A Sensitive and Specific IgM-ELISA for the Serological Diagnosis of Human Leptospirosis Using a rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2 Fusion Protein

Objective To construct a lipL32//1-1ipL21-OmpL1//2 fusion gene and its prokaryotic expression system, and to establish an enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） using the rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2 fusion antigen of Leptospira interrogans for sensitive and specific detection of IgM in the serum of patients with leptospirosis. Methods lipL32/1-1ipL21-OmpL1/2 fusion genes were constructed using a primer-linking PCFI. The target recombinant protein antigens, rLipL32/1, rLipL21, rOmpL1/2 and rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2, were expressed and the purified antigens were then immobilized to the surface of microplate wells for ELISA-based detection of IgM in the sera of leptospirosis patients; Results Of 493 acute leptospirosis patients, 95.7% and 97.8% were positive by rLipL32/1-LipL21- OmpL1/2-1gM-ELISA using different serum dilutions, which was higher than the rLipL32/1-1gM-ELISA （93.1% and 90.3%）, rLipL21-1gM-ELISA （90.3% and 87.0%）, and rOmpLI-lgM-ELISA （85.6% and 81.1%） （P〈0.01）. All IgM-ELISAs tested negative against 56 non-leptospirosis patients with typhoid fever, hemorrhagic fever or dengue fever. Conclusion Trigeminal fusion antigen increases ELISA sensitivity and the rLipL32/1-LipL21-OmpL1/2- IgM-ELISA is a sensitive and specific serological diagnostic method for clinical leptospirosis.

IgM-ELISA法用于日本血吸虫病早期诊断初探

目的 验证血清特异性IgM抗体检测对急性日本血吸虫病的早期诊断价值。方法 采用IgM-ELISA方法检测感染血吸虫的小鼠和急性血吸虫病人血清中的特异性IgM抗体水平，与IgG—ELISA相比较，并与急性血吸虫病人的流行病学调查资料相比对。结果 感染4周时小鼠血清中特异性IgM抗体水平显著升高，5周时阳性检出率达100％，比IgG-ELISA提早2-3周。检测急性血吸虫病人血清阳性率达100％，IgG—ELISA为91．4％。急血病人接触疫水后5周，特异性IgM抗体水平明显高于IgG。7周时两者水平相近，8周时IgG抗体水平超过IgM。结论 IgM—ELISA具有早期诊断急性血吸虫病的价值.

大黄鱼血清IgM纯化及其兔抗血清的制备

分别用饱和硫酸铵二次盐析法和蛋白A亲和层析法对健康大黄鱼(Pseudosciaena crocea)血清中的免疫球蛋白(IgM)进行分离纯化,所得产物用SDS-PAGE进行检测。结果表明,蛋白A亲和层析法可以较好地分离到高纯度的大黄鱼血清IgM,产物的电泳胶中只有重链和轻链2个条带;饱和硫酸铵二次盐析法除了有这2个条带,还有很多杂带,而且蛋白A亲和层析法更为简便、快速,因此用蛋白A亲和层析法分离纯化IgM优于饱和硫酸铵二次盐析法;大黄鱼免疫球蛋白重链的分子量在76 kD左右;轻链分子量在28 kD左右。用纯化的大黄鱼IgM免疫实验兔,获得效价高达1∶40 960的兔抗鱼IgM血清。本实验所建立的蛋白A亲和层析法提取大黄鱼血清IgM可以方便、快捷地获得高纯度的产物,适合在实验室中纯化鱼类IgM。本研究所制备的兔抗大黄鱼IgM血清可为今后的相关研究工作打下基础。

检测弓形虫IgM抗体的3种试剂盒的比较分析

目的 评价用于检测弓形虫IgM抗体的 3种市售的试剂盒。 方法 用 3种试剂盒检测 12 5份孕妇的血清 ,比较各试剂盒的阳性检出率、敏感性、特异性和试验效率等。结果 12 5份血清经Bi、Di和So试剂盒检测 ,分别有 12 .8%、15 .2 %和 12 .0 %阳性 ,3种试剂盒检测血清的阳性率之间无显著性差异 (P >0 .0 5 )。Bi、Di和So试剂盒的敏感性和特异性分别为88.9%与 10 0 %、10 0 %与 99.1%和 83.3%与 10 0 % ,试验效率分别为 98.4%、99.2 %和 97.6 %。用WHO国际生物标准化实验室的抗弓形虫血清标准品定量测得 3种试剂盒的灵敏度都是 0 .31IU/ml。Bi试剂盒与Di试剂盒的总符合率为 97.6 % ;Di试剂盒与So试剂盒的总符合率为 96 .8% ;Bi试剂盒与So试剂盒的总符合率为 97.6 %。结论 这 3种试剂盒都能用于弓形虫IgM抗体的常规普筛和血清学诊断。

