急性髓细胞白血病模型小鼠B细胞易位基因1和Ikaros家族锌指转录因子1表达水平及相关性分析

目的:探讨急性髓细胞白血病(AML)模型小鼠B细胞易位基因1(BTG1)和Ikaros家族锌指转录因子1(IKZF1)表达水平,并进行相关性分析。方法:36只小鼠随机等分为模型A组、模型B组和对照组。模型A组和模型B组分别经尾静脉注射HL60细胞1×10^(7)/只、5×10^(6)/只,对照组注射等量0.9%氯化钠溶液。采用Western blot检测骨髓组织BTG1和IKZF1蛋白相对表达水平,并与体重、红细胞、血小板及白细胞CD33阳性率进行相关性分析。结果:模型A组和模型B组小鼠在接种第7、14、28天的体重、血小板低于对照组,红细胞高于对照组(均P<0.05),但模型A组与模型B组上述指标比较无统计学差异(均P>0.05)。模型A组和模型B组接种第28天白细胞CD33阳性率高于对照组,BTG1和IKZF1蛋白相对表达水平低于对照组(均P<0.05),但模型A组与模型B组上述指标比较无统计学差异(均P>0.05)。Pearson相关性分析显示,AML小鼠BTG1、IKZF1蛋白相对表达水平与白血病CD33阳性率、体重、红细胞、血小板均存在相关性(均P<0.05)。结论:BTG1、IKZF1蛋白在AML模型小鼠呈高表达,且表达水平与小鼠体重、外周血及肿瘤浸润程度存在相关性。

Fez家族锌指蛋白1反义RNA1在宫颈癌组织中表达及与患者临床特征及预后的相关性

目的观察长链非编码RNA(LncRNA)Fez家族锌指蛋白1反义RNA1(FEZF1-AS1)在宫颈癌组织中表达,及其与患者临床病理特征及预后的相关性。方法取100例宫颈癌患者的宫颈癌组织及相应的癌旁正常组织,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测FEZF1-AS1 mRNA的相对表达量,并分析其与患者临床特征的相关性;原位杂交染色法检测FEZF1-AS1蛋白的阳性表达率,本分析其与患者3年预后的关系。结果宫颈癌组织中FEZF1-AS1的相对表达量和FEZF1-AS1阳性表达率均明显高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.01)。低分化、有淋巴结转移的宫颈癌患者宫颈癌组织中PEZF1-AS1 mRNA的相对表达量均明显高于中高分化、无淋巴结转移的宫颈癌患者,差异均有统计学意义(P<0.01)。Spearman相关分析结果显示,FEZF1-AS1的表达与分化程度与呈负相关(P<0.05),与淋巴结转移呈正相关(P<0.05)。宫颈癌组织FEZF1-AS1阳性表达的宫颈癌患者的3年总生存率为68.42%,低于FEZF1-AS1阴性表达患者的90.32%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论宫颈癌组织中的表达上调,与分化程度、淋巴结转移情况相关,且可能与宫颈癌患者的预后有关。

