TP53-R273H/R273C基因突变数字PCR检测方法研究

TP53基因是肿瘤的抑制基因,也是癌症中常用的靶向检测基因。R273H和R273C是TP53基因检测中常见的热点突变。为了建立这2个突变的微滴式数字聚合酶链式反应(ddPCR)检测方法,针对突变位点分别设计了2套ddPCR方法,验证了探针的特异性,并对退火温度和引物探针浓度进行了优化。结果显示,所建立的方法具有良好的特异性和重复性,ddPCR法与重量法之间的相关系数为0.9997和0.9996。R273H和R273C的检出限均为0.02%,定量限均为0.05%。这2套方法可用于准确检测TP53-R273H和TP53-R273C基因突变,为临床应用提供支持。

慢性淋巴细胞白血病IgV(H)基因突变研究进展

慢性淋巴细胞白血病(CLL)免疫球蛋白重链易变区[IgV(H)]基因突变的研究已成为目前CLL异质性研究的热点。根据IgV(H)基因突变情况将CLL分为两型,本文从两型生物学特性、CD38表达、细胞遗传学改变、预后、性别、细胞形态和治疗等方面的异质性作一综述。

广西地区200例儿童α地中海贫血血红蛋白H病基因突变的研究

目的:对广西地区儿童α地中海贫血血红蛋白H病(Hb H病)进行基因分析,明确基因突变类型。方法:应用多重PCR、反向斑点杂交及DNA测序方法进行α地中海贫血基因突变分析;应用统计软件SPSS13.0对数据进行统计分析。结果:200例Hb H病患儿检出104例缺失型Hb H病,占52.0%,包括67例--SEA/-α3.7,36例--SEA/-α4.2,1例--Thai/-α3.7;非缺失型HbH病96例,占48.0%,包括86例--SEA/αCSα,8例--SEA/αQSα,1例--Thai/αCSα及1例--SEA/α△30α。血红蛋白分析显示非缺失型Hb H病患儿的Hb H水平高于缺失型Hb H病(P<0.001)。结论:广西地区儿童Hb H病基因突变类型多样,以缺失型HbH病为主。首次在广西儿童中检出罕见的α2珠蛋白基因密码子30缺失及泰国缺失型α地中海贫血导致的Hb H病,丰富了Hb H病基因突变的研究,可为遗传咨询及将来的产前诊断提供重要的依据和指导。

H3F3A基因突变及H3.3 G34W蛋白表达在骨巨细胞瘤中的诊断意义

目的探讨H3F3A基因突变及H3.3 G34W蛋白表达在骨巨细胞瘤(giant cell tumor of bone,GCTB)中的情况及其诊断意义。方法收集34例GCTB和40例富含破骨样巨细胞的肿瘤(软骨母细胞瘤10例,富于巨细胞骨肉瘤3例,甲状旁腺功能亢进2例,动脉瘤样骨囊肿10例,非骨化性纤维瘤15例)。采用免疫组化EnVision两步法检测H3.3 G34W蛋白表达,采用荧光PCR-毛细管电泳测序法检测H3F3A基因突变。并对两种方法的特异性和敏感性进行对比分析。结果34例GCTB中32例(94.1%)表达H3.3 G34W,40例非GCTB中仅1例(2.5%)软骨母细胞瘤部分表达H3.3 G34W。34例GCTB中33例检出H3F3A突变(97.1%),其中31例(91.2%)为p.G34W,1例为p.G34V,1例为p.G34L突变。40例非GCTB均未检出H3F3A突变。结论H3F3A基因突变及H3.3 G34W蛋白在GCTB的诊断中均具有较高的特异性和敏感性。基因突变检测可以检出GCTB某些罕见突变类型。

