经靶向OPN激活的IKBα/NF-κB信号通路对细胞自噬、细胞增殖和细胞周期的影响

目的探讨经靶向骨桥蛋白(OPN)激活的IKBα/NF-κB信号通路对低氧环境中肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)的自噬、增殖和周期的影响。方法培养大鼠PASMCs;观察低氧组PASMCs中OPN的表达情况和IKBα/NF-κB的表达情况。将带有OPN(过表达或敲低)的慢病毒与PASMCs共培养,在OPN过表达的PASMCs中加入NF-κB抑制剂QNZ干扰IKBα/NF-κB信号通路,随后在基因和蛋白层面观察OPN对自噬的影响,并在电镜下观察自噬体数量。用5-乙炔基-2-脱氧嘧啶核苷法和流式细胞术检测OPN对细胞增殖能力和细胞周期的影响。结果低氧组PASMCs表达的OPN高于常氧组(P<0.05),低氧组NF-κB高于常氧组(P<0.05)。常氧组可通过PASMCs过表达OPN激活NF-κB来抑制自噬蛋白LC3B、Beclin1,加入NF-κB抑制剂后可以促进PASMCs的自噬蛋白表达(P<0.05);干扰低氧组PASMCs中OPN的表达可以进一步促进自噬蛋白和自噬小体的表达(P<0.05)。抑制PASMCs中OPN和NF-κB的表达可以阻断细胞从G0/G1期向S期过渡并减弱由OPN增多引起的增殖(P<0.05)。结论经靶向OPN可以激活IKBα/NF-κB信号通路;激活的IKBα/NF-κB信号通路对低氧环境中PASMCs的自噬、增殖和细胞周期产生影响。

髓源性生长因子对2型糖尿病小鼠胰岛素抵抗及肝脏炎性反应的影响

目的观察髓源性生长因子(MYDGF)对2型糖尿病小鼠胰岛素抵抗及肝脏炎性反应的影响。方法C57小鼠分为对照组,糖尿病组(DM)和MYDGF干预糖尿病组(MYDGF)。干预12周后,检测空腹血糖(FBG)、胰岛素水平并推算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)与白细胞介素6(IL-6)水平,肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(Catalase)的酶量,HE染色观察肝脏形态结构,Western blot检测IKKβ/IkBα信号途径。结果与DM组相比,MYDGF组的FBG[(6.91±0.71)mmol/L vs.(19.46±1.12)mmol/L]、胰岛素水平[(13.29±1.42)mU/L vs.(21.88±1.58)mU/L]与HOMA-IR[(4.08±0.65)vs.(18.90±1.37)]明显降低(P<0.05),TNF-α[(32.17±3.18)ng/L vs.(66.39±4.51)ng/L]、IL-6[(13.65±0.89)ng/L vs.(21.55±3.27)ng/L]浓度明显降低(P<0.05),肝脏SOD[(297.54±20.43)U/mg vs.(198.32±19.29)U/mg]、GSH-Px[(0.65±0.05)U/mg vs.(0.19±0.04)U/mg]、Catalase[(220.34±19.82)U/mg vs.(134.69±18.81)U/mg]酶量显著增多(P<0.05),肝细胞脂肪变与炎性细胞浸润明显改善,IKKβ[p-IKKβ:IKKβ,(0.97±0.10)vs.(1.39±0.11)]和IkBα[p-IκBα:IκBα,(0.93±0.07)vs.(1.44±0.06)]的磷酸化水平显著升高(P<0.05)。结论MYDGF能改善胰岛素抵抗,其作用可能是通过激活IKKβ/IkBα信号途径减轻肝脏炎症反应。