肉桂醛调节Shh/Gli1信号通路对幽门螺旋杆菌胃炎大鼠胃黏膜损伤的影响

目的 探讨肉桂醛调节音猬因子(Shh)/Gli家族锌指蛋白1(Gli1)信号通路对幽门螺旋杆菌(Hp)胃炎大鼠胃黏膜损伤的影响。方法 将大鼠随机分为对照组、模型组、肉桂醛低剂量组、肉桂醛中剂量组、肉桂醛高剂量组、替普瑞酮组、肉桂醛高剂量+Shh激活剂Purmorphamine(PUR)组,每组18只。通过灌胃Hp的方法构建胃炎大鼠模型。建模成功后,肉桂醛低、中、高剂量组大鼠分别灌胃12.5 mg/kg、25 mg/kg、50 mg/kg肉桂醛,替普瑞酮组大鼠灌胃0.13 g/kg替普瑞酮,肉桂醛高剂量+PUR组大鼠给予50 mg/kg肉桂醛灌胃和6.67 mg/kg PUR腹腔注射,每天给药1次,持续2周。HE染色检测大鼠胃黏膜组织病理变化;透射电镜观察大鼠胃黏膜细胞形态。将GES-1细胞分为vitro-对照组、vitro-模型组、vitro-肉桂醛低剂量组、vitro-肉桂醛中剂量组、vitro-肉桂醛高剂量组、vitro-替普瑞酮组、vitro-肉桂醛高剂量+PUR组。除vitro-对照组外,其他组GES-1细胞均需被Hp感染,感染结束后,vitro-肉桂醛低剂量组、vitro-肉桂醛中剂量组、vitro-肉桂醛高剂量组分别用5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L肉桂醛处理24 h;vitro-替普瑞酮组用1μmol/L替普瑞酮处理24 h;vitro-肉桂醛高剂量+PUR组用20μmol/L肉桂醛和1μmol/L PUR共同处理24 h,CCK-8法检测GES-1细胞增殖抑制率;ELISA法检测大鼠胃黏膜组织及GES-1细胞上清中白细胞介素1β (IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;Western blot检测大鼠胃黏膜组织及GES-1细胞中Shh、Gli1蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠胃黏膜组织病理损伤严重,胃黏膜表面上皮细胞固缩,细胞膜破损,IL-1β、TNF-α水平及Shh、Gli1蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,肉桂醛低剂量组、肉桂醛中剂量组、肉桂醛高剂量组、替普瑞酮组大鼠胃黏膜组织病理损伤、胃黏膜表面上皮细胞结构及形态有所改善,IL-1β、TNF-α水平及Shh、Gli1蛋白表达降低(P<0.05);与肉桂醛高剂量组比较,肉桂醛高剂量+PUR组大鼠胃黏膜组织病理损伤加剧,胃黏膜表面上皮细胞结构及形态破环严重,IL-1β、TNF-α水平及Shh、Gli1蛋白表达升高(P<0.05)。与vitro-对照组比较,vitro-模型组GES-1细胞增殖抑制率、细胞上清中IL-1β、TNF-α水平及细胞中Shh、Gli1蛋白表达升高(P<0.05);与vitro-模型组比较,vitro-肉桂醛低剂量组、vitro-肉桂醛中剂量组、vitro-肉桂醛高剂量组、vitro-替普瑞酮组GES-1细胞增殖抑制率、细胞上清中IL-1β、TNF-α水平及细胞中Shh、Gli1蛋白表达降低(P<0.05);与vitro-肉桂醛高剂量组比较,vitro-肉桂醛高剂量+PUR组GES-1细胞增殖抑制率、细胞上清中IL-1β、TNF-α水平及细胞中Shh、Gli1蛋白表达升高(P<0.05)。结论 肉桂醛可能通过抑制Shh/Gli1通路减轻Hp诱导的胃炎大鼠胃黏膜损伤。

tRF-1:30对高糖诱导的肾小管上皮细胞炎性因子表达的影响

目的探讨tRF-1:30(tRF-1:30-Gln-CTG-4)对高糖(HG)诱导的肾小管上皮细胞(RTECs)中炎性因子表达的影响及分子机制。方法将小鼠RTECs分为Control组、HG组、HG+tRF-1:30 mimic组、HG+tRF-1:30 NC组、HG+si-IKZF2组(IKAROS家族锌指2,tRF-1:30抑制剂)、HG+si-NC组。实时荧光定量PCR检测tRF-1:30、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和IKZF2 mRNA的水平。酶联免疫吸附试验检测炎性因子水平,Western blot检测IKZF2蛋白表达水平,双萤光素酶报告实验验证tRF-1:30和IKZF2的关系。结果在HG诱导的RTECs中炎性因子的表达水平显著升高,而tRF-1:30表达水平显著降低。过表达tRF-1:30显著降低HG诱导的RTECs中炎性因子的表达水平。IKZF2在HG诱导的RTECs中显著高表达,进一步敲低IKZF2可抑制炎性因子的释放,而过表达tRF-1:30后IKZF2的表达水平下调。双萤光素酶报告实验进一步验证tRF-1:30与IKZF2可能存在靶向关系。结论过表达tRF-1:30可能通过负向调控IKZF2的表达进而抑制HG诱导的RTECs炎性因子的释放。

