柴胡皂苷d对人胰腺癌细胞IkB激酶β表达的影响

越来越多的研究表明，IKB激酶（inhibitkappa Bkinase，IKK）的表达异常在肿瘤的发生、发展过程中起着重要的作用。中药柴胡具有明显的抗肿瘤作用，但是其具体作用机制不清。因此，本研究观察柴胡主要药理成分——柴胡皂苷d（Saikosaponin d，SSd）对人胰腺癌细胞IKK-β表达和凋亡的影响，为胰腺癌的治疗提供新思路。

IKB激酶在系统性红斑狼疮患者中表达及与干扰素-α产生的关系

目的研究系统性红斑狼疮（SEE）患者外周血白细胞中IKB激酶（IKK-α）、干扰素（IFN）-αmRNA的表达，并检测血浆中IFN-α的水平，以探讨SLE患者中IKK—α在IFN—α产生中的作用。方法SYB Rgreen dye I实时定量聚合酶链反应（PCR）方法检测外周血白细胞IKK-α和IFN-α的表达；酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测血清IFN吨的水平。结果①SLE患者外周血IKK-αmRNA表达高于对照组（P〈0．05）；在活动组SLE患者中IKK—αmRNA的表达高于非活动组SLE患者（P〈0．01）。②SLE患者IFN-αmRNA的表达低于对照组（P〈0．01），IFN-αmRNA的表达在非活动组SLE患者中低于活动组SLE患者（P〈0．01）。③SLE患者血清中IFN-α的水平高于对照组（P〈0．01），其中，活动组SLE患者血浆IFN-α水平显著高于非活动组患者（P〈0．05）；SLE患者血浆中IFN-α浓度与抗双链DNA（dsDNA）抗体呈正相关（P=001），与补体C3水平呈负相关（P=0．005）。④SLE患者IKK-αmRNA的表达与血浆中IFN-α的水平呈正相关（P=0．001）.结论SLE患者IKK-αmRNA的表达明显增高，且与血浆中IFN-α的水平呈正相关；而血浆中IFN—α的水平与SLE的发病及病情活动相关，提示IKK-α可能在SLE的发病中发挥重要的作用。

IkB激酶在糖尿病性大鼠ED中的作用

目的探讨IkB激酶(Ik kinases,IKK)在糖尿病(diabetes mellitus,DM)性阴茎勃起功能障碍(erectiledy sfunction,ED)中的可能作用。方法注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,分别在注射8周和12周后观察阴茎勃起次数,取大鼠阴茎,Western Blot方法检测IKK蛋白量的变化,ABC免疫组织化学方法检测阴茎IKK的分布和表达。结果 Dm大鼠的阴茎勃起次数明显低于对照组(P<0.01),随病程延长降低;Western Blotting结果显示,DM组阴茎IKK蛋白量明显高于正常对照组(P<0.01),12周DM组明显高于8周DM组(P<0.05);IKK主要分布于阴茎血管、阴茎背神经,与对照组比较,DM组平均光密度值明显上调并随病程延长而上调。结论 DM大鼠阴茎IKK蛋白量的上调可能通过作用于阴茎内的血管、神经参与了糖尿病性ED发病。

I~κB激酶及相关信号转导研究进展

NF κB(nuclearfactor κB)是一种广泛存在的核转录因子 ,它参与多种基因的转录调控 ,与许多重要的生理病理过程关系密切。许多细胞外刺激可诱导NF κB的活性 ,位点特异的NF κB抑制蛋白 (IκB)的磷酸化对于激活NF κB有重要意义。IκK(IκBkinase)的发现为进一步了解NF κB的功能和调控提供了线索。本文综述了IκK的结构。

IκB激酶的激活及其在NF-κB活化过程中的作用

在NF κB二聚体活化过程中 ,IκB激酶 (IKK)通过对抑制性蛋白κB (IκBs)的磷酸化而扮演关键的角色 .IKK复合物在胞浆内有多种存在形式 ,其中 ,IKK α、IKK β两者氨基酸序列 5 2 %的同源性 ,空间构象相似 ,常为催化亚单位 ,而IKK γ则为调节亚单位 ,它们以不同的方式活化IκBs.核因子κB诱导激酶 (NIK)与丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶 1(MEKK1)均为IKK的上游激酶 ,NIK可引起IKK αSer176、IKK β相应位点的磷酸化 ,而MEKK1主要引起IKK β的活化 .通过级联反应 ,使IκBs磷酸化而与NF κB解离 ,致使NF κB被激活并易位入核 。

IκB激酶的研究进展

细胞核因子κB(NF κB)参与机体绝大多数生物过程的调控 ,尤其是在肿瘤细胞的抗凋亡机制中起着关键的作用。NF κB抑制物 (IκB)激酶 (IKK)是NF κB通路中关键的激酶 ,通过作用于IKK而达到治疗疾病的目的 。

IκB激酶的研究进展

ＩκＢ激酶的研究进展陈红清（中国医学科学院、中国协和医科大学皮肤病研究所，南京２１００４２关键词ＩκＢ激酶信号转导转录因子中κ基因结合核因子（ＮＦ－κＢ）由属于癌基因ｒｅｌ表达的Ｒｅｌ蛋白家族的２个亚基组成，最常见的形式是由ｐ６５（Ｒｅｌ－Ａ）和ｐ５...

