非洲马瘟VP7蛋白多克隆抗体的制备及IgM捕获ELISA检测方法的建立

为建立早期快速检测非洲马瘟抗体的IgM捕获ELISA(MAC-ELISA)方法,本试验利用大肠杆菌表达出具有良好抗原性的VP7蛋白,并制备该蛋白的多克隆抗体,通过优化抗原浓度、血清稀释度及酶标抗体稀释度等,建立了检测非洲马瘟的MAC-ELISA方法,并进行了初步应用。结果表明,利用重组表达的VP7蛋白成功建立了检测非洲马瘟的MAC-ELISA方法。

TORCH-IgM捕获法ELISA试剂盒的研制和应用

目的 为了发展TORCH近期感染的IgM酶免疫诊断技术。方法 以抗人IgMMcAb包板 ,加待检血清、TORCH抗原 ,接着加酶标记的抗TORCH McAb ,最后加 3,3’ ,5 ,5’ 四甲基联苯胺 (TMB)显色。用这种自制的捕获法ELISA(C ELISA)试剂盒和HOPE公司的间接法ELISA(I ELISA)试剂盒平行检测 1196份孕妇血清TORCH IgM。结果 C ELISA试剂盒检出阳性血清 6 7份 ,并经其他试验证实为阳性。其中 4份用I ELISA试剂盒检测为阴性。由乳胶凝集试验诊断为类风湿因子(RF)阳性的 2份血清 ,经I ELISA试剂盒检测为阳性 ,但经C ELISA试剂盒检测为阴性。结论 在检测孕妇TORCH IgM方面 ,C ELISA比I ELISA有更强的敏感性和更高的特异性。C

应用捕获ELISA检测肾综合征出血热患者尿液中特异性IgM抗体

目的 检测肾综合征出血热患者尿液中特异性IgM抗体 ,研究早期诊断方法。 方法 :用MacELISA法检测不同病日HFRS病人尿液中特异性IgM抗体。 结果 :HFRS病人尿夜中特异性IgM抗体总阳性率为 76.4 7% ,第 3病日即可出现阳性 ,7- 9病日阳性率可达 83 .87% ,与同期HFRS病人血清抗体检测对比无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 :用MacELISA检测HFRS尿液中特异性IgM抗体敏感性高 ,特异性强 ,适合早期诊断。

运用改良的捕获ELISA法检测流行性出血热特异IgM抗体

本文建立了用于流行性出血热早期诊断的 IgM 捕获 ELISA 法,并通过用葡萄糖氧化酶和葡萄糖代替 H_2O_2,改良了底物反应,提高了反应的敏感性和特异性。用该方法检测临床出血热病人血清,其双份血清 IgM 检出率可达100％,发病3日内和4～10病日的单份血清检测也具有高敏感性。同时对大量正常人血清及其他病人血清的检测未发现交叉反应,说明该方法的高特异性。由于底物系统的改良,使其具有显色明显的特点,适应干无酶标仪地区用目测法诊断。

抗体捕获ELISA检测IgM抗体在新疆出血热病人早期诊断中的应用

采用抗人μ链抗体包被,捕获病人血清标本中的IgM抗体,再加已知的特异性病毒抗原与IgM抗体结合,用抗新疆出血热病毒单克隆抗体酶结合物与病毒抗原结合病人血清中IgM抗体的方法,测定急性期患者特异性IgM抗体,探讨其早期诊断的价值。对8例发病后不同时期的XHF患者进行检测的结果,发病第5天即可检出IgM抗体且滴度已达较高水平,于第14天达高峰后开始下降,但阳性可持续70天以上。而IgG抗体对照检测显示虽然在1/3急性期病人发病第6天即可检出,但滴度很低,第14日后迅速升高,至第70天仍然保持很高滴度。实验结果表明用本法检测IgM抗体进行早期诊断的意义可与病毒分离及特异性病毒抗原的检测结果相比。为XHF的早期诊断提供了一种特异性和敏感性高,并且稳定可靠的诊断工具。

HSV-1重组蛋白GST-G1为抗原的IgM捕获法ELISA的研究

目的研究单纯疱疹病毒1型(HSV-1)近期感染的IgM酶免疫诊断技术。方法用捕获法ELISA(G-ELISA)和HerpeSelect ELISA(H-ELISA)平行检测1296份孕妇血清HSV-1-IgM。结果 G-ELISA检出阳性血清12份,H-ELISA检出阳性血清11份。G-ELISA多捡出的1份阳性,并经其他试验证实为真阳性。乳胶凝集试验诊断为类风湿因子(RF)阳性的6份血清,经H-ELISA检出阳性血清2份,但经G-ELISA试剂盒检测全为阴性。结论在检测孕妇HSV-1-IgM方面,G-ELISA比H-ELISA可能敏感性更强,特异性更高。G-ELISA是诊断HSV-1近期感染的有效方法。