黄鳍棘鲷血清IgM的纯化及兔抗血清的制备

分别采用Sepharose-6B凝胶过滤层析、Phenyl Sepharose FF疏水作用层析和rProtein A Sepharose亲和层析技术纯化黄鳍棘鲷(Acanthopagrus latus)血清IgM,并将这3种层析纯化方法进行了比较。纯化产物进行SDS-PAGE,电泳结果扫描后经Band Scan5.0软件分析显示,单独使用Sepharose-6B凝胶过滤层析或Phenyl Sepharose FF疏水作用层析得到的IgM纯度只有56%左右;二者联合使用纯度可以达到69%,而rProtein A Sepharose亲和层析一步就可以达到89%的纯度;纯化得到的黄鳍棘鲷血清IgM的重链和轻链分子量分别为73.6kD和26.5kD。本研究还以rProtein A Sepharose亲和层析纯化的黄鳍棘鲷血清IgM为抗原,制备其兔抗血清,采用WesternBlot和双向琼脂扩散检测抗血清免疫学活性,并用间接ELISA检测其效价达到1∶25600,为进一步开展黄鳍棘鲷免疫学方面的研究奠定了基础。

草鱼血清IgM蛋白的纯化及抗血清的制备

采用盐析法、重组蛋白A(HiTrapr Protein A Sepharose)亲和层析法分离纯化草鱼血清中的IgM,并通过SDS-PAGE及Western-blot技术对纯化蛋白的部分特性进行分析比较并制备兔抗IgM抗血清。结果表明:33%硫酸铵溶液可以沉淀血清中大部分蛋白,但电泳条带仍较多,其中含有78kD和28kD的条带,因此仅可作为免疫球蛋白粗提的方法;而rProtein A亲和层析法所提蛋白则仅有上述重链(78kD)和轻链(28kD)。Western-blot显示,鼠抗人Ig抗体可与78kD及28kD条带发生发应。rProtein A亲和法提纯蛋白的纯度较高,但含量较低,条带较淡,仅可作为实验室小量提纯草鱼IgM的有效方法。将提纯的蛋白免疫实验兔后可制得效价高达1:25600的兔抗鱼IgM血清,并测得血清蛋白总量和IgM含量分别为25.87mg和4.5mg,IgM占血清蛋白总量的17.39%。本实验所采用的蛋白A亲和层析法提取草鱼血清IgM可以方便、快捷地获得高纯度的产物,适合在实验室中纯化鱼类IgM。同时本研究所制备的兔抗草鱼IgM血清也为今后的相关研究工作打下基础。

检测NDV特异性IgG、IgM、IgA的间接ELISA方法的建立

本试验以新城疫病毒 (NDV)感染的鸡胚尿囊液经差速离心 ,庶糖密度梯度离心提纯的NDV为包被抗原 ,以纯化的鸡IgG、IgM及IgA免疫兔 ,制备辣根过氧化物酶标记的兔抗鸡IgG、IgM及IgA ,分别建立了检测NDV特异性IgG、IgM、IgA的间接ELISA方法 ,抗原最适包被量为 1.34μg/孔。酶标兔抗鸡IgG、IgM、IgA的最佳稀释度分别为 1∶40 0 ,1∶40 0 ,1∶10 0 ;血清样品检测IgG时 ,最适工作浓度为 1∶40 0 ,检测IgM时为 1∶5 0。该方法具有特异性强、灵敏度度、快速简便等优点 ,适合于对各类新城疫特异性抗体的动态监测和大批检测 。