食管鳞状细胞癌组织中SNAI2和FSCN1蛋白表达情况对其预后生存的影响

目的观察食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中SNAIL超家族锌指转录因子2(SNAI2)、肌动蛋白结合蛋白1(FSCN1)表达情况,探讨其对ESCC患者预后生存的影响。方法选取ESCC患者120例,收集患者ESCC组织及癌旁组织,采用免疫组织化学法检测组织中SNAI2、FSCN1表达。随访5年,记录患者生存时间,采用Kaplan-Meier生存曲线分析SNAI2、FSCN1表达与ESCC患者预后的关系,COX回归分析ESCC患者预后的影响因素。结果ESCC组织SNAI2、FSCN1表达阳性率均高于癌旁组织(P均<0.01)。Kaplan-Meier生存曲线显示,SNAI2、FSCN1表达阳性ESCC患者5年生存率低于SNAI2、FSCN1表达阴性患者(P均<0.05)。单因素COX回归分析显示,分化程度、TNM分期、SNAI2、FSCN1是ESCC患者预后的影响因素;多因素COX回归分析显示,TNM分期、SNAI2、FSCN1是ESCC患者预后的独立影响因素(P均<0.05)。结论ESCC组织中SNAI2、FSCN1高表达,SNAI2、FSCN1高表达与ESCC患者不良预后有关,是影响ESCC患者预后的独立危险因素。

Ikaros家族锌指蛋白1基因突变是成人费城染色体阳性急性淋巴细胞白血病预后不良因素

目的观察Ikaros家族锌指蛋白1(IKZF1)基因突变对成人费城染色体(Ph)阳性急性淋巴细胞白血病(ALL)预后的影响。方法2014年1月—2017年1月在宁波市4家医院接受治疗的成人Ph+ ALL患者共63例,收集患者临床资料及初诊时骨髓或外周血标本,采用毛细管电泳法检测IKZF1突变情况,分析IKZF1突变情况与预后的关系。结果63例成人Ph+ ALL中合并IKZF1突变者39例,占61.9%。IKZF1突变组初诊时白细胞计数明显高于IKZF1无突变组[(64.6±11.3)×10^9/L比(33.7±5.6)×10^9/L,P<0.05],突变组白细胞计数≥30×10^9/L者的比例高达56.4%。IKZF1突变组首次诱导化疗4周内的完全缓解率为64.1%,低于IKZF1无突变组(75.0%),但差异无统计学意义(P>0.05)。单因素和多因素分析结果提示,IKZF1突变是影响Ph+ ALL预后的因素,但不是独立影响因素。根据是否接受过异基因造血干细胞移植将全部患者分为化疗组和移植组。化疗组中IKZF1突变者的3年总生存(OS)率和无白血病生存(LFS)率明显低于IKZF1无突变者(24.8%比40.0%;19.0%比34.3%;P值均<0.05)。移植组中IKZF1突变者的3年OS率和LFS率也明显低于IKZF1无突变者(42.3%比59.3%;31.2%比50.0%;P值均<0.05)。结论IKZF1突变是成人Ph+ ALL的一个不良预后因素。

