布鲁菌IgM/IgG抗体检测试剂性能评估技术审评关注点

从技术审评的角度,简述布鲁菌IgM/IgG抗体检测试剂注册申报资料中产品风险管理、原材料的研究、企业参考品的设置、生产工艺及反应体系的研究、分析性能评估及阳性判断值确定等章节的关注点,包括研究方法及质量控制要求等,以便提高产品研发效率,推动行业发展。

四种猪瘟抗体ELISA检测试剂盒的比对

随着我国生物技术的发展,市场上猪瘟试剂盒种类越来越多,淮安市动物疫病预防控制中心实验室从本市辖区内现场采样甲、乙、丙3家各30份血样总计90份生猪全血,离心得到血清样本,以市售A、B、C、D四款试剂盒在同等环境下检测上述90份样本,试验数据的处理使用Excel软件,统计学Kappa一致性分析采用SPSS软件。以A试剂盒作为参照,最终结果显示,试剂盒A和B一致性较好,试剂盒A和D两者之间Kappa一致性为中度,A和C两种试剂盒一致性较差。数据结果显示,在实验室进行猪瘟免疫抗体检测时,还是需要做好甄别,选择有资质有批文的合格试剂盒,以保证数据结果的准确性。本次比对为实验室更加科学有效地进行猪瘟免疫抗体监测提供些许数据支持。

三种口蹄疫病毒O型、A型抗体ELISA检测试剂盒的比较分析

目的:比较不同的口蹄疫病毒O型、A型抗体ELISA检测试剂盒的性能差异,为基层兽医实验室选择合适的试剂盒提供参考。方法:采集174份已免疫的猪、羊血清样品,选用3个不同厂家的口蹄疫病毒O型、A型抗体ELISA检测试剂盒进行抗体检测,比较各试剂盒的抗体阳性率、符合率和便捷性。结果:3种试剂盒的口蹄疫病毒O型抗体检测阳性率均在90%以上,符合率为89.66%;3种试剂盒的口蹄疫病毒A型抗体检测阳性率为56.90%95.98%,差别较大,符合率仅52.87%。结论:3种口蹄疫病毒O型、A型抗体ELISA检测试剂盒的检测结果存在一定差异,且差异具有统计学意义(P<0.05);3种试剂盒均适用于口蹄疫病毒O型抗体的定性测定,不全适用于口蹄疫病毒A型抗体的定性测定。

三种不同猪伪狂犬病gB抗体试剂盒检测对比分析

宁化县动物疫控中心为了在猪伪狂犬病监测及猪场疫病净化工作中选用合适的检测试剂盒,选取三种不同市场主流品牌猪伪狂犬病g B抗体ELISA检测试剂盒对宁化县13家生猪规模养殖场采集的血样进行抗体检测。对三种试剂盒检测猪伪狂犬病gB抗体阳性率、符合率及便捷性进行对比分析。结果显示:三个厂家试剂盒的猪伪狂犬病gB抗体总符合率分别为96.63%、98.50%、98.16%,Kappa值分别为0.917、0.932和0.928。结论:三种不同厂家猪伪狂犬病gB抗体ELISA检测试剂盒检测结果相互间的符合度极强,三种试剂盒均适用于猪伪狂犬病gB抗体的定性测定。

微间隙抗体芯片检测试剂盒及生物仪器研发与应用研究

本研究聚焦于微间隙抗体芯片检测试剂盒及其生物仪器的研发与应用,探讨了微间隙抗体芯片的基本原理、工作机制及其制备工艺。通过对该试剂盒的组成、制备工艺、性能检测及质量控制等方面的分析,对其应用效果进行了评价。详细讨论了该系统的设计原理,硬件结构,软件设计和集成优化。实例分析表明,微隙型抗体芯片及其相关仪器对疾病早期诊断具有较高的敏感性与准确性,极大地提高了临床诊断的效率与可靠性。