三种IgM酶联免疫试剂盒在麻疹病例实验室诊断中的应用比较

目的对三种抗麻疹病毒IgM酶联免疫试剂盒(海泰快速法、海泰普通法和德国试剂A)在麻疹病例早期诊断的应用进行比较。方法采用双盲法,用三种试剂盒对麻疹疑似病例急性期血清样品平行检测。结果海泰快速法、海泰普通法和德国进口试剂A等三种抗麻疹病毒IgM酶联免疫试剂对170份麻疹疑似病例急性期血清样品的阳性检出率分别为67.65%、64.71%和62.35%;灵敏度分别为100%、99.1%和94.4%;特异度分别为88.7%、95.2%和93.5%;调整一致性分别为95.7%、97.5%和93.7%;约登指数分别为0.887、0.942和0.880。结论三种试剂盒检测结果符合率较高,另外海泰快速法的灵敏度最高,海泰快速法和海泰普通法在敏感性及特异性上都有较为理想的结果,而且海泰快速法试剂操作更为简便、快速,更适合于基层疾病控制部门快速诊断麻疹病例,采取措施,控制疫情。

完整弓形虫P35重组蛋白IgM-酶联免疫吸附测定法检测弓形虫急性感染

为利用重组的完整弓形虫表面抗原P35 GST蛋白对弓形虫感染进行血清学诊断 ,构建了可表达P35 GST的JM10 9细胞株 .采用亲和层析对融合蛋白进行分离和纯化 ,用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和蛋白质印迹 (Westernblot)分析所表达的蛋白质 ,并用纯化的重组蛋白进行IgM 酶联免疫吸附测定法 (IgM ELISA)检测不同病人血清中的抗 P35抗体 .SDS PAGE分析发现P35 GST重组蛋白的大小约 6 0ku ,为一亲水性蛋白 ,蛋白质印迹分析表明该蛋白与弓形虫阳性感染病人的血清有特异性反应 .利用P35 GST为抗原 ,对 6 0例血清进行IgM ELISA分析 ,发现P35 GST可明显区分近期感染和既往感染 ,在弓形虫的诊断上有很大的应用前景 .

用ELISA法快速诊断柯萨奇B组病毒感染的儿童心肌炎

以柯萨奇B组(Cox B)1～5型病毒感染的Vero细胞上清液作为抗原,建立了间接ELISA法和IgM抗体捕捉ELISA法(MacELISA),并分别用于检测心肌炎和非心肌炎患儿血清中Cox B1～5型病毒IgG和IgM抗体。结果IgG类抗体滴度≥6 400者,在80例心肌炎(包括30例急性心肌炎)患儿中有49例,占61.25％,50例非心肌炎患儿中有11例,占22％。两者有显著性差别,u=5.6,P<0.01。而IgM抗体的阳性率,急性心肌炎患儿为73％,心肌炎患儿为32％,总阳性率为47.5％;而非心肌炎患儿仅为8％。30例心肌炎和急性心肌炎IgM抗体阳性者中,以抗Cox B3型的百分率最高,占40％(12例);其次为2型,占33％(10例);4型占17％(5例),1型占6.6％(2例):5型占3.3％(l例)。10例急性心肌炎患儿的双份血清,间接ELISA法检测恢复期IgG抗体呈4倍以上升高或降低者有6例(60％),MacELISA法检测IgM抗体8例(80％)阳性。

甲肝IgM抗体诊断试剂盒在甲肝病毒抗原检测中的应用

将HAVIgM -Ab诊断试剂盒用HAV -Ag标准品调控灵敏度后 ,用于检测HAV -Ag ,并比较快速检测法和常规过夜法两种检测方法的测定效果 ,以选择在甲肝疫苗生产中 ,抗原检测的合适方法。经过调控灵敏度后 ,抗HAVIgM诊断试剂盒完全可以用来检测HAV -Ag。并可以正确评价HAV -Ag滴度 ,HAV感染性滴度。适用于甲肝疫苗的检定工作。

郑州地区儿童急性呼吸道感染的病毒血清学研究

为了解郑州地区儿童急性呼吸道感染人群中病毒感染状况。采用酶联免疫法对1180例急性呼吸道感染患儿进行呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒(AdV)、巨细胞病毒(HCMV)和单纯疱疹病毒(HSV_1)的IgM抗体测定,同时设440例非感染病例和289例正常儿童为健康对照,并对年龄、性别、城乡和季节的感染情况进行分析。结果:观察组RSV、AdV、HCMV、HSV_1的阳性率分别为31.86％、14.7％、20.59％和20.9％与对照组比较差异显著(P<0.01)。提示郑州地区儿童急性呼吸道感染人群中RSV、AdV、HCMV和HSV_1的感染率较高,临床上应重视急性呼吸道感染的病原学研究。