应用捕获ELISA法检测人巨细胞病素特异性IgM抗体的研究

应用捕获ELISA法检测人巨细胞病毒感染者血清特异性IgM抗体。通过与间接ELISA法对 4 7例临床标体的检测比较 ,该法灵敏度及特异性均高于间接法 ,且不受RF的影响。试验表明 ,CMVIgM捕获法特异敏感、简便、快速、重复性好。CMVIgM捕获法试剂的研制成功 ,将为血清学的检测、流行病学的调查及临床诊断等提供可靠的科学诊断依据 。

IgM抗体捕获ELISA法在流行性出血热早期诊断上的应用

流行性出血热(EHF)早期诊断、早期治疗对预后有着重要意义。我们应用IgM抗体捕获ELISA法(Mac ELISA)检测EHF特异性IgM(EHF-IgM),认为该法EHF早期诊断具有重要价值,优于间接免疫荧光(IFAT)、反向被动血凝抑制试验(RpHA)等方法。对此,我们从方法学与临床应用方面对MacELISA法检测EHF-IgM进行了实验观察,获得满意结果。

Mac—ELISA检测虫媒病毒IgM抗体的研究

特异性 IgM 的检测是早期诊断疾病的重要方法之一。近年来检测病毒特异性 IgM 抗体的第三代技术—IgM 捕获 ELISA 法(MacELISA)已广泛应用于病毒性疾病的早期诊断。此法具有较高的特异性和敏感性,我们将之应用于虫媒病毒的诊断中,并对一些实验条件进行了研究。现将结果报告如下。

Mac ELISA法检测血清抗——EHF IgM

近年来,抗体捕获 ELISA 法(Mac ELISA)检测抗-EHF 协助流行性出血热(EHF)诊断已在我省陆续推广。现仅将湘潭市及湘乡市检测情况汇总报告于下。临床资料本组收集1987年11月至1993年4月住院治疗的 EHF104例。其中男性87例,女性17例,平均年龄40.1岁(7～78岁)。诊断标准按卫生部1987年颁布的《流行性出血热防治方案》。另外,收集同期住院的伴有肾功能损害的其它病种42例,作血清抗-EHF IgM 检测对照。

以IgM-捕获ELISA检测BTV感染

用IgM-捕获ELISA来检测牛兰舌病毒(BTV)感染。本实验采用结合于—streptavidin涂渍ELISA平板之生物素捕获抗牛IsM抗体。用BTV VP7抗原和一种VP7抗原—特异单克隆抗体检测捕获IgM抗体。

捕获ELISA法用于肾综合征出血热早期诊断的研究

目的 探讨肾综合征出血热 (HFRS)早期诊断方法。方法 用MacELISA、IFAT二种方法同时检测HFRS病人血清40份 ;非出血热血清20份 ;正常人血清20份进行对比研究。而且 ,阳性血清用2 -巯基乙醇破坏特异性IgM试验 ,阴性血清加类风湿因子阳性血清干扰试验。 结果 用MacELISA法检测HFRS于病程第2日即可出现特异性IgM阳性 ,3～4病日阳性率达89 % ;5～7病日阳性率达100% ,而IFAT法时病日抗体阳性率为55%与70% (P<0.05)。非出血热病人与正常人特异性抗体全部阴性。阳性血清用2 -巯基乙醇破坏IgM后MacELISA检测为阴性 ,阴性血清加类风湿阳性血清后用本法检测无假阳性。结论 两法相比 ,MacELISA法诊断HFRS特异性强 ,灵敏度高 。

汉坦病毒核蛋白及其单抗标记物在建立ELISA试剂中的应用

[目的]利用重组汉坦病毒核蛋白及其单克隆抗体的酶标记物建立IgM捕获ELISA诊断试剂。[方法]制备、纯化重组核蛋白抗原和抗核蛋白单抗并进行辣根过氧化物酶标记,在抗人μ链包被板中结合四甲基联苯胺-过氧化氢(TMB/H2O2)酶底物系统,从血清中检测肾综合征出血热早期特异性IgM抗体,并与免疫荧光抗体法(IFA)进行比较。[结论]检测42份可疑HFRS病人血清,ELISA法和IFA法均阳性的20份,均阴性的19份;ELISA法阴性、IFA法阳性的1份,ELISA法阳性I、FA法阴性的2份,2种方法的差异无统计学意义(配对χ2=0.08,P>0.05)。[结论]用重组汉坦病毒核蛋白及其单克隆抗体的酶标记物建立IgM捕获ELISA诊断试剂可用于HFRS的早期IgM抗体检测。