基于IKKβ/NF-κB通路探究捏脊疗法对颈椎病模型大鼠椎间盘细胞炎症性反应及凋亡的作用

目的探讨捏脊疗法对颈椎病模型大鼠椎间盘细胞炎症性反应及凋亡的影响及可能的作用机制。方法随机选择8只SPF级SD大鼠作为假手术组(雌雄各半),剩余大鼠利用动静力失衡法诱导椎间盘模型,成模大鼠随机分为模型组、捏脊组及对照组,每组各8只,其中捏脊组每日进行捏脊疗法,对照组大鼠每日灌胃美洛昔康片0.75 mg/kg,假手术组、模型组大鼠不作治疗处理,连续28 d。苏木精-伊红(HE)染色检测椎间盘组织病理学变化;原位末端标记(TUNEL)染色检测椎间盘细胞凋亡情况;酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清TNF-α、IL-1β水平;免疫组化技术检测椎间盘组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)蛋白表达水平;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测Caspase-3、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl2)及Bcl2相关X蛋白(Bax)mRNA相对表达量;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测Cleaved Caspase-3、Bax、Bcl2、IκB激酶β(IKKβ)、p-IKKβ、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)、p-IκBα、核因子-κBp65(NF-κBp65)及p-p65蛋白表达情况。结果与假手术组比模型组、捏脊组及对照组大鼠椎间盘组织结构均见有不同程度的退化,髓核组织皱缩,与外部纤维环边界不清,椎间盘病理组织学评分、内部髓核(NP)细胞凋亡率、血清TNF-α、IL-1β水平、椎间盘组织中TNF-α、IL-1β蛋白平均光密度值、Caspase-3、Bax mRNA相对表达量、Cleaved Caspase-3、Bax、p-IKKβ、p-p65及p-IκBα蛋白相对表达量升高,椎间盘组织中Bcl2 mRNA及蛋白相对表达量降低(P<0.05);与模型组比较,捏脊组及对照组大鼠椎间盘组织结构退化逐渐减轻,椎间盘病理组织学评分、NP细胞凋亡率、血清TNF-α、IL-1β水平、椎间盘组织中TNF-α、IL-1β蛋白平均光密度值、Caspase-3、Bax mRNA相对表达量、Cleaved Caspase-3、Bax、p-IKKβ、p-p65及p-IκBα蛋白相对表达量降低,椎间盘组织中Bcl2 mRNA及蛋白相对表达量升高(P<0.05);捏脊组上述指标及因子变化程度不及对照组(P<0.05)。结论捏脊疗法可减轻颈椎病大鼠椎间盘细胞炎症性反应及凋亡,改善椎间盘退变(IDD)进展,其作用机制可能与抑制IKKβ/NF-κB通路有关。

基于IKKε在代谢中的作用探讨健脾清化方对饮食介导肥胖小鼠体脂影响及其机制

目的探讨健脾清化方对肥胖模型(DIO)小鼠体质量的影响及其机制。方法以高脂饲料喂养C57/BL小鼠构建肥胖模型,造模成功后按体质量随机分为模型组(HFD组)、健脾清化方组(JPQH组),另设立正常饲料喂养的C57/BL小鼠为正常对照组(NOR组)。JPQH组按等效剂量15 g·kg^(-1)·d^(-1)灌胃给药,HFD组和NOR组以等量的0.9%Na Cl溶液灌胃干预6周。通过体质量、体脂、肝脏病理等指标评估各组代谢表型的差异;并采用Western blotting法及RT-PCR法检测脂肪组织内IkB激酶ε(IKKε)、解耦联蛋白1(UCP-1)蛋白及基因的表达。结果与NOR组比较,HFD组小鼠体质量、体内脂肪含量显著增高(P<0.05),而健脾清化方能显著改善高脂喂养引起的体质量、体内脂肪增高(P<0.05)。病理观察发现,健脾清化方能显著改善高脂喂养引起的肝脏脂肪异位沉积。与NOR组比较,HFD组脂肪组织内IKKε的蛋白及基因表达明显上调(P<0.05),UCP-1的蛋白及基因表达明显下调(P<0.05);与HFD组比较,JPQH组脂肪组织内IKKε蛋白及基因表达水平降低(P<0.05),而UCP-1的蛋白及基因表达水平提高(P<0.05)。结论健脾清化方能降低肥胖小鼠体内脂肪含量,从而显著改善高脂饲养引起的小鼠体质量增加及脂肪异位沉积,其机制可能与调节IKKε/UCP-1通路,提高机体能量消耗有关。