基于IKKβ/NF-κB通路探究捏脊疗法对颈椎病模型大鼠椎间盘细胞炎症性反应及凋亡的作用

目的探讨捏脊疗法对颈椎病模型大鼠椎间盘细胞炎症性反应及凋亡的影响及可能的作用机制。方法随机选择8只SPF级SD大鼠作为假手术组(雌雄各半),剩余大鼠利用动静力失衡法诱导椎间盘模型,成模大鼠随机分为模型组、捏脊组及对照组,每组各8只,其中捏脊组每日进行捏脊疗法,对照组大鼠每日灌胃美洛昔康片0.75 mg/kg,假手术组、模型组大鼠不作治疗处理,连续28 d。苏木精-伊红(HE)染色检测椎间盘组织病理学变化;原位末端标记(TUNEL)染色检测椎间盘细胞凋亡情况;酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清TNF-α、IL-1β水平;免疫组化技术检测椎间盘组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)蛋白表达水平;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测Caspase-3、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl2)及Bcl2相关X蛋白(Bax)mRNA相对表达量;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测Cleaved Caspase-3、Bax、Bcl2、IκB激酶β(IKKβ)、p-IKKβ、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)、p-IκBα、核因子-κBp65(NF-κBp65)及p-p65蛋白表达情况。结果与假手术组比模型组、捏脊组及对照组大鼠椎间盘组织结构均见有不同程度的退化,髓核组织皱缩,与外部纤维环边界不清,椎间盘病理组织学评分、内部髓核(NP)细胞凋亡率、血清TNF-α、IL-1β水平、椎间盘组织中TNF-α、IL-1β蛋白平均光密度值、Caspase-3、Bax mRNA相对表达量、Cleaved Caspase-3、Bax、p-IKKβ、p-p65及p-IκBα蛋白相对表达量升高,椎间盘组织中Bcl2 mRNA及蛋白相对表达量降低(P<0.05);与模型组比较,捏脊组及对照组大鼠椎间盘组织结构退化逐渐减轻,椎间盘病理组织学评分、NP细胞凋亡率、血清TNF-α、IL-1β水平、椎间盘组织中TNF-α、IL-1β蛋白平均光密度值、Caspase-3、Bax mRNA相对表达量、Cleaved Caspase-3、Bax、p-IKKβ、p-p65及p-IκBα蛋白相对表达量降低,椎间盘组织中Bcl2 mRNA及蛋白相对表达量升高(P<0.05);捏脊组上述指标及因子变化程度不及对照组(P<0.05)。结论捏脊疗法可减轻颈椎病大鼠椎间盘细胞炎症性反应及凋亡,改善椎间盘退变(IDD)进展,其作用机制可能与抑制IKKβ/NF-κB通路有关。

NF-κB及其相关分子研究进展

NF κB是细胞内一种重要的核转录因子 ,它参与炎症反应、免疫反应、细胞凋亡及肿瘤发生等多种生物进程。NF κB的活化是涉及多种信号转导分子的复杂过程 ,它们包括κB抑制蛋白、IκB激酶及其上游信号分子等。本文就NF

电刺激小脑顶核对局灶脑缺血/再灌注后大鼠脑组织NF-кB、PPARγ、IкBα和COX-2mRNA表达的影响

目的:观察电刺激小脑顶核(FNS)对大鼠局灶脑缺血/再灌注(I/R)大脑缺血侧皮质PPARγ、IкBα和NF-кB P65蛋白表达的变化,以及对下游炎症因子COX-2 mRNA表达的影响,探讨FNS对大鼠局灶脑缺血/再灌注后脑保护作用的机制。方法:采用SD大鼠建立局灶I/R模型,随机分为6组。正常对照组(NC组)、缺血再灌注组(I/R组)、缺血再灌注后小脑顶核刺激组(FNS组),根据再灌注时间不同分为7d和14d两个亚组。采用免疫组织化学法检测NF-κB P65蛋白表达,分别采用Western blotting和逆转录—聚合酶链反应法(RT-PCR)检测PPARγ、IкBα蛋白和COX-2 mRNA表达,同时检测各组脑梗死体积。结果:免疫组织化学显示I/R 7d组和I/R 14d组NF-κB P65、PPARγ和IкBα蛋白较正常组显著增加(P<0.05),FNS组NF-κB P65蛋白表达显著低于相应I/R组(P<0.05),Western blotting检测显示FNS组PPARγ、IкBα蛋白表达明显高于相应正常组及I/R组(P<0.05),RT-PCR显示FNS组COX-2 mRNA表达较I/R组显著降低(P<0.05),而FNS组脑梗死体积较单纯I/R组明显减小(P<0.05)。结论:FNS可有效提高脑缺血/再灌注后PAARγ及IкBα表达,抑制由NF-κB P65调控的下游炎症因子COX-2mRNA的表达,减轻脑梗死体积,这可能是FNS发挥中枢神经保护的机制之一。