量子点标记的新型冠状病毒抗体试剂盒行业分析

新型冠状病毒感染全世界大流行阶段,随着对新型冠状病毒感染的预防、确诊及治疗等方面认识的不断深入,各种体外检测技术与应用产品成为研发人员关注的重点。相较于传统的基因测序及应用广泛的核酸检测,或同为免疫学检测试剂盒的胶体金免疫层析、酶联免疫吸附法(ELISA)、化学发光等技术,新型纳米材料免疫标记试剂盒是一种兼具快速、简便和灵敏度、特异度良好等优点的新型冠状病毒检测方法。本文通过比较不同新型冠状病毒检测方法,重点阐述新型纳米材料免疫标记新型冠状病毒检测试剂盒的商业价值及其潜在应用价值。

体外检测试剂盒阻断剂的制备方法及特性分析

目的探讨体外检测试剂盒阻断剂的制备方法及特性。方法采用6周龄BALB/c小鼠进行抗原免疫,构建杂交瘤细胞并克隆。采用动物体内诱导单克隆抗体的方法大量制备单克隆抗体,分别采用G柱亲和层析、蓝胶+Q柱离子交换层析两种方法进行纯化,核酸蛋白检测仪记录波长280 nm下的光密度(optical density,OD),紫外分光光度计测量成品浓度。采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecylsulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)检测抗体纯度。采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)双抗体夹心法检测该阻断剂(CN302)对假阳性样本的阻断能力。结果G柱亲和层析法提取阻断剂的收率(3个批次分别为6.49、6.12、6.27 g/L)高于蓝胶+Q柱离子交换层析法(3个批次分别为1.78、1.68、1.61 g/L)。两种纯化方法的纯度均高达95%以上。G柱亲和层析法、蓝胶+Q柱离子交换层析法所得阻断剂的活性分别为106.54%、92.45%;与空白组相比,两种纯化方式所得阻断剂CN302对假阳性样本的检出率均降低,其OD值均小于0.2,与基准阻断剂大致相同。G柱亲和层析法所得阻断剂CN302未冻融的活性为99.86%,冻融5次后活性为99.83%。无阻断剂存在时,对假阳性样本检测的OD值约为2.5,最高可达到4.0;加入阻断剂后,OD值明显降低;阻断剂CN302对假阳性样本检测的OD值低于其他阻断剂。结论本研究所得阻断剂能显著消除样本内源性干扰,且活性几乎全部保留。G柱亲和层析法提取抗体的收率和阻断能力均高于蓝胶+Q柱离子交换层析法。

甲型肝炎病毒IgM抗体快速检测试剂国家参考品的建立

目的建立甲型肝炎病毒IgM抗体快速检测试剂国家参考品,制订其质量标准,用于该类试剂的质量评价。方法通过对200多份单采浆站收集到的血浆进行初筛,筛选出16份备选样本。经多家实验室协助标定,分析标定结果,确定参考品的组成及其质量标准,并对参考品稳定性进行评估。结果本参考品由10份阴性参考品、1份最低检出限参考品和重复性参考品组成。质量标准为10份阴性参考品符合率(-/-)应为10/10,最低检出限参考品要求1:40稀释时检测阳性,重复性参考品要求1:15稀释时连续检测10次,结果应均为阳性,且显色度均一。稀释血浆应均为HCV、HBV和HIV标志物阴性。参考品在4℃放置3、7 d和反复冻融2次条件下相对比较稳定。结论成功建立甲型肝炎病毒IgM抗体快速检测试剂国家参考品,可用于该类试剂的质量控制及评价。

检测弓形虫IgM抗体的3种试剂盒的比较分析

目的 评价用于检测弓形虫IgM抗体的 3种市售的试剂盒。 方法 用 3种试剂盒检测 12 5份孕妇的血清 ,比较各试剂盒的阳性检出率、敏感性、特异性和试验效率等。结果 12 5份血清经Bi、Di和So试剂盒检测 ,分别有 12 .8%、15 .2 %和 12 .0 %阳性 ,3种试剂盒检测血清的阳性率之间无显著性差异 (P >0 .0 5 )。Bi、Di和So试剂盒的敏感性和特异性分别为88.9%与 10 0 %、10 0 %与 99.1%和 83.3%与 10 0 % ,试验效率分别为 98.4%、99.2 %和 97.6 %。用WHO国际生物标准化实验室的抗弓形虫血清标准品定量测得 3种试剂盒的灵敏度都是 0 .31IU/ml。Bi试剂盒与Di试剂盒的总符合率为 97.6 % ;Di试剂盒与So试剂盒的总符合率为 96 .8% ;Bi试剂盒与So试剂盒的总符合率为 97.6 %。结论 这 3种试剂盒都能用于弓形虫IgM抗体的常规普筛和血清学诊断。