SUMO化修饰对高糖诱导的大鼠肾系膜细胞IKKγ/NF-κB信号的影响

目的:探讨小泛素相关修饰物(SUMO)化修饰对高糖诱导的肾系膜细胞IκB激酶γ(IKKγ)/NF-κB信号的影响。方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞,设正常对照组、高糖干预组和渗透压对照组:用免疫印迹和RT-PCR法检测各组细胞SUMO1、SUMO2/3、IKKγ和NF-κB p65的表达;用免疫共沉淀检测SUMO与IKKγ蛋白间的相互作用。结果:高糖呈浓度和时间依赖性上调系膜细胞SUMO和NF-κB p65表达(均P<0.01)。各组细胞IKKγ的蛋白与mRNA表达差异无统计学意义(均P<0.05);高糖组SUMO与IKKγ蛋白间的相互作用减弱(均P<0.01)。结论:高糖影响IKKγ的SUMO化修饰,可能参与了高糖诱导的肾系膜细胞NF-κB信号激活的调控。

免疫印迹法检测IKK,IκB和NF-κB在喉癌中的表达

目的 :检测喉癌组织中IKK ,IκB和NF κB的表达 ,并进而揭示其在肿瘤发生发展中的意义 .方法 :采用免疫印迹法 (Westernblot)分析 2 0例喉癌标本和 10例正常喉黏膜标本中IKKα,IκBα,NF κB p6 5的表达 .结果 :喉癌组织中IKKα和NF κBp6 5的表达水平明显高于正常组织 ,IκBα表达水平明显低于正常组织 (P <0 .0 5 ) .结论 :IKK ,IκB和NF κB表达失衡与喉癌的发生发展有着密切关系 .

大鼠顿挫性眼外伤所致白内障动物模型中晶状体上皮细胞IKKα的表达

目的探讨大鼠顿挫性眼外伤后白内障晶状体上皮细胞(LECs)IκB激酶-α(IKKα)的表达。方法将50只Wister大鼠随机分为5组,每组10只。为A组(钝挫伤3d组)、B组(钝挫伤6d组)、C组(钝挫伤9d组)、D组(钝挫伤12d组)和E组(正常对照组)5组。右眼为实验眼,左眼为对照眼。使用20g铁球20cm高度拍打眼球100次。选取晶状体混浊的大鼠于模型制作完毕后3、6、9及12d处死动物,撕取晶状体前囊膜,免疫组织化学方法检测LECsIKKα的表达定位。结果A、B、C、D组大鼠对照眼LECs中,IKKα于胞浆中呈阳性表达,表现为棕黄色颗粒均匀分布于胞浆中。实验眼LECs中,IKKα亦表现为均匀分布的棕黄色颗粒,A组胞浆及胞核内阳性表达较为显著,B组仍能检测到IKKα与胞浆及胞核内的显著阳性表达;C组IKKα于核内表达减弱;D组已检测不到该激酶核内表达;阴性对照组中未见IKKα棕黄色颗粒表达。结论在眼球顿挫伤所致白内障过程中,IKKα作为核转录因子蛋白-κB(NF-κB)的激活因子,其激活作用不仅仅限于在胞浆内启动NF-κB的水平,而可以直接进入细胞核,甚至可能直接参与基因水平炎症损伤过程。

胰高血糖素样肽-1通过抑制NF-κB信号通路减轻白介素-1β诱导的INS-1细胞损伤

目的探讨胰高血糖素样肽-1(GLP-1)对白介素-1β(IL-1β)诱导INS-1细胞损伤的影响及其可能机制。方法体外培养大鼠胰岛素瘤细胞株细胞(INS-1)至对数生长期,根据干预方案进行分组:正常对照组、IL-1β组、GLP-1+IL-1β组。采用MTT法观察细胞活力、荧光实时定量PCR检测细胞内IKKβmRNA水平的表达,免疫印迹法(Western blotting)检测转入细胞核内NF-κB p65亚基的蛋白水平。结果与对照组相比,IL-1β组细胞活力下降29%,差异具有统计学意义(P<0.001);当加入GLP-1预处理后,细胞活力上升了30%,差异具有统计学意义(P<0.001)。与对照组相比,IL-1β组的IKKβmRNA表达显著增加(1.967±0.091vs1±0);当加入GLP-1预处理后,与IL-1β组相比,GLP-1+IL-1β组的IKKβmRNA表达显著降低(1.967±0.091vs1.287±0.084)。与对照组相比,IL-1β组核内NF-κB蛋白水平显著增高(0.814±0.111vs0.396±0.026);而加入GLP-1预处理后,与IL-1β组相比,GLP-1+IL-1β组核内NF-κB蛋白水平显著减少(0.622±0.059vs0.814±0.111)。结论 GLP-1抑制IL-1β诱导的INS-1细胞损伤,其机制可能与其抑制NF-κB信号通路有关。

