牦牛Ihh基因组织表达分析、SNP检测及其基因型组合与生产性状的关联分析

为了研究牦牛Ihh基因多态位点基因型组合与生产性状间的相关性,发现与牦牛生产性状相关的分子标记,同时进一步研究Ihh基因在牦牛和黄牛各个组织的分布和表达,试验采用高分辨率熔解曲线分析技术(High resolution melting curve,HRM)进行基因型分型和统计等位基因频率,同时,运用荧光定量PCR分析Ihh基因在牦牛和黄牛不同器官的表达差异。试验结果表明,Ihh基因在牦牛和黄牛的所有组织中均表达。然后采用SHEsis和PHASE软件对Ihh基因多态位点进行配对连锁不平衡和单倍型分析,采用SPSS17.0进行多态位点单倍型组合与生产性状关联性分析。结果检测到牦牛Ihh基因外显子3的2个多态位点5855(C/T)和6383(G/A)。群体遗传学分析显示,2个多态位点均表现为高度多态(PIC>0.25);χ2检验表明,甘南牦牛和大通牦牛群体在两个突变位点处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05),而天祝牦牛在2个突变位点处未达到Hardy-Weinberg平衡(P<0.05);多态位点配对连锁不平衡分析发现,2个突变位点之间存在强连锁平衡,有4种单倍型组合;基因型组合主要发现了3种。关联分析表明,Ihh基因2个突变位点的3种基因型组合对牦牛体斜长、体高、胸围、管围和体重有显著差异(P<0.05),具有CTGA基因型组合的牦牛个体在体斜长、体高、胸围、管围和体重方面显著高于CCGG和TTAA型(P<0.05)。因此,综上推断Ihh基因基因型组合与牦牛体斜长、体高、胸围、管围和体重存在相关性。

一短指家系临床特征调查及IHH基因的突变分析

目的探讨广东省一个汉族A1型短指(brachydactyly type A1)家系的临床特征及致病原因。方法在获得知情同意后对该家系成员进行病史采集和临床检测,并对其中7例患者和7例正常亲属采血进行DNA提取,采用聚合酶链反应结合DNA直接测序法对IHH基因的外显子进行突变检测。结果该家系的短指症为A1型,常染色体显性遗传;所有患者第二至第五手指和脚趾的中节指(趾)骨缺失,末节指(趾)骨短小,第一手指的远侧和近侧指骨均缩短;7例患者在IHH基因对应cDNA序列存在G391A(E131K)杂合突变,7例正常亲属均未发现该突变。结论中国广东汉族A1型短指家系的发病机制是IHH基因发生了E131K错义突变所致。

两个先天性并指缺指中国家系IHH基因的突变检测

为了探讨现有的两个并指缺指中国家系基因突变情况,以正常人作为对照,应用PCR和DNA直接测序方法,在两个家系(共7位患者)中研究IHH基因3个外显子的突变情况.检测IHH基因编码区以及外显子和内含子交接区与正常对照有无差异,在所有被检成员中,除第3外显子出现序列多肽性外,其余序列均未发现突变.研究认为这两个家系的致病原因并非IHH基因编码区的突变引起.

IHH基因多点突变病毒载体构建及表达

目的:构建携带IHH WT和E95K、E95G、△E95、D100E突变体的RCAS病毒载体,并验证其有效性;优化RCAS病毒收集方法。方法:PCR扩增得到人IHH基因,采用原位杂交和半定量PCR的方法来验证上述载体能否过表达IHH mRNA;采用细胞裂解法收集RCAS-GFP病毒,通过鸡胚注射、冰冻切片观察的方法了解鸡胚感染情况。结果:构建的上述RCAS病毒载体在鸡胚细胞成功表达;优化了RCAS病毒收集方法,使最终滴度达108IU/ml。结论:该研究为在鸡胚肢芽中过表达不同IHH突变体蛋白打好了基础。

先天性肢端畸形基因分型的研究进展

先天性肢端畸形是人类最常见的出生缺陷之一，不仅影响肢体的外观形态和功能运动，甚至使患者丧失基本的劳动能力。本文主要论述短指（趾）、并多指（趾）畸形的研究进展。

印度刺猬蛋白基因敲除对腓骨骨折小鼠愈合的影响

目的探讨印度刺猬蛋白(Ihh)基因敲除对腓骨骨折小鼠骨愈合的影响。方法将40只刚出生、基因型为Ihh f1/f1和Col 2 a 1-Cre ERT 2的小鼠随机均分为观察组和对照组,观察组小组诱导敲除Ihh基因,对照组不敲除;2组小鼠均制作腓骨骨折模型,于造模后第1、2、3周末时,X线观察小数腓骨骨折线,骨折部位行Micro-CT扫描,同时取血检测血清血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子(TGF-β1)、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(BGP)、钙与磷离子浓度、钙磷乘积,取同时点腓骨样本行ABH染色。结果造模后第2周开始,2组小鼠均有模糊骨折线、且骨性骨痂连接影增多,观察组小鼠的骨折线非常模糊的比例较对照组降低(P<0.05);造模后第2周和第3周时、2组小鼠的结构模型指数(SMI)、组织体积(TV)、骨体积(BV)、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁数量(Tb.N)及血清VEGF、TGF-β1、ALP、BGP水平均较第1周降低(P<0.05),而骨小梁模式因子(Tb.Pf)、骨小梁厚度(Tb.Th)及血清钙离子浓度均升高(P<0.05);与造模后第1周和第2周时比较,造模3周时观察组仅出现少量骨性骨痂,骨小梁小于对照组,且形状不规则,而对照组的骨小梁形状较观察组规则、粗大。结论Ihh基因敲除会抑制腓骨骨折小鼠血管增生,降低钙磷水平,进而影响骨性骨痂的生成,延缓骨折的愈合。

一个短指家系临床特征调查及其致病基因的定位

目的通过对山东省一个A1型短指（brachydactyly type A1，BDA1）家系的临床特征及致病基因分析，确定该病的遗传类型及其发生机制。方法经家系调查及临床检查确定疾病类型；通过致病基因微卫星多态位点进行连锁分析；采用修饰引物产生引入酶切位点的方法来区分突变基因。结果该家系的短指症为A1型，常染色体显性遗传；发病原因为位于染色体2q35—2q36的IHH基因（indian hedgehoggene）发生了G298A（D100N）错义突变。结论中国山东A1型短指家系的发病机理是IHH基因发生了G298A（D100N）错义突变所致。

A 1型短指/趾症的临床实践指南

A1型短指/趾症(bmchydactyly type A1)是首例被记载的常染色体显性遗传病,患者以中节指/趾骨变短、并可能与远节指/趾骨融合为主要特征,迄今为止全球已发现100多个家系。本文对A1型短指/趾症的临床表现、发病机制、诊断标准、治疗方案等进行了总结,旨在提高中国医务工作者对该病的诊断水平,并对患者的临床管理提供建议。