整联蛋白α5β1通过介导Gli1表达影响基底细胞癌的生长与放疗敏感性

目的探讨整联蛋白α5β1对基底细胞癌(BCC)生长和放疗敏感性的影响及分子机制。方法采用免疫组织化学染色检测皮肤BCC组织及正常皮肤组织中α5β1的表达差异。将A431细胞随机分为对照A组(细胞正常培养)、pLEX-MCS组(采用含pLEX-MCS的慢病毒转染细胞)、pLEX-α5β1组(采用含pLEX-α5β1的慢病毒转染细胞)、pLEX-α5β1+Gli家族锌指蛋白1(Gli1)抑制剂组(采用含pLEX-α5β1的慢病毒转染细胞,并添加100μmol/L Gli1抑制剂GANT61处理细胞)。采用实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹法检测细胞内α5β1与Gli1的表达情况;采用MTT法和5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)染色检测细胞增殖能力;通过Hoechst 33258染色观察细胞凋亡形态;采用Transwell实验检测细胞的迁移与侵袭能力。再将A431细胞随机分为对照B组(细胞正常培养)、4 Gy组(采用4 Gy X射线照射细胞)、pLEX-α5β1+4 Gy组(采用含pLEX-α5β1的慢病毒转染细胞,再用4 Gy X射线照射细胞),采用MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果α5β1在皮肤BCC组织中的阳性表达率高于正常皮肤组织(P<0.05)。与对照A组和pLEX-MCS组比较,pLEX-α5β1组细胞中α5β1和Gli1 mRNA和蛋白表达水平均升高,细胞存活率升高,EdU阳性细胞率升高,迁移细胞数与侵袭细胞数均增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与pLEX-α5β1组比较,pLEX-α5β1+Gli1抑制剂组细胞中Gli1 mRNA和蛋白表达水平均下降,细胞存活率降低,EdU阳性细胞率降低,迁移细胞数与侵袭细胞数也均减少,差异有统计学意义(P<0.05)。在处理后培养24、48和72 h时,与对照B组比较,4 Gy组细胞增殖活性明显降低(P<0.05);pLEX-α5β1+4 Gy组细胞增殖活性较4 Gy组明显升高(P<0.05)。4 Gy组细胞凋亡率较对照B组明显升高(P<0.05);pLEX-α5β1+4 Gy组细胞凋亡率较4 Gy组明显降低(P<0.05)。结论α5β1在BCC组织中高表达,能够促进BCC细胞增殖、迁移及侵袭,抑制细胞凋亡,并降低细胞的放疗敏感性,该作用可能与调控Gli1表达有关。

lncRNA FEZF1-AS1和IGF2BP1在肝癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)Fez家族锌指蛋白1反义RNA1(FEZF1-AS1)和胰岛素样生长因子2-mRNA结合蛋白1(IGF2BP1)在肝癌组织中的表达及临床意义。方法:收集行手术治疗的60例原发性肝癌病人的肝癌组织和癌旁组织标本,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测肝癌组织、癌旁组织中lncRNA FEZF1-AS1、IGF2BP1 mRNA表达水平;免疫组织化学染色法检测肝癌组织、癌旁组织中IGF2BP1蛋白表达水平;分析肝癌组织lncRNA FEZF1-AS1、IGF2BP1表达水平与临床病理特征的关系;Kaplan-Meier生存分析肝癌组织lncRNA FEZF1-AS1、IGF2BP1表达与肝癌病人生存率的关系;Pearson分析肝癌组织lncRNA FEZF1-AS1与IGF2BP1 mRNA表达水平相关性。结果:肝癌组织中lncRNA FEZF1-AS1、IGF2BP1 mRNA表达水平及IGF2BP1蛋白阳性表达率显著高于癌旁组织(P<0.01);肝癌组织中lncRNA FEZF1-AS1与IGF2BP1 mRNA表达水平呈正相关(r=0.602,P<0.01);不同年龄、性别、肿瘤大小、有无肝硬化、乙肝抗原阴阳性水平间lncRNA FEZF1-AS1、IGF2BP1表达差异无统计学意义(P>0.05),临床分期为Ⅲ~Ⅳ期、低中分化程度和有淋巴结转移的病人lncRNA FEZF1-AS1和IGF2BP1表达水平较高(P<0.05);Kaplan-Meier生存分析显示,lncRNA FEZF1-AS1高表达组病人3年累积生存率显著低于lncRNA FEZF1-AS1低表达组(31.45%vs 61.40%,P<0.01),IGF2BP1阳性表达组病人3年累积生存率显著低于IGF2BP1阴性表达组(31.18%vs 58.25%,P<0.01)。结论:肝癌组织中lncRNA FEZF1-AS1、IGF2BP1高表达,且二者表达与肝癌病人病理特征和预后有关,可能作为肝癌病人潜在的预后标志物。

