgM阴性的可疑脊灰患者血清中EV71 IgM抗体阳性检出率为14.9％(23/154)。病后第2天的标本即可测出EV71 IgM,5至12天者抗体滴度较高,病后第40天的标本尚可测出EV71 IgM。本法是EV71感染的早期快速诊断方法,可用于与脊灰的鉴别诊断。

单克隆抗体捕获ELISA检测鸡多杀性巴氏杆菌IgM抗体

应用抗鸡ＩｇＭ单克隆抗体建立了检测鸡抗多杀性巴氏杆菌（Ｐ．ｍ．）血清中特异性ＩｇＭ抗体的单克隆抗体捕获ＥＬＩＳＡ，其敏感性、特异性、重复性优于间接ＥＬＩＳＡ。用于检测鸡抗Ｐ．ｍ．的特异性ＩｇＭ抗体发现：鸡在注射免疫Ｐ．ｍ．灭活苗后第４天即可检测到ＩｇＭ抗体，并且上升较快，峰值在第２周为１：５１２０；鸡在口服免疫Ｐ．ｍ．弱毒活苗后ＩｇＭ抗体上升缓慢，峰值在第４周左右，滴度较低为１：３２０；鸡在由不同途径感染不同的Ｐ．ｍ．强毒后第８天时，ＩｇＭ抗体滴度都明显上升。同时应用间接ＥＬＩＳＡ检测ＩｇＧ抗体滴度进行比较。本项研究对建立检测鸡抗其它病原微生物特异性ＩｇＭ抗体方法具有借鉴意义。

检测脊髓灰质炎IgM抗体捕捉法ELISA的建立及其在早期快速诊断中的应用

首次建立了用于脊髓灰质炎快速、分型诊断的血清IgM抗体捕捉法ELISA。检测了52例疑似病人,IgM阳性率为76.9％(40/52),而粪便病毒分离率仅为44.2％(23/52),前者的阳性检出率明显高于后者。做病毒分型诊断结果,与分离病毒中和试验定型的总符合率为92.86％(39/42)。检测601例来自全国各省的脊灰疑似病人血清,其阳性率波动于13％～92.3％,平均为61.1％。阳性率与收集血清的病日相关,发病0～3天收集者,阳性检出率为69.5％,4～25天者为64％,26～54天者为52％,55天以上者则未能检出。本检测方法需时1.5天,简便、敏感、特异,重复性良好,适用于脊灰的早期快速诊断。对其实用性进行了讨论。

猪圆环病毒2型IgM抗体间接ELISA的建立

猪圆环病毒2型（PCV2）是断奶仔猪多系统衰竭综合症的重要原发性病原,其感染的早期检测有助于及时采取防控措施。以重组衣壳蛋白（Cap蛋白）作为包被抗原,通过对反应条件的优化,建立了PCV2 IgM抗体间接ELISA,其最适抗原包被浓度为1.25μg/mL,最适血清稀释度为1∶100,临界值为0.35。该检测方法与其他5种常见猪疫病阳性血清无交叉反应,特异性良好。批内、批间重复试验的变异系数均在2%-6%,重复性好。对100份临床样本的检测结果表明,该检测方法与国外同类试剂盒相比,敏感性为90.3%,特异性为92.8%,总符合率为92%。试验结果表明,所建立的PCV2 IgM间接ELISA特异性好和敏感性高,适用于PCV2感染早期的流行病学调查。

抗鸡IgM单克隆抗体的研究──Ⅱ．检测抗鸡IgMμ链单克隆抗体的间接ELISA法

采用饱和硫酸铵盐析、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ２００柱层析和羊抗鸡ＩｇＭμ链抗血清亲和层析等方法从鸡血清中纯化ＩｇＭ，同时采用硫酸钠盐析及ＤＥＡＥ离子交换层析从鸡蛋黄中纯化ＩｇＧ。以纯化的ＩｇＭ和ＩｇＧ包被酶标反应板，进行双排筛选，建立了检测抗鸡ＩｇＭμ链单克隆抗体的间接ＥＬＩＳＡ法。ＩｇＭ和ＩｇＧ最适包被浓度为１μｇ／ｍｌ，ＨＲＰ－羊抗鼠ＩｇＧ最适工作浓度为１：２０００。从４７８孔杂交瘤细胞中共检出３０孔阳性，阳性检出率约为６．２８％。试验结果表明此方法具有特异性强、重复性好、敏感性高等优点。

检测HFRS患者血清IgM抗体的快速ELISA捕捉法的建立及其与常规法的比较

建立了检测ＨＦＲＳ患者血清ＩｇＭ抗体的快速ＥＬＩＳＡ捕捉法。通过对微板进行预处理，在稀择液中加入一定浓度的ＰＥＧ和ＮａＣｌ，用快速漱洗３次代替３×３ｍｉｎ洗涤，以及适当提高酶标抗体的使用浓度等措施，加快了反应速度，缩短了反应时间，从包被微板至出结果，仅需１００ｍｉｎ。通过对２１４份ＨＦＲＳ患者血清、３３份健康人血清、１９份其他发热患者血清，以及１５份ＲＦ阳性血清的检测，证明该法特异性强、敏感性高、简便快速、便于推广使用。