人参二醇组皂苷对内毒素休克大鼠心肌组织CD14、IkB和NF-κ B p65表达的影响

目的通过观察内毒素诱导的休克大鼠心肌CD14、核因子-κB抑制蛋白(IκB)和核因子-κB亚基p65(NF-κB p65)的表达变化,探讨人参二醇组皂苷(panaxadiolsaponin,PDS)对休克大鼠心肌保护作用的相关机制。方法 40只Wistar大鼠分为空白对照组(CTR)、内毒素休克模型组(LPS)、地塞米松治疗组(DEX)和人参二醇组皂苷治疗组(PDS)。LPS(5 mg/kg)舌下静脉注射复制休克模型,当动脉血压降至初始血压的2/3时作为判定休克的标准。记录不同时间段平均动脉压(mean arterial pressure,MAP),各组大鼠分别于休克后2 h和4 h测定血清谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、肌酸激酶(creatinekinase,CK)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性,采用R T-PCR方法检测心肌组织CD14和IκB mR NA水平,Western blotting检测CD14和NF-κBp65蛋白质表达水平。结果各组大鼠注入LPS 5min后进入休克状态,并在10min后MAP代偿性回升,但LPS组从休克第45 min MAP进行性下降,而PDS和DEX组在LPS组进入可逆性失代偿阶段后,仍维持代偿性变化;LPS组血清中AST、CK和LDH活性最强,PDS及DEX组酶活性明显低于LPS组(P<0.05);R T-PCR结果显示,LPS组IκB mR NA表达明显减弱,CD14 mR NA表达增强,给予DEX治疗后IκB和CD14 mRNA表达均降低;给予PDS治疗后IκB mRNA表达较LPS组明显增高,而CD14表达明显降低;Western blotting证实,LPS组CD14及NF-κB表达明显增高,给予DEX和PDS治疗后CD14和NF-κB表达受到抑制,其表达量接近CTR组。结论 PDS对休克大鼠心肌具有保护作用,能减轻内毒素血症时心肌表达CD14、IκB和NF-κB p65。

TNF-α和IκBα在内毒素致新生大鼠肺出血中的作用研究(英文)

目的 探讨肿瘤坏死因子 α(TNF α)和核因子 κB抑制蛋白 α(IκBα)在内毒素脂多糖 (LPS)致新生大鼠肺出血发生机制中的作用。方法 将 4 8只 7～ 10日龄Wistar大鼠分为LPS组和生理盐水 (NS)组。LPS组腹腔注射LPS 5mg/kg ,按LPS注射后观察的时间分为 30min ,1h ,2h ,4h ,8h ,16h和 2 4h组 ,每组 6只 ;NS组腹腔注射等量生理盐水作为对照。对鼠肺进行大体和光镜观察 ,分别采用酶联免疫吸附 (ELISA)、反转录聚合酶链反应 (RT PCR)和WesternBlot杂交法动态观察肺组织TNF α蛋白和mRNA表达及IκBα表达的变化。结果 LPS注射后 1h可引起新生大鼠明显的肺出血及炎性改变。肺组织TNF α蛋白含量从LPS注射后 1h增加 ,2h达高峰 ;TNF αmRNA的表达从LPS注射后 0 .5h明显增强 (P <0 .0 1) ,2h达高峰 ;而IκBα于LPS注射后 1h起表达很快减弱 ,明显低于NS组 (P <0 .0 5 ) ,8h表达最弱 (P <0 .0 1)。结论 LPS可致新生大鼠肺出血。新生大鼠肺出血可能与肺组织IκBα蛋白表达减弱 ,导致NF κB活化、TNF α基因转录上调及蛋白合成增加有关。