NSCLC癌组织中DCLK1、Caspase-3和GLI3蛋白表达情况与淋巴结转移和预后的相关性

目的研究非小细胞肺癌(NSCLC)癌组织中双肾上腺素样激酶1(DCLK1)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和GLI家族锌指蛋白3(GLI3)表达情况与其淋巴结转移和预后的相关性。方法以2016年2月至2017年3月该院诊治的NSCLC患者60例作为研究对象,均予以安罗替尼靶向治疗3个月后随访3年,根据患者是否死亡将其分为死亡组和生存组,所有患者均进行肺部活检,取患者的癌组织以及癌旁组织,比较癌组织以及癌旁组织DCLK1、Caspase-3和GLI3蛋白表达情况的差异;比较不同病理状态、不同预后的患者癌组织DCLK1、Caspase-3和GLI3蛋白表达情况的差异,分析不良预后以及肿瘤淋巴结转移与癌组织中DCLK1、Caspase-3和GLI3蛋白表达的相关性。结果癌组织的Caspase-3和GLI3蛋白高表达比例显著高于癌旁组织,DCLK1蛋白的高表达比例显著低于癌旁组织,差异均有统计学意义(P<0.05);不同性别、年龄、TNM分期患者癌组织中DCLK1、Caspase-3和GLI3蛋白表达情况的差异均无统计学意义(P>0.05);腺癌患者癌组织中的Caspase-3和GLI3蛋白高表达比例显著高于鳞癌患者,DCLK1蛋白高表达比例显著低于鳞癌患者,差异均有统计学意义(P<0.05);有淋巴结转移的患者癌组织中的Caspase-3和GLI3蛋白高表达比例显著高于无淋巴结转移的患者,DCLK1蛋白高表达比例显著低于无淋巴结转移的患者,差异均有统计学意义(P<0.05);相关性分析显示,NSCLC的淋巴结转移以及不良预后分别与癌组织中Caspase-3(r=0.459、0.767,P<0.05)和GLI3蛋白表达(r=0.334、0.456,P<0.05)呈正相关,与DCLK1蛋白表达呈负相关(r=-0.553、-0.877,P<0.05)。结论NSCLC的淋巴结转移以及不良预后分别与癌组织中Caspase-3和GLI3蛋白表达呈正相关,与DCLK1蛋白表达呈负相关,可指导NSCLC的临床诊断。

甲状腺癌患者组织及手术前后血清中NR3C2和ZEB1表达水平及其与预后价值研究

目的探讨核受体亚家族3C组成员2(nuclear receptor subfamily 3,group C,member 2,NR3C2)和E盒结合锌指蛋白1(E-box-bindingzincfingerprotein1,ZEB1)在甲状腺癌组织中的表达差异及手术前后血清NR3C2mRNA和ZEB1 mRNA的相对表达水平,分析其与患者预后的关系。方法选取2018年3月~2019年5月在邹城市人民医院进行手术治疗的85例甲状腺癌患者的癌组织和癌旁组织(距癌组织>3cm)样本,采用免疫组织化学法(ICC)检测癌组织和癌旁组织中NR3C2和ZEB1的表达;分别收集甲状腺癌患者(实验组)手术前、术后1周、术后1个月的血清样本,以及同期到该院体检的30例健康者(对照组)的血清样本,采用实时荧光定量PCR检测NR3C2 mRNA和ZEB1 mRNA相对表达水平;分析NR3C2mRNA和ZEB1mRNA相对表达水平与临床病理特征的关系;术前NR3C2和ZEB1表达水平与甲状腺癌患者三年生存率的关系用Kaplan-Meier法分析,采用对数秩检验进行组间生存曲线差异分析;采用多因素COX回归分析甲状腺癌患者预后影响因素。结果免疫组织化学法观察显示,癌组织中NR3C2阳性表达率(36.47%)低于癌旁组织(72.94%),癌组织中ZEB1阳性表达率(67.06%)高于癌旁组织(30.59%),差异具有统计学意义(χ^(2)=22.814,22.624,均P<0.001);实验组术前血清NR3C2 mRNA表达水平(0.55±0.14)低于对照组表达水平(0.97±0.22),术前、术后1周和术后1个月血清NR3C2mRNA表达水平(0.55±0.14,0.69±0.15,0.89±0.19)依次升高,差异具有统计学意义(t=12.038,F=95.217,P<0.001);实验组术前ZEB1 mRNA表达水平(1.88±0.28)高于对照组表达水平(1.02±0.41),术前、术后1周、术后1个月血清ZEB1mRNA表达水平(1.88±0.28,1.43±0.32,1.15±0.29)依次降低,差异具有统计学意义(t=12.716,F=130.564,P<0.001);甲状腺癌患者血清NR3C2 mRNA表达和ZEB1mRNA表达水平与TNM分期、淋巴结转移、分化程度和包膜浸润有关(t=2.449,2.081,3.938,2.212;2.013,2.348,2.029,2.096,均P<0.05);NR3C2 mRNA高表达组三年生存率(86.00%)显著高于低表达组(40.00%),ZEB1 mRNA高表达组三年生存率(35.29%)显著低于低表达组(88.24%),差异均有统计学意义(χ^(2)=4.168,5.593,均P<0.05);多因素COX回归分析显示,TNM分期、淋巴结转移、包膜浸润、NR3C2 mRNA和ZEB1 mRNA均为甲状腺癌患者预后影响因素(P<0.05)。结论甲状腺癌组织和血清中NR3C2表达下调,ZEB1表达上调,NR3C2和ZEB1表达水平影响患者预后生存率,对甲状腺癌患者预后评估具有重要意义。