ELISA对幽门螺杆菌感染血清IgG、IgA、IgM抗体检测的诊断价值

应用酶联免疫吸附试验(ELISA)对无选择性作内镜检查的90例患者血清,分别作抗HPlgG、lgA、lgM特异性抗体的检测,同时与胃粘膜活检组织块的镜检、培养、快速尿素酶试验的结果进行比较。ELISA检测结果显示血清lgG、lgA、lgM抗体的阳性率分别为71.1％(64/90)、56.6％(51/90)、56.6％(51/90),lgG检出率均高于镜检法65.6％(59/90),尿素酶试验55.6％(50/90)、培养法36.7％(33/90)、但lgA、lgM检出率略低于镜检法、而与尿素酶试验相近,高于培养法。三类抗体的灵敏度、特异度分别为81.4％、54.8％(lgG);57.5％、45.2％(lgA);50.8％、32.3％(lgM),提示对特异性lgG抗体水平的检测具有较高的诊断价值。

新型ELISA检测戊型肝炎病毒IgM抗体的敏感度与特异度评价

目的 评估基于戊型肝炎病毒（HEV）主要免疫表位多肽及其截短多肽的新型ELISA检测抗HEV IgM的敏感度与特异度.方法 根据抗HEV抗体与主要免疫表位多肽的高反应性以及与截短多肽的不反应性,分别以两种多肽为包被抗原,建立新型ELISA法,检测2007-2012年收集的612例可疑HEV感染者血清抗HEV IgM,并与万泰HEV IgM抗体诊断试剂盒检测结果比较,结果不一致血清用免疫印迹法（Western blotting）确认,χ^2检验比较两种试剂灵敏度和特异度.结果 抗HEV IgM检测中,新型ELISA阳性326例,阴性286例;万泰试剂阳性370例,阴性242例;两种试剂同时阳性320例,同时阴性236例.在万泰试剂阳性而新型ELISA阴性的50例中,Western blotting证实阳性21例,阴性29例;在万泰试剂阴性而新型ELISA阳性的6例中,Western blotting显示阳性与阴性各3例.以两种试剂同时阳性或Western blotting阳性为标准,万泰试剂与新型ELISA灵敏度分别为99.1％（95％ CI：0.972-0.998）和93.8％（95％ CI：0.907-0.961）,差异有统计学意义（χ^2=13.988,P＜0.001）;特异度分别为89.2％（95％ CI：0.847-0.925）和98.9％（95％ CI：0.965-0.997）,差异有统计学意义（χ^2=22.466,P＜0.001）.结论 与万泰试剂相比,新型ELISA检测抗HEV IgM敏感度略低,但特异度较好,可减少抗HEV IgM检测中的假阳性.

ELISA方法和胶体金方法对MP-IgM抗体检测的效果比较

目的:比较ELISA方法和胶体金方法对肺炎支原体IgM抗体的检测效果。方法:采用ELISA方法和胶体金方法对1 100例疑似肺炎支原体感染患儿血清肺炎支原体IgM抗体进行平行测定,并计算阳性率、漏检率。结果:(1)ELISA方法检测的阳性率为9.82%(108/1 100),胶体金方法检测的阳性率为8.10%(89/1 100),两方法差异无统计学意义(χ~2=1.80,P>0.05),两方法检测结果的符合率为98.3%。(2)胶体金方法的漏检率为17.6%;在反应5 min、10 min、20 min时,漏检率分别为44.4%、20.4%和17.6%。结论:胶体金方法检测肺炎支原体IgM抗体存在一定的漏检率,反应时间越短,漏检率越高,不能完全取代ELISA方法,但与ELISA方法相比,其操作简便、快速,在急诊检验方面应用价值更大。

SPA菌体协同ELISA及其在检测血清抗HCV·IgM中的初步应用

采用HCV_1合成抗原多肽,SPA 菌体及酶标记抗人IgM 等建立血清抗HCV.IgM 检测SPA菌体协同ELISA(SPA-ELISA)。以多重替代试验、阻断试验及其2-巯基乙醇破坏试验证实其方法的特异性.将其用于一组临床标本的检测,并对该法检测血清抗HCV-IgM 的优点进行了探讨。

间接ELISA检测无菌性脑膜炎患儿的埃可病毒特异性IgM抗体

目的 :研究检测患儿脑脊液和血清标本的特异性IgM在诊断埃可病毒感染的无菌性脑膜炎的实用价值。方法:采用埃可病毒混合抗原包被酶标板 ,用间接ELISA方法检测脑脊液和血清标本的特异性IgM抗体。结果 :在临床诊断为无菌性脑膜炎患儿的78份脑脊液和203份血清标本中分别有14份 (17.9 % )和48份 (23.6 % )阳性 ,而36份细菌性脑膜炎和30份脑外伤患者脑脊液仅1份阳性 ;细菌性脑膜炎、正常成人血清均为阴性。结论:本方法快速、简便、可靠 ,适合于临床早期诊断。

流行性出血热病毒单克隆抗体的制备及其IgM捕获ELISA的建立

用灭活的流行性出血热病毒（ＥＨＦＶ） 免疫小鼠获得４ 株能分泌ＥＨＦＶ 特异性单克隆抗体（ＭｃＡｂ） 的杂交瘤细胞．Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 结果表明４ 株ＭｃＡｂ 能专一地识别ＥＨＦ 病毒的分子量为５６ｋＤ的囊膜糖蛋白Ｇ２ ．交叉实验结果表明４ 株ＭｃＡｂ 与野鼠型病毒株７６１１８ 和家鼠型病毒株Ｌ９９ ，Ｒ２２ 等均有反应，而与流感病毒、轮状病毒等均无交叉反应，表明４ 株ＭｃＡｂ 具有较高的特异性．用６Ｂ１１ ＭｃＡｂ 组建ＩｇＭ 抗体捕获ＥＬＩＳＡ 试剂盒，试测临床标本．２５ 例临床确诊ＥＨＦ病人血清中特异性ＩｇＭ 抗体全部阳性．７０ 例正常献血员血清全部阴性．ＥＬＩＳＡ 试验方法简单，敏感性好，可建立试剂盒应用于临床．