精神分裂症患者弓形虫感染状况的研究

目的 了解河北省张家口地区精神分裂症患者弓形虫感染状况,探讨弓形虫感染与精神分裂症之间的关系。方法 采用酶联免疫吸附试验对222例住院精神分裂症患者及78例健康体检者进行弓形虫循环抗原(CAg)、抗弓形虫抗体IgM、IgG检测。结果 张家口地区精神分裂症患者弓形虫感染率(14.86％)、CAg或IgM阳性率(10.36％)均高于健康体检者(3.85％)、(1.28％),两者之间差异均有显著性(P<0.05);33例弓形虫检测阳性患者中,CAg或IgM阳性率(69.7％)大于IgG阳性率(30.3％)(P<0.01)。结论 张家口地区精神分裂症患者弓形虫感染率高于健康人群,且活动性感染较严重,应加强对弓形虫病的认识,重视精神病患者的弓形虫感染情况。

TORCH-IgM捕获法ELISA试剂盒的研制和应用

目的 为了发展TORCH近期感染的IgM酶免疫诊断技术。方法 以抗人IgMMcAb包板 ,加待检血清、TORCH抗原 ,接着加酶标记的抗TORCH McAb ,最后加 3,3’ ,5 ,5’ 四甲基联苯胺 (TMB)显色。用这种自制的捕获法ELISA(C ELISA)试剂盒和HOPE公司的间接法ELISA(I ELISA)试剂盒平行检测 1196份孕妇血清TORCH IgM。结果 C ELISA试剂盒检出阳性血清 6 7份 ,并经其他试验证实为阳性。其中 4份用I ELISA试剂盒检测为阴性。由乳胶凝集试验诊断为类风湿因子(RF)阳性的 2份血清 ,经I ELISA试剂盒检测为阳性 ,但经C ELISA试剂盒检测为阴性。结论 在检测孕妇TORCH IgM方面 ,C ELISA比I ELISA有更强的敏感性和更高的特异性。C

深圳人群弓形虫感染的血清流行病学调查研究

为了调查目前深圳地区人群弓形虫感染情况 ,本文自 1997年至 1999年采用酶联免疫吸附试验( ELISA)对深圳地区不同人群 12 2 0份血清进行检查 ,结果总人群 Ig G阳性率为 11.15% ,Ig M阳性率为0 .2 5%。其中 ,幼儿组、青少年组、成年组、老年组 Ig G阳性率分别为 2 .33%、 5.68%、 8.90 %、 10 .2 3% ;动物饲养员、屠宰工人的阳性率为 2 3.57%、 2 5.0 0 % ,与阳性率分别为 14 .66%、 7.14 %、 6.32 %、 5.68%的饮食业人员、目前没有与动物接触职业者、医务工作者、中学生之间有显著性差异 ( P<0 .0 0 5) ;男性 Ig G阳性率为 11.73% ,与 Ig G阳性率为 10 .66%的女性比较无差异 ( P>0 .5)。结果显示深圳地区人群感染率有随年龄递增而升高趋势 ,且不同职业之间亦有显著差异性 ,但性别差异无显著性。

深圳地区献血人群弓形虫感染的血清学调查研究

目的了解深圳地区献血人群中弓形虫感染和分布情况。为医疗安全用血提供科学依据。方法采用酶联法(ELISA)检测标本血清中弓形虫的IgG、IgM,初筛检测阳性,复查仍为阳性,判断为阳性。结果对随机抽取的680例无偿献血者进行检测,检出IgG阳性为49例,IgG阳性率为7.21%;IgM阳性2例,IgM阳性率为0.29%。其中18～30岁、31～40岁、41～55岁IgG阳性率分别为5.91%、7.04%和9.26%;在校大学生、外来打工人员、家庭妇女、公务员及企业职员阳性率分别为6.57%、6.98%、11.2%和6.12%;男性、女性IgG阳性率分别为7.6%、6.62%。结论献血者人群中弓形虫感染率随着年龄的增长有增高的趋势;家庭妇女组的阳性率高于其他3组人群;男女人群的阳性率差异无显著性。对于感染弓形虫的献血者存在潜在的输血传播该病的可能性应起重视。