IKKβ/NF-κB信号通路与骨骼肌胰岛素抵抗

骨骼肌是胰岛素抵抗发生的主要部位。IκB激酶β(IKKβ)/核因子-κB(NF-κB)信号通路通过干扰正常胰岛素信号转导和诱导机体低水平慢性炎性反应,在骨骼肌胰岛素抵抗中发挥重要作用。通过作用于IKKβ/NF-κB信号通路达到治疗2型糖尿病的目的,可成为一个新的研究方向。

补脾益气方药对脾虚哮喘大鼠肺中KKα表达的影响

[目的]研究补脾益气方药对脾虚哮喘大鼠IL-13含量及IKKα表达的影响,揭示其平喘的作用机制。[方法] Wistar大鼠40只,分五组:对照组、脾虚哮喘组、哮喘组、脾虚哮喘中药组、哮喘中药组。ELISA检测大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中1L-13含量;HE染色观察嗜酸性粒细胞(EOs)浸润情况;免疫组化观察肺组织中IKKα蛋白表达。[结果]与对照组比较,哮喘组和脾虚哮喘组IKKα表达及IL-13含量显著增高(P<0.01),且脾虚哮喘组IKKα表达和IL-13含量均高于哮喘组(P<0.05),中药治疗组和哮喘两组比较,IKKα表达和IL-13含量均降低(P<0.05)。[结论]补脾益气方药能调控脾虚哮喘大鼠肺组织中IKKα的表达及BALF中IL-13的含量。

IκB激酶β小分子干扰RNA增敏人胶质瘤细胞替莫唑胺化疗的机制

目的观察IKB激酶B（IKKβ）小干扰RNA（siRNA）对耐替莫唑胺（TMZ）的胶质瘤细胞凋亡的影响，探讨IKKβ siRNA增敏耐药细胞TMZ化疗的机制。方法构建人胶质瘤耐药细胞株TR-U251和TR-LN229细胞，随机分为对照组、50μmol/LIKβsiRNA转染组、低浓度IC20 TMZ治疗组以及50μmol/LIKKβsiRNA＋IC2。TMZ联合治疗组，流式细胞术检测细胞凋亡率，Western blot法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2（bcl-2）、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3（Caspase-3）表达，以及干扰前后核转录因子．KB（NF-KB）p65、0^6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶（MGMT）、Survivin蛋白表达水平。结果TR-U251细胞凋亡率分别为：对照组（2．78±1．67）％、干扰组（11．92±3．06）％、120txmol/LTMZ治疗组（8．18±2．24）％、联合治疗组（35．95±6．07）％；TR-LN229细胞凋亡率分别为：对照组（1．824-0．86）％、干扰组（9．784-4．13）％、60μmol／LTMZ组（8．65±3．64）％、联合治疗组（28．30±4．97）％，两种细胞联合治疗组凋亡率较对照组和单独用药组均显著增加（P〈0．01），联合治疗组bcl-2水平均显著降低，Caspase-3水平均增加；IKK[3RNA干扰后NF-KB、MGMT及Survivin蛋白表达抑制。结论IKK[3RNA干扰通过显著降低TR-U251与TR-LN229中NF-KB、MGMT及Survivin蛋白表达，增高TMZ化疗的凋亡率。

黄芪多糖联合丹参酮对心衰大鼠心肌NF-κB通路过度激活的影响

目的研究黄芪多糖联合丹参酮对心力衰竭(CHF)模型大鼠心肌核因子-κB(NF-κB)通路过度激活的影响。方法以大鼠左冠状动脉结扎术造成心肌梗死后心衰模型。超声心动图观察心功能变化情况,将成模后大鼠分为6组:模型组、黄芪多糖组、丹参酮组、黄芪多糖加丹参酮组、洛伐他汀组、假手术组。光镜下观察心肌病理形态学变化,免疫组化法检查心肌NF-κB的激活,Western blot法检测心肌NF-κB、抑制蛋白IKB及IKB激酶(IKK)蛋白的表达。结果心肌NF-κB被激活,NF-κB的表达明显升高,而IKB及IKK的表达明显降低,应用药物干预后,NF-κB的表达降低,而IKB及IKK的表达升高,差异有显著性(P<0.05)。结论应用益气活血中药对CHF大鼠心肌的心功能损害有一定防治作用,机制可能与抑制NF-κB转导通路过度激活有关。