果蝇Toll和IMD信号通路中的功能结构域

功能结构域在蛋白相互关系中起着重要的作用,在细胞信号通路中,上、下游信号分子结构域间的相互作用,传递着信号。赖氨酸型肽聚糖(Lys-type PGN)(来自革兰氏阳性菌)和β-1,3葡聚糖(β-1,3 glucan)(来自真菌)激活果蝇Toll信号通路;二氨基庚二酸型肽聚糖(DAP-type PGN)和脂多糖粗多糖(LPS)(来自革兰氏阴性菌)激活果蝇IMD信号通路。本文以信号通路为线索,完整地展示各信号分子功能结构域间的相互作用关系,阐述两个信号通路分别降解细胞质中的Cactus和Relish,释放出NF-kB蛋白进入到细胞核的全过程。

益心舒对不稳定性心绞痛患者IKK-IκBα-NFκB通路及相关因子的影响

目的研究益心舒对不稳定性心绞痛患者IKK-IκBα-NFκB通路及相关因子的影响。方法入选64例同期在本院诊断为不稳定性心绞痛患者,并将其随机分为实验组和对照组,每组32例,实验组在对照组治疗的基础上加用益心舒每次3粒,每天3次,所有患者均于治疗前及14后天检测分别检测IKK、IKB、NF-KB、hs-CRP,IL-6,MMP-1及ICTP的表达情况。结果治疗后实验组有效率高于对照组;实验组IKK、NF-KB、IL-6,MMP-1及ICTP水平明显高于对照组,IKB明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论益心舒用于治疗不稳定性心绞痛安全有效,其机制可能与其有效抑制IKK-IκBα-NFκB通路,减轻炎症反应及稳定斑块作用有关。

通心络胶囊对糖尿病小鼠视网膜IKKβ/IKBα/NF-κB通路的作用

目的观察通心络胶囊对糖尿病小鼠视网膜IKKβ/IKBα/NF-κB通路的影响。方法 40只KK/Upj-Ay小鼠随机分为模型组、通心络低(1 g·kg-1)、中(2 g·kg-1)、高(4 g·kg-1)剂量组,每组各10只,10只C57BL/6小鼠为对照组。通心络组按相应剂量灌胃给药,对照组和模型组给予等体积的蒸馏水,每天1次,连续12周。测定体质量、空腹血糖值(fasting blood glucose,FBG),伊文思蓝法(evans blue method,EB)测定血-视网膜屏障的通透性,HE染色法观察视网膜形态学变化,Real-time PCR(qPCR)和Western blot法测定IKKβ、IKBα、NF-κB mRNA和蛋白的表达及P-IKBα和核NF-κB蛋白的表达。结果通心络高剂量组较中、低剂量组细胞结构更致密,排列更有序。通心络低、中、高剂量组EB含量分别(20.82±3.88)ng·mL-1、(16.43±2.60)ng·mL-1、(16.14±2.42)ng·mL-1,较模型组(25.53±3.57)ng·mL-1明显下降(均为P<0.05)。通心络中、高剂量组IKKβmRNA和蛋白表达量较模型组显著下降(均为P<0.01);通心络组IKBαmRNA,通心络中、高剂量组IKBα蛋白以及PIKBα蛋白的表达均较模型组显著下降(均为P<0.01),通心络低、中、高剂量组核NF-κB蛋白表达量为0.52±0.05、0.43±0.05、0.34±0.04,显著低于模型组(0.61±0.07)(均为P<0.05)。结论通心络胶囊可明显改善KK/Upj-Ay小鼠视网膜病变,其机制与抑制IKKβ/IKBα/NF-κB通路相关。