甲肝IgM抗体诊断试剂盒在甲肝病毒抗原检测中的应用

将HAVIgM -Ab诊断试剂盒用HAV -Ag标准品调控灵敏度后 ,用于检测HAV -Ag ,并比较快速检测法和常规过夜法两种检测方法的测定效果 ,以选择在甲肝疫苗生产中 ,抗原检测的合适方法。经过调控灵敏度后 ,抗HAVIgM诊断试剂盒完全可以用来检测HAV -Ag。并可以正确评价HAV -Ag滴度 ,HAV感染性滴度。适用于甲肝疫苗的检定工作。

布鲁氏菌抗体镧系高敏荧光快速检测试剂盒的研制

本试验选用镧系元素铕(Eu)为荧光物质标记布鲁氏菌脂多糖抗原(LPS),建立了布鲁氏菌抗体高敏荧光免疫层析快速检测试剂盒(Bru-LFICA)。经相关试验验证,得出该试剂盒特异性强,敏感性高,重复性好,符合率高,且兼具操作方便,检测快速(15 min),价廉,不需特殊设备和专业技术人员等优点,特别适合于基层兽医站、养殖场的即时快速检测。

2014年度风疹病毒IgM抗体检测试剂盒国家监督抽验质量分析

目的对风疹病毒Ig M抗体检测试剂盒进行国家监督抽验,评价其质量现状。方法采用法定检验结合探索性研究,对阴阳性符合率、检测限和重复性项目进行检验,结果法定检验显示16批次中15批次合格(93.8%),不合格项目为阴性符合率;探索性研究中仅11批次满足行业标准要求(68.8%),不合格项为阳性样本符合率、检测限和重复性。结论目前上市的风疹病毒Ig M抗体检测试剂盒存在一定的质量问题,建议今后在注册检验中,统一采用行业标准和国家参考盘,以促进企业改进产品质量。

6种非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒的比较

为了比较市场上国产及进口非洲猪瘟病毒(ASFV)ELISA抗体检测试剂盒的产品质量和使用效果,本试验对B、C、D三种进口试剂盒和A、E、F三种国产试剂盒进行敏感性、特异性和重复性比较。结果显示,试剂盒B、D、E、F分析敏感性均为1∶512;试剂盒C分析敏感性为1∶256;试剂盒A分析敏感性为1∶128;诊断敏感性比较结果为试剂盒B>试剂盒D、F>试剂盒E>试剂盒C>试剂盒A;6种试剂盒对7份特异性质控血清的检测结果均为阴性,表明6种试剂盒均具有排除潜在交叉反应的病原抗体的能力;诊断特异性比较结果为试剂盒A、C、D>试剂盒F>试剂盒E>试剂盒B;批内重复性结果显示,6种试剂盒的批内变异系数(CV%)均在15%以内。结果表明,非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测国产试剂盒与进口试剂盒的敏感性、特异性和批内重复性相差无几,国产试剂盒的兴起解决了以往过度依赖昂贵的进口试剂盒的问题,国产化替代进程在不断加速。

不同厂家PEDV-IgA抗体ELISA检测试剂盒的对比分析

为比较市面上常用PEDV-IgA抗体ELISA试剂盒检测结果之间的相关性,挑选不同厂家生产的3款试剂盒检测了68份母猪初乳及78份免疫前后的后备母猪血清,并对检测结果进行了相关性分析。结果表明:不同试剂盒检测初乳和血清PEDV-IgA抗体结果差异较大,在进行实验室检测时,应注意合理选择试剂盒,并科学地分析和利用实验室检测结果。