HIST1H1E基因突变致Rahman综合征1例并文献复习

目的探讨HIST1H1E基因突变致Rahman综合征的临床及遗传学特点。方法回顾性分析2018年6月收治的1例Rahman综合征患儿的临床资料。以Rahman综合征、HIST1H1E基因、组蛋白H1、突变、Rahman syndrome、HIST1H1E gene、Histone H1为检索词,检索建库至2019年12月中国知网、万方数据库、维普期刊服务平台及PubMed的相关文献进行文献复习。结果患儿,男,2岁8个月,身高98 cm、体质量19 kg、头围54 cm,面容特殊(脸颊丰满,发际线高,眦距增宽,眼睑裂狭窄),严重龋齿,隐睾。血氨基酸及肉碱谱检测示羟异戊酰肉碱增高,乙酰肉碱增高,鸟氨酸降低。骨龄相当于5.5岁。儿童发育筛查(DST)异常。全外显子组基因测序提示患儿HIST1H1E基因存在c.446dupA,p.Ser150Glufs*46杂合突变(新发变异),未在HGMD及gnomAD等数据库中收录,根据美国ACMG变异分类指南评级为致病性变异。检索到英文文献4篇,共31例Rahman综合征患儿,男13例、女18例;包括14种HIST1H1E基因突变型,均位于其C末端结构域94个碱基对的区域中,为移码突变,形成相同的具有38个氨基酸羧基末端的突变蛋白。结论HIST1H1E基因突变导致的Rahman综合征为罕见的常染色体显性遗传病,临床表现为轻度至重度智力障碍,发育落后和不同程度的躯体过度生长,全外显子基因检测可协助诊断。

骨巨细胞瘤中H3F3A基因突变检测及其临床意义

目的分析H3F3A基因在骨巨细胞瘤(giant cell tumor of bone,GCTB)与相关富于巨细胞骨肿瘤中的突变情况,并探讨其与临床病理特征的关系。方法收集32例GCTB和18例纤维结构不良、17例纤维组织细胞瘤、12例动脉瘤样骨囊肿、3例成软骨细胞型骨肉瘤、3例非骨化性纤维瘤、6例软骨黏液样纤维瘤等富于巨细胞的骨肿瘤,采用PCR-Sanger测序法检测福尔马林固定石蜡包埋组织中H3F3A exon2基因突变情况,并分析H3F3A基因突变与GCTB临床病理特征的关系。结果32例GCTB中H3F3A基因突变阳性率为65.6%,而富于巨细胞的骨肿瘤均未检出H3F3A基因突变。GCTB中H3F3A基因突变阳性率在不同性别、年龄、肿瘤大小、发生部位、复发状态之间差异均无统计学意义(P均>0.05),而不同影像学分期中差异有统计学意义(P<0.05),其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级中的阳性率分别为30%、83.3%、80%。H3F3A基因突变阳性率与影像学分期呈正相关(r s=0.416,P<0.05)。结论H3F3A基因突变在GCTB中有较高的特异性,可用于GCTB与相关富于巨细胞骨肿瘤的鉴别诊断。

软骨母细胞瘤中H3.3组蛋白基因突变检测及其临床意义

目的 分析H3.3组蛋白(H3F3)基因在软骨母细胞瘤(CB)与其他骨肿瘤中的突变情况,并探讨其与临床特征的关系。方法 选取31例CB和50例其他骨肿瘤的肿瘤组织。采用Sanger测序法检测所有肿瘤组织中的H3F3基因突变情况,并分析H3F3基因突变与CB患者临床特征的关系。结果 31例CB中H3F3基因突变阳性率为80.6%,其他骨肿瘤均未检出H3F3基因突变。不同H3F3基因突变状态的CB患者性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤直径比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05)。结论 H3F3基因突变在CB中有较高的独特性,可用于诊断CB并与其他骨肿瘤进行鉴别诊断。

中国南方α地中海贫血基因突变型研究

为了进一步完善和建立一套筛查我国α地中海贫血基因突变型的方法 ,研究我国南方两广地区α地中海贫血突变类型及分布情况 ,采用Gap PCR ,nested PCR ,PCR SSCP ,4P ASPCR及序列分析等方法 ,对 35 6例临床初诊为标准型和静止型α地中海贫血患者和 78例血红蛋白H(HbH)病患者进行基因筛查。结果表明 :35 6例标准型和静止型α地中海贫血患者中发现 SEA αα 2 95人 (82 .87% ) ,αα α α3.71人 (0 .2 8% ) ,αα α α4 .2 3人 (0 .84 % )αα ααCS3人 (0 .84 % ) ,αα ααQS1人 (0 .2 8% )和αα αWestmeadα 2人 (0 .5 6 % ) ,没有发现 α4 .2和 α3.7的纯合子患者 ;78例HbH病患者中 SEA αα- 3.72 9人 (37.2 % ) , SEA αα- 4.2 2 0人 (2 5 .6 % ) , SEA ααCS19人 (2 4 .3% ) , SEA ααQS 2人 (2 .6 % )。在 8例未能确定基因突变类型的HbH患者中 ,2例广西籍HbH患者的α 2基因第 6 5密码子 (第二外显子 )有一同义突变 [CD6 5 (GCC→GCG) ]。它与HbH病表型究竟有无关系 ,抑或是DNA单核苷酸多态位点 (SNPs) ,有待进一步研究证实。在方法学方面 ,本研究进一步完善了以PCR为基础的基因诊断方法 ,建立了一种改进的检出非缺失型点突变的 4P ASPCR方法 ,能准确。