捕获法ELISA检测TP-IgM抗体在各期梅毒诊断及疗效评估中的应用

目的探讨各期梅毒患者血清抗梅毒螺旋体IgM抗体（TP-IgM）检测的临床意义,以期用于梅毒治疗效果评估。方法通过快速血浆反应素试验（RPR）和梅毒螺旋体颗粒凝集试验（TPPA）对初诊且未经治疗的梅毒疑似患者血清进行筛查和确认;采用捕获法ELISA（Cap-ELISA）对初诊梅毒患者进行梅毒螺旋体IgM抗体检测,然后与TPPA结果进行对比分析;对TP-IgM阳性梅毒患者经正规驱梅治疗1、3、6和12个月后分别进行RPR和Cap-ELISA检测,评估临床治疗效果,并对两种检测方法的优缺点进行综合分析。实验以10例类风湿因子阳性者血清作为非梅毒对照。结果 Cap-ELISA法TP-IgM检测阳性率一期梅毒为77.8%（14/18）,二期梅毒为100%（24/24）,差异无统计学意义（χ~2=3.60,P〉0.05）;潜伏期梅毒TP-IgM抗体阳性率为30.2%,与早期梅毒患者阳性率比较差异有统计学意义（χ~2=40.96,P〈0.05）。10例类风湿因子的阳性患者血清均阴性。Cap-ELISA与TPPA法一期、二期梅毒检出率（72.2%和100%）比较差异无统计学意义（P〉0.05）。TPPA和Cap-ELISA检测潜伏期梅毒的敏感性分别为98.8%和30.2%,差异有统计学意义（χ~2=59.00,P〈0.05）。规范治疗12个月后,一期、二期以及潜伏期梅毒患者Cap-ELISA法TP-IgM阴转率分别为100%、91.7%和50%,RPR试验阴转率分别为85.7%、83.3%和46.1%。结论采用Cap-ELISA检测梅毒螺旋体IgM抗体的灵敏度高、特异性好且操作方便,能够作为早期梅毒诊断和治疗终点判断较为理想的指标。

抗体捕获ELISA检测包虫病人特异性IgM抗体及其应用的研究

用标记抗原、标记抗体、标记抗抗体及ABC四种形式的抗体捕获ELISA法检测包虫病人血清中特异性IgM抗体,结果以ABC-捕获ELISA法阳性率最高为52.5％,标记抗抗体法次之为39.6％,标记抗体法为22.5％,标记抗原法阳性率最低为20.7％。四种方法检测健康人血清均为阴性。手术前的包虫病人血清中特异性IgM抗体的阳性率明显高于手术后者,分别为52,2％和20％。不同寄生部位包虫病人特异性IgM抗体的阳性率没有明显差别。在入院就诊的病人中阳性率为35.4％,而在普查中发现的无症状病人中阳性率达70.5％,说明特异性IgM的检测在包虫病中也具有早期诊断的意义。

应用单克隆抗体测定人弓形虫IgM抗体的研究

为了检测人血清弓形虫IgM抗体 ,采用抗人IgM单克隆抗体和特异性抗弓形虫单克隆抗体建立捕获ELISA法 ,并与PCR方法进行了比较。结果检测 10 6 5份献血员血清 ,检出阳性 3例 ,用PCR方法检测呈阳性结果 ;检测 2 3份类风湿病人血清及 2份弓形虫IgG抗体阳性血清均为阴性反应。说明该方法不受类风湿因子 (RF)和特异性IgG抗体的干扰 ,同时也表明捕获ELISA检测人血清中弓形虫IgM抗体特异性、敏感性良好。

2005年商丘市疑似麻疹病例血清IgM抗体检测分析

目的 通过对商丘市2005年全年麻疹疑似病例血清IgM抗体的检测分析,描述分析2005年商丘市麻疹病例发病的三间分布规律,揭示其流行病学特征.方法 采用捕获ELISA法对全市2005年疑似病例在商丘市疾病预防控制中心麻疹实验室进行血清麻疹IgM抗体测定,结合传染病报卡进行病例确认.结果 2005年商丘市麻疹发病高峰季节在3、4、5月份,主要发病年龄段为7岁～14岁组及1岁～6岁组,麻疹IgM抗体阳性的患者中有免疫史者仅占27.87%,流行强度为局部爆发和散发.结论 目前我市麻疹的计划免疫工作应加强基础免疫和复种工作,提高接种质量同时重视麻疹的流行病学及实验室监测,才能有效、全面地控制麻疹病例的发生,最终达到消除麻疹的目标.