两种口蹄疫O型、A型抗体检测试剂盒检测猪口蹄疫抗体的应用研究

为研究两种口蹄疫抗体检测试剂盒的应用适用性,对50份血清分别用口蹄疫液相阻断ELISA检测试剂盒和固相竞争ELISA检测试剂盒进行了检测,并比较了两种试剂盒的阳性检出率、特异性、稳定性及检测值与中和抗体的线性关系。结果表明,两种试剂盒在应用方面各有优劣,口蹄疫固相竞争ELISA检测试剂盒具有操作简便、耗时短、成本低的优点,更适用于基层兽医实验室进行口蹄疫抗体定性检测;口蹄疫液相阻断ELISA检测试剂盒可测定血清中的具体抗体效价值,更适用于口蹄疫抗体定量检测。

猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒的研制及应用

利用纯化的重组杆状病毒表达猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白作为检测抗原,建立一种间接ELISA方法用于血清抗体检测。昆虫细胞株(Sf-21)接种重组杆状病毒,对蛋白表达参数及纯化工艺进行了优化,制备了5批重组蛋白抗原,表达量占总蛋白的18.7%左右;Ni2+亲和层析柱纯化获得重组蛋白纯度为90.1%;重组蛋白可被特异性抗体识别,具有良好的免疫活性。用建立的ELISA法对30份已知阴性血清样本检测临界OD405nm值为0.343;ELISA与IPMA对150份血清进行平行检测符合率为95.3%,特异性为91.2%,敏感性为96.5%;与其他几种常见猪病毒参考血清无交叉反应。组装的试剂盒批内和批间变异系数分别为4.0%～4.8%和8.9%～9.9%;置-20℃保存12个月稳定。试剂盒对人工感染猪血清检测结果,接种后第5周抗体阳转,第8周～9周抗体水平达到高峰;对来自黑龙江、吉林、河北、上海等地猪场1085份血清抗体检测,阳性率为73.6%。研制的ELISA试剂盒为临床PCV2血清抗体检测及疫苗免疫效果的评价提供了技术手段。

猪圆环病毒2型免疫过氧化物酶单层细胞试验抗体检测试剂盒的研制及应用

本研究建立了一种免疫过氧化物酶单层细胞试验(Immunoperoxidase monolayer assay,IPMA),用于猪圆环病毒2型血清抗体检测,通过对IPMA反应条件的优化,组装了诊断试剂盒。研究结果表明,用IPMA检测猪圆环病毒2型人工感染猪血清,于感染后3周抗体阳转,第3周～10周抗体阳性检出率为92.8%(52/56),对照组猪血清抗体检测均为阴性(33/33)。试剂盒在-20℃稳定保存18个月与其他几种猪病毒参考血清无交叉反应,与用重组蛋白抗原建立的rcELISA符合率为89.2%。对来自黑龙江、吉林、河北、上海、内蒙古、云南、江西等地猪场健康成年猪血清480份和发病猪血清424份进行了检测,抗体检出率分别为91.7%和79.2%,表明我国猪群中猪圆环病毒2型污染相当严重。该试剂盒的研制为我国PCV2流行病学调查和疫苗免疫效果的评价提供了技术手段。

PRRSV-IPMA抗体检测试剂盒的研制及其应用

建立了一种检测猪生殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）血清抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验法（IPMA），并组装成PRRSV-IPMA抗体检测试剂盒。对该试剂盒的敏感性、特异性、重复性及保存期等进行了试验，并与国外IDEXX ELISA试剂盒进行了比较。结果显示，用该试剂盒检测PRRSV人工接种猪血清样品，第1周抗体阳性检出率为50％，从第2周起抗体阳性检出率均为100％，而对照组猪血清抗体检测均为阴性。该试剂盒重复性好，-20℃保存18个月稳定，与其他病毒参考血清无交叉反应，与国外IDEXX ELISA试剂盒的符合率为83．3%。用该试剂盒对采自黑龙江、吉林、辽宁、河北、上海等地13个猪场的520份正常猪血清样品进行了抗体检测，结果，4个猪场阳性率高达90％以上，仅有2个猪场为阴性，其余猪场阳性率为10％～57%。

猪瘟抗体间接ELISA检测试剂盒的研制和应用

对猪瘟抗体间接ELISA检测试剂盒的稳定性及保存条件等进行了摸索,确定该试剂盒具有良好的稳定性,并可在2℃～8℃环境中的保存9个月。同时,测定了本试剂盒与荧光抗体病毒中和试验的符合率为92.62%;并将该试剂盒应用于免疫动物抗体的动态监测。