p53基因245位点突变对非小细胞肺癌细胞H1299的影响

背景与目的:p53基因突变是肺腺癌发生中的常见的分子生物学事件,第245位点突变为其突变热点之一,因此研究p53基因第245位点突变可能为肺腺癌的诊断、治疗提供一定的理论基础。本研究旨在研究肺癌常见的245位点突变对p53缺失的人肺腺癌细胞系H1299的影响。方法:应用流式细胞术观察脂质体瞬时转染p53基因第245突变体(G245V)对细胞凋亡的影响,同时用稳定转染观察克隆形成率和生长曲线的不同。结果:转染G245V突变体的H1299细胞凋亡平均数低于转染野生型p53基因的细胞,差异有统计学意义(P<0.001);大中克隆形成数量比导入野生型p53基因的细胞大中克隆形成数量明显增多,差异有统计学意义(P<0.05);细胞的生长速度也明显加快。结论:p53基因第245位点发生突变后基本丧失了野生型p53的功能,是肿瘤细胞增殖的原因之一。

纯合子BIGH3R124H基因突变的角膜临床及免疫病理学表型研究

A family was previously reported as suffering from severe granular dystrophy. The phenotypic picture suggested a mix of homozygous and heterozygous family members. Genetic analysis confirms the homozygousity in the patients most severely affected, but shows the disease state to be one of Avellino corneal dystrophy. The previous case reports are extended immunohistological staining using polyclonal antibodies raised against keratofepithelin. This genotype/phenotype correlation study is consistent with incomplete dominance.

食管鳞癌中nm23H1基因表达及突变的研究

目的:探讨食管癌发生发展过程中nm23H1基因表达及突变情况。方法:收集40例手术切除食管鳞癌标本利用RT-PCR及SSCP技术对食管正常粘膜、癌旁粘膜、癌组织、相应淋巴结进行nm23H1基因mRNA表达及突变分析。结果:nm23H1基因在食管正常粘膜及无癌转移淋巴结中高表达,在癌组织及有癌转移淋巴结中低表达。所有检测样品中无发现nm23H1基因突发。结论:nm23H1基因高表达可能对食管癌的发生发展有抑制作用。食管癌中nm23H1基因改变可能不以突发为主。

PCR-SSCP快速检测结核分支杆菌rPOB基因突变

结核分支杆菌的耐药性问题仍是人们长期关注的焦点问题。利福平是当今最主要的抗结核药物之一,如感染菌为利福平耐药,则治疗效果将受到严重影响。因此,利福平耐药性测定尤为重要。然而,由于结核分支杆菌生长缓慢,常规药敏试验需4～6周,不能满足临床之急需。分子生物学技术的不断发展给结核分支杆菌耐药性的快速检测带来了希望。近年的研究表明结核分支杆菌利福平耐药与rPOB基因突变有关。

耐乙胺丁醇结核杆菌embB基因突变检测及意义

目的探讨应用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术检测结核分枝杆菌耐乙胺丁醇(EMB)分离株embB基因突变情况,研究其应用价值。方法采用PCR-SSCP分析68例结核菌株embB。结果以H37Rv标准株为对照,30株药物敏感株的embB基因SSCP泳动均正常,38株耐EMB分离株中25株embB基因SSCP泳动异常,异常检出率占66%。结论部分分枝结核杆菌耐EMB是由于其embB基因突变引起,PCR-SSCP可成为检测部分结核杆菌耐EMB耐药基因的有效方法。