miR-103a-3p、FEZF1在结直肠癌组织中的表达及其预后相关性

研究 microRNA (miR-103a-3p)和FEZF1在大肠癌(CRC)中的表达,并分析它们与患者的预后相关性。方法 从2017年2月至2023年2月,对99例结直肠癌病人的癌周和癌周组织进行了观察。采用qRT-PCR方法,测定miR-103a-3p和FEZF1的 mRNA表达。探讨miR-103a-3p和FEZF1在结直肠癌中的表达量及其与肿瘤发生、发展的相关性;应用皮尔逊方法,对结直肠癌病人的肿瘤组织中miR-103a-3p和FEZF1的 mRNA进行了关联分析;应用Kaplan-Meier生存曲线,研究miR-103a-3p和FEZF1在结直肠癌中的表达与病人的预后之间的相关性;对结直肠癌病人的预后进行多变量多项式回归分析。结果结直肠癌病人的癌组织中miR-103a-3p的表达量较癌旁组织中miR-103a-3p的表达量显著降低(P<0.05);在结直肠癌中,miR-103a-3p和FEZF1的 mRNA在结直肠癌中的表达量与 TNM分期、淋巴结转移和癌变程度呈正相关(P<0.05);结直肠癌组织中miR-103a-3p的表达与FEZF1的 mRNA的表达之间存在显著的负相关(P<0.05);与miR-103a-3p高表达组和FEZF1 mRNA高表达组相比,miR-103a-3p低表达组和FEZF1 mRNA高表达组明显提高(P<0.05);我们前期研究发现,miR-103a-3p和FEZF1 mRNA分别与结直肠癌病人的预后相关(P<0.05)和结直肠癌病人的预后相关(P<0.05)。结论 在结直肠癌中,miR-103a-3p和FEZF1在结直肠癌中的表达明显增高,而FEZF1在结直肠癌中的表达明显下降,二者在结直肠癌的进展中起着重要作用,并与病人的预后密切相关。

IKZF1基因与恶性肿瘤及系统性红斑狼疮的相关性研究进展

IKZF1基因位于染色体7p12上,其编码的Ikaros锌指蛋白是淋巴细胞发育过程重要调节因子。近年来发现,除急性淋巴细胞白血病(ALL)之外,IKZF1基因的突变与其他多种恶性肿瘤的发生发展、增殖、转移、预后相关,并且与系统性红斑狼疮(SLE)的复杂表型和易感性相关。本文对IKZF1基因及其编码的Ikaros锌指蛋白在不同恶性肿瘤(如ALL、卵巢癌、乳腺癌等)中与增殖、转移和预后的关系及相关分子机制研究现状和SLE的研究进展作一综述。