基于IKKε在代谢中的作用探讨健脾清化方对饮食介导肥胖小鼠体脂影响及其机制

目的探讨健脾清化方对肥胖模型(DIO)小鼠体质量的影响及其机制。方法以高脂饲料喂养C57/BL小鼠构建肥胖模型,造模成功后按体质量随机分为模型组(HFD组)、健脾清化方组(JPQH组),另设立正常饲料喂养的C57/BL小鼠为正常对照组(NOR组)。JPQH组按等效剂量15 g·kg^(-1)·d^(-1)灌胃给药,HFD组和NOR组以等量的0.9%Na Cl溶液灌胃干预6周。通过体质量、体脂、肝脏病理等指标评估各组代谢表型的差异;并采用Western blotting法及RT-PCR法检测脂肪组织内IkB激酶ε(IKKε)、解耦联蛋白1(UCP-1)蛋白及基因的表达。结果与NOR组比较,HFD组小鼠体质量、体内脂肪含量显著增高(P<0.05),而健脾清化方能显著改善高脂喂养引起的体质量、体内脂肪增高(P<0.05)。病理观察发现,健脾清化方能显著改善高脂喂养引起的肝脏脂肪异位沉积。与NOR组比较,HFD组脂肪组织内IKKε的蛋白及基因表达明显上调(P<0.05),UCP-1的蛋白及基因表达明显下调(P<0.05);与HFD组比较,JPQH组脂肪组织内IKKε蛋白及基因表达水平降低(P<0.05),而UCP-1的蛋白及基因表达水平提高(P<0.05)。结论健脾清化方能降低肥胖小鼠体内脂肪含量,从而显著改善高脂饲养引起的小鼠体质量增加及脂肪异位沉积,其机制可能与调节IKKε/UCP-1通路,提高机体能量消耗有关。

国外猪肉质量保障体系及其对我国的启示

文章在简述瑞典、德国、美国等猪肉生产先进国家在保障猪肉质量方面的一些做法和经验的基础上 ,总结出了有利于改善我国猪肉质量的重要启示 ,并提出了相应建议。

糖尿病与NF-κB信号转导通路

糖尿病及其合并症的病理生理机制与NF-κB信号转导通路密切相关,NF-κB及其相关基因作为一种转录因子调节众多基因的表达,参与糖尿病及其合并症的发生发展,作用NF-κB信号通路可以作为治疗糖尿病及其合并症的一研究方向。

SUMO化修饰对高糖诱导的大鼠肾系膜细胞IKKγ/NF-κB信号的影响

目的:探讨小泛素相关修饰物(SUMO)化修饰对高糖诱导的肾系膜细胞IκB激酶γ(IKKγ)/NF-κB信号的影响。方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞,设正常对照组、高糖干预组和渗透压对照组:用免疫印迹和RT-PCR法检测各组细胞SUMO1、SUMO2/3、IKKγ和NF-κB p65的表达;用免疫共沉淀检测SUMO与IKKγ蛋白间的相互作用。结果:高糖呈浓度和时间依赖性上调系膜细胞SUMO和NF-κB p65表达(均P<0.01)。各组细胞IKKγ的蛋白与mRNA表达差异无统计学意义(均P<0.05);高糖组SUMO与IKKγ蛋白间的相互作用减弱(均P<0.01)。结论:高糖影响IKKγ的SUMO化修饰,可能参与了高糖诱导的肾系膜细胞NF-κB信号激活的调控。

保肝宁对肝星状细胞中核转录因子-κB活性影响的实验研究

目的观察中药复方保肝宁对肝星状细胞(hepaticstellatecell,HSC)中核转录因子κB(nuclearfactorκB,NFκB)活性的影响及其相关机制。方法给正常Wistar大鼠灌胃保肝宁煎剂7天,制备含药血清,用MTT法检测其对肝星状细胞HSCT6生长的影响,用蛋白印迹实验(Westernblottinganalysis)检测药物作用不同时间NFκB蛋白抑制因子IκB磷酸化水平,用凝胶阻滞实验(gelshiftassay)检测药物作用30min后NFκB与DNA的结合水平。结果中药复方保肝宁对HSCT6细胞生长有显著的抑制作用;可快速抑制IκB磷酸化,30min达到最高水平,6h恢复至基础水平;可改变NFκB与DNA结合水平,使其与DNA结合能力下降。结论中药复方保肝宁能抑制IκB磷酸化,降低NFκB活性,并改变NFκB与DNA的结合水平。