IgM捕捉ELISA检测肾综合征出血热试剂盒研制

目的开发可靠、稳定、方便的肾综合征出血热诊断试剂。方法羊抗人μ链抗体包被聚苯乙烯酶标板,纯化抗汉坦病毒核蛋白单克隆抗体,并用辣根过氧化物酶标记后与纯化的汉坦病毒汉滩型(HTNV)核蛋白抗原一起使用作示踪剂,结合四甲基联苯胺-过氧化氢(TMB/H2O2)酶底物系统,制成检测肾综合征出血热早期特异性IgM抗体捕捉ELISA试剂盒。结果与间接ELISA试剂同步检测46份出血热病人血清和46份正常人血清进行对比,2种试剂检测结果完全相符,特异性、稳定性和重现性好。结论重组抗原IgM捕捉ELISA检测试剂盒敏感、可靠,方便基层医院和门诊使用,可用于肾综合征出血热的早期诊断及监测。

快速酶联免疫吸附试验检测TORCH-IgM抗体的研究

目的建立快速检测TORCH-IgM抗体的方法。方法利用聚乙二醇(PEG)能加速抗原、抗体反应的特点,在常规间接EL ISA法检测TORCH-IgM抗体基础上,在样本稀释液、酶标记物稀释液中各加入3%PEG,以缩短反应时间。结果温育时间缩短到15 m in(37℃)的快速EL ISA法对检测人TORCH-IgM抗体强阳性、弱阳性、阴性标本具有稳定性好,精密性、特异性强的特点;稀释液中不加PEG的常规15 m in法,采用37℃、15 m in试验条件,可能会造成弱阳性标本漏检情况。结论快速EL ISA法的建立为TORCH病原体感染的快速检测和流行病学调查提供了新的手段。

儿童肺炎支原体感染相关心包积液八例临床分析

目的：探讨儿童肺炎支原体（ MP）感染相关心包积液的临床特点,提高对该病的诊治水平。方法回顾2008年1月—2014年12月我院收治的儿童MP感染相关心包积液8例的临床资料,对临床特点、医技检查、治疗方法进行分析。结果8例均急性发病,有发热,咳嗽、气促4例,胸痛、胸闷3例,食欲缺乏1例。就诊初期6例诊断不明确,曾考虑心功能不全3例,川崎病2例,幼年特发性关节炎1例。8例心包积液均由超声心动图检查证实,其中2例因大量心包积液引起压迫症状行心包穿刺抽液处理。均经查血清MP-IgM抗体阳性明确诊断,全部予静脉-口服阿奇霉素序贯疗法治疗,6例痊愈出院,2例好转出院。出院后7例获随访,随访时间3~47个月,无一例复发。结论MP相关心包积液临床相对少见,易与其他导致心包积液的疾病相混淆而误诊,及时应用阿奇霉素疗效及预后均较好。

酶联免疫吸附试验检测梅毒患者血清中抗苍白螺旋体IgM抗体

目的 评价抗苍白螺旋体IgM抗体检测对梅毒的临床意义。方法 用酶联免疫吸附试验 (ELISA)对 72例梅毒患者检测了特异性IgM抗体 ,并与快速血浆反应素环状卡片试验 (RPR)、梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)的检测结果进行比较分析。结果 血清抗苍白螺旋体IgM抗体在一期梅毒的阳性率为 73 3% (11/ 15 ) ,在二期梅毒的阳性率为 88 9% (16 / 18) ,二者差异无显著的统计学意义 (χ2 =1 6 36 3,P >0 10 )。在潜伏梅毒 ,IgM抗体阳性率为 2 6 1% (6 / 2 3) ,非常显著地低于早期显性梅毒 (χ2 =17 6 189,P <0 0 0 5 )。在一期、二期和潜伏梅毒 ,RPR和TPPA的阳性率均为 10 0 %。入组前 2～ 2 4个月已经正规抗梅治疗的梅毒 16例 ,其中IgM抗体阳性2例。结论 ELISA法检测特异性IgM抗体诊断一期梅毒并不优于RPR和TPPA。IgM抗体在潜伏梅毒敏感性低 ,其诊断应依靠RPR和TPPA。目前不推荐单独检测抗梅毒IgM抗体来监测病情和判断疗效。