一个短肋骨窒息性胸廓发育不良3型伴多趾家系DYNC2H1基因新突变

目的对1例短肋骨窒息性胸廓发育不良3型伴多趾家系胎儿DYNC2H1基因突变检测和分析,探讨其发病的分子遗传学病因。方法采集第2胎胎儿皮肤和父母外周血进行外显子组测序,采用Polyphen-2,Sift和Provean等生物信息学软件对新的基因突变进行致病性分析,并用PCR-Sanger测序方法对可能的致病突变进行验证。结果先证者检测到DYNC2H1基因存在双杂合突变,分别为c.5984C>T和c.10606C>T,前者遗传于表型正常父亲,后者遗传于表型正常母亲。c.10606C>T(rs562139820)为致病性变异,该变异可导致截断蛋白的产生。该变异在dbSNP数据库中基因频率是0.000 2。c.5984C>T在OMIM、HGMD、Clinvar数据库中未发现相关报道,且正常人数据库(DYDF,dbSNP,千人基因组,千人南方,千人北方,Ex AC)中均未见收录,蛋白质结构预测可能有害(Polyphen-2,Sift和Provean),突变的氨基酸在不同的物种间高度保守。先证者携带的复合杂合突变符合常染色体隐性遗传(AR)复合杂合遗传疾病发病机制;先证者及其家系成员表型及基因型共分离。结论DYNC2H1基因的c.5984C>T突变可能是导致该短肋骨窒息性胸廓发育不良3型伴多趾患者的致病原因。

FUT1基因h235位和h649位罕见突变组合致类孟买血型分子机制研究及家系调查

目的对由两个罕见位点突变组合致类孟买血型进行分子机制研究及家系调查。方法使用血清学试验进行ABO、H抗原检测,并用基因检测方法确认其ABO血型;应用PCR技术扩增FUT1基因,并进行测序分析。结果血清学结果显示:先证者为罕见的类孟买型Bhm,Le(a-b+),先证者父母均为B型Le(a-b+);测序结果显示先证者与其母FUT1基因h235位均为G→C杂合突变。先证者与其父FUT1基因h649位均为G→T杂合突变。结论两个罕见位点突变组合导致类孟买型表型的形成,本研究有利于阐明中国人群类孟买型基因多态性和遗传异质性,为类孟买型的血型鉴定和安全合理的用血提供了数据支持和理论依据。

应用探针熔解分析法检测结核分枝杆菌rpoB基因突变

摘要：目的研究结核分枝杆菌利福平耐药突变实时PCR检测试剂盒（探针熔解分析）的临床应用价值。方法用37株非结核分枝杆菌考察该方法的特异性，用菌株H37Rv考察其检测限，并检测962份结核分枝杆菌培养标本的rpoB基因利福平耐药决定区突变，检测结果经测序验证。结果37株非结核分枝杆菌中仅有3株出现耐药突变峰，检测限考察结果表明该方法每反应可重复检出30个菌。

禽流感病毒通过基因突变适应陆禽

迁徙性水禽是禽流感病毒的自然储存库，而病毒适应陆禽需要进行有效的复制。目前，已在迂徙性水禽中分离到低致病性H5亚型禽流感病毒，一旦该病毒适应陆禽后，可能导致该病的广泛流行。韩国首尔大学的研究人员将一株野生型鸭低致病性禽流感病毒（50—5／2009）通过鸡胚传至20代，观察其遗传学和表型的变化。

高致病性禽流感病毒人际传播的关键基因突变

尽管H5N1亚型禽流感病毒已感染并造成数百人死亡，然而这种病毒并不能在人际间轻易地传播。发表在4月10日《细胞》杂志上的一项研究揭示了可使得H5N1亚型禽流感病毒在雪貂间通过空气传播的最低限度的一组突变。该研究结果对于未来的监测程序具有重要的价值，并有可能提供了潜在流行病毒株出现的一些早期预警信号。

H型高血压患者MTHFR C677T基因多态性及其与血压、HCY水平的关系

目的探讨H型高血压患者亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因C677T位点碱基的分布特征及其与血压、同型半胱氨酸(HCY)水平的关系。方法检测2019年1-8月该院收治的135例H型高血压患者(观察组)的收缩压、舒张压、HCY水平和MTHFR基因C677T位点碱基分布特征,并与134例非H型高血压者(对照组)比较。结果观察组MTHFR基因C677T位点TT纯合子突变频率较对照组高(P<0.01),T等位频率较对照组高(P<0.01)。TT纯合子突变型收缩压和HCY水平较CC型高(P<0.01)。观察组CC、CT和TT型HCY水平高于对照组(P<0.05);在观察组中,TT型HCY水平高于CC型(P<0.05),也高于CT型(P<0.05);在对照组中,TT型HCY水平高于CC型(P<0.05),TT型HCY水平与CT型比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论H型高血压患者MTHFR基因C677T位点TT纯合子突变频率高,MTHFR基因C677T位点碱基突变对收缩压和HCY水平有影响,MTHFR基因C677T碱基突变型携带者HCY和总胆固醇水平升高。