I~κB激酶及相关信号转导研究进展

NF κB(nuclearfactor κB)是一种广泛存在的核转录因子 ,它参与多种基因的转录调控 ,与许多重要的生理病理过程关系密切。许多细胞外刺激可诱导NF κB的活性 ,位点特异的NF κB抑制蛋白 (IκB)的磷酸化对于激活NF κB有重要意义。IκK(IκBkinase)的发现为进一步了解NF κB的功能和调控提供了线索。本文综述了IκK的结构。

NF-κB反义寡核苷酸对博莱霉素致小鼠肺纤维化病理过程中NF-κB/IκB的影响

目的探讨NF-κB反义寡核苷酸对博莱霉素致小鼠肺纤维化病理过程中NF-κB/IκB的影响。方法 C57BL/6肺纤维化模型小鼠造模前6 h,尾静脉注射NF-κB反义寡核苷酸,取肺组织,模型组及对照组分别行原代培养。肺组织及培养细胞进行NF-κB、IκB-α蛋白的免疫组织化学染色及细胞化学染色,并行图像分析,以平均光密度(MOD值)表示各指标的表达量。结果在肺组织及培养细胞中,模型组NF-κB、IκB-α蛋白表达量均较对照组增加(P<0.05),干预组各项指标的表达量均较模型组减少(P<0.05)。NF-κB蛋白与IκB-α蛋白表达呈正相关。结论 NF-κB反义寡核苷酸可以抑制博莱霉素致小鼠肺纤维化病理过程中NF-κB/IκB的表达,从而起到治疗肺纤维化的作用。

IκB激酶的激活及其在NF-κB活化过程中的作用

在NF κB二聚体活化过程中 ,IκB激酶 (IKK)通过对抑制性蛋白κB (IκBs)的磷酸化而扮演关键的角色 .IKK复合物在胞浆内有多种存在形式 ,其中 ,IKK α、IKK β两者氨基酸序列 5 2 %的同源性 ,空间构象相似 ,常为催化亚单位 ,而IKK γ则为调节亚单位 ,它们以不同的方式活化IκBs.核因子κB诱导激酶 (NIK)与丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶 1(MEKK1)均为IKK的上游激酶 ,NIK可引起IKK αSer176、IKK β相应位点的磷酸化 ,而MEKK1主要引起IKK β的活化 .通过级联反应 ,使IκBs磷酸化而与NF κB解离 ,致使NF κB被激活并易位入核 。

人IκBα真核表达载体的构建及其在大鼠肝移植缺血-再灌注损伤中的作用

目的:构建人IκBα真核表达质粒,探讨对大鼠肝移植缺血-再灌注损伤的保护作用。方法:应用RT-PCR和重叠延伸PCR技术,得到点突变的人IκBα,定向克隆至PcDNA3.0真核表达载体。将SD大鼠原位肝移植模型分为三组:Ⅰ组为空白对照组,Ⅱ组为PcDNA3.0空载体转染组,Ⅲ组为PcDNA3.0-IκBα转染组。分别于术后2、12、24和72 h取材。用RT-PCR测定肝组织中核转录因子(NF-κB)p65、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)mRNA的表达及肝功能变化。结果:经酶切和DNA序列测定鉴定,证实重组质粒构建正确;Ⅲ组与Ⅰ组、Ⅱ组相比:NF-κBp65、TNFα、ICAM-1 mRNA的表达水平及肝酶学指标均明显降低(P<0.05)。结论:真核表达质粒PcDNA3.0-IκBα构建成功,IκBα通过抑制NF-κBp65 mRNA的表达及其核移位减轻大鼠肝移植缺血-再灌注损伤。