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高致病性猪链球菌双组分系统Ihk/Irr双基因缺失突变株的构建
1
作者
郑美玉
张维瑜
+1 位作者
李咏梅
韩慧明
《北华大学学报(自然科学版)》
CAS
2018年第3期327-333,共7页
目的构建Ⅱ型猪链球菌05ZYH33菌株双组分系统Ihk/Irr的双基因缺失突变株.方法首先对双组分系统Ihk/Irr基因进行序列分析;选取Ihk/Irr基因的相关片段克隆至p ET30a表达载体,进行可溶表达并注射家兔制备抗体;分别将ihk基因上游irr基因下游...
目的构建Ⅱ型猪链球菌05ZYH33菌株双组分系统Ihk/Irr的双基因缺失突变株.方法首先对双组分系统Ihk/Irr基因进行序列分析;选取Ihk/Irr基因的相关片段克隆至p ET30a表达载体,进行可溶表达并注射家兔制备抗体;分别将ihk基因上游irr基因下游各1 kb的片段扩增,将两个片段连接起来;克隆至温敏型p JRS233的穿梭质粒中;利用两步同源重组法获得突变体;分别提取突变株的基因组DNA,RNA及菌体总蛋白,利用PCR,RT-PCR,Western-blot方法验证突变体.结果成功制备了双组分系统Ihk/Irr可溶性表达的蛋白,成功构建了重组的温敏型ikr-p JRS233重组质粒,成功将重组质粒转入猪链球菌05ZYH33中并获得突变株,基因组PCR,RTPCR及Western-blot分别证实了双组分系统Ihk/Irr双基因被成功敲除.结论成功构建重组温敏型的穿梭质粒,导入到猪链球菌05ZYH33菌株中经两步同源重组获得突变株,在基因组DNA,RNA及蛋白水平上验证了双组分系统Ihk/Irr双基因缺失株的成功构建.
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关键词
Ⅱ型猪链球菌
双组分系统
ihk/irr
突变株
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职称材料
题名
高致病性猪链球菌双组分系统Ihk/Irr双基因缺失突变株的构建
1
作者
郑美玉
张维瑜
李咏梅
韩慧明
机构
北华大学基础医学院
北华大学口腔医学院
北华大学基础医学院临床免疫研究中心
出处
《北华大学学报(自然科学版)》
CAS
2018年第3期327-333,共7页
基金
吉林省教育厅科学技术研究项目(2015146)
北华大学博士启动基金项目
文摘
目的构建Ⅱ型猪链球菌05ZYH33菌株双组分系统Ihk/Irr的双基因缺失突变株.方法首先对双组分系统Ihk/Irr基因进行序列分析;选取Ihk/Irr基因的相关片段克隆至p ET30a表达载体,进行可溶表达并注射家兔制备抗体;分别将ihk基因上游irr基因下游各1 kb的片段扩增,将两个片段连接起来;克隆至温敏型p JRS233的穿梭质粒中;利用两步同源重组法获得突变体;分别提取突变株的基因组DNA,RNA及菌体总蛋白,利用PCR,RT-PCR,Western-blot方法验证突变体.结果成功制备了双组分系统Ihk/Irr可溶性表达的蛋白,成功构建了重组的温敏型ikr-p JRS233重组质粒,成功将重组质粒转入猪链球菌05ZYH33中并获得突变株,基因组PCR,RTPCR及Western-blot分别证实了双组分系统Ihk/Irr双基因被成功敲除.结论成功构建重组温敏型的穿梭质粒,导入到猪链球菌05ZYH33菌株中经两步同源重组获得突变株,在基因组DNA,RNA及蛋白水平上验证了双组分系统Ihk/Irr双基因缺失株的成功构建.
关键词
Ⅱ型猪链球菌
双组分系统
ihk/irr
突变株
Keywords
Streptococcus suis serotypeⅡ
two-component system
ihk
/
irr
mutant strain
分类号
Q933 [生物学—微生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
高致病性猪链球菌双组分系统Ihk/Irr双基因缺失突变株的构建
郑美玉
张维瑜
李咏梅
韩慧明
《北华大学学报(自然科学版)》
CAS
2018
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