隔药饼灸调节大鼠免疫抑制机制的转录组测序分析

背景:免疫抑制会导致机体免疫功能受损,加重病情。隔药饼灸能有效调节机体免疫功能,提高机体免疫力,但其调节机制目前仍不清楚。目的:基于转录组学的生物信息学技术对隔药饼灸干预的免疫抑制模型大鼠进行测序,探究隔药饼灸调控免疫的机制。方法:将24只SD大鼠随机分为空白组、模型组和隔药饼灸组,每组8只,模型组与隔药饼灸组采用腹腔注射环磷酰胺制备免疫抑制模型,35 mg/kg,连续3 d,造模结束后空白组与模型组不做干预,隔药饼灸组在大鼠中脘、神阙、关元及足三里穴位进行艾炷与药饼结合的隔药饼灸干预,连续10 d,1次/d,干预结束后次日取材。取各组大鼠外周血进行白细胞数量检测;采用Illumina测序平台进行RNA-seq,筛选差异基因,结合GO与KEGG数据库,对差异基因进行生物信息学相关分析。结果与结论:①与空白组比较,模型组白细胞数量显著减少(P<0.001)。②RNA-seq共筛选出模型组与空白组间差异基因3026个,其中1565个上调、1461个下调,隔药饼灸组与模型组间差异基因535个,其中280个上调、255个下调。③韦恩图分析获得模型组与空白组159个下调基因经隔药饼灸干预后上调,蛋白互作网络分析获得Oasl,Oas2,Isg15,Herc6,Mx2,Helz2,Mx1,Syk,Hspa1a及Ret等10个核心靶点;④GO与KEGG分析隔药饼灸调节机体的机制有免疫应答途径、病毒相关、血管新生和自身免疫系统等通路。⑤上述结果证实,实验筛选出隔药饼灸干预免疫抑制与Oasl,Oas2,Isg15,Herc6,Mx2,Helz2及Mx1靶点有明显关联,并且在免疫应答、病毒相关及血管新生等通路中发挥调控作用。

长链非编码RNA Fez家族锌指蛋白1反义RNA1对肝癌细胞生物学功能的影响

目的探讨长链非编码RNA Fez家族锌指蛋白1反义RNA1(lncRNA FEZF1-AS1)的表达对肝癌细胞生物学功能的影响。方法以sh-FEZF1-AS1和OE-FEZF1-AS1转染肝癌SMMC771和BEL-7402细胞,采用实时荧光定量PCR法检测下调或上调lncRNA FEZF1-AS1后肝癌细胞中lncRNA FEZF1-AS1的表达变化。以细胞计数盒8(CCK-8)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。采用Transwell法和划痕实验检测lncRNA FEZF1-AS1对肝癌细胞侵袭和迁移能力的影响,采用Western blot法检测肝癌细胞内黏附分子的表达水平。裸鼠移植瘤实验验证lncRNA FEZF1-AS1对肝癌生长的影响。结果lncRNA FEZF1-AS1在肝癌细胞中的下调或上调表达能够抑制或促进肝癌细胞的增殖。CCK-8法检测结果显示,sh-FEZF1-AS1转染组SMMC7721和BEL-7402细胞的增殖能力明显减弱。第5天时,SMMC7721和BEL-7402细胞的增殖活性分别为(35.43±4.06)%和(34.68±3.97)%,与sh-NC组[分别为(52.21±8.46)%和(53.76±7.64)%]比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。OE-FEZF1-AS1转染组SMMC7721和BEL-7402细胞的增殖能力明显升高。第5天时,SMMC7721和BEL-7402细胞的增殖活性分别为(83.49±6.92)%和(80.31±3.13)%,与OE-NC组[分别为(53.03±8.84)%和(55.11±7.09)%]比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,sh-FEZF1-AS1转染组SMMC7721细胞的凋亡率为(13.02±1.38)%,明显高于sh-NC组[(5.57±1.46)%, P<0.05]。sh-FEZF1-AS1转染组BEL-7402细胞的凋亡率为(11.88±1.29)%,明显高于sh-NC组[(8.06±1.42)%,P<0.05]。OE-FEZF1-AS1转染组SMMC7721细胞的凋亡率为(3.01±0.39)%,明显低于OE-NC组[(6.68±0.96)%,P<0.05]。OE-FEZF1-AS1转染组BEL-7402细胞的凋亡率为(3.22±0.43)%,明显低于OE-NC组(6.63±0.45)%,P<0.05]。在肝癌细胞内下调或上调lncRNA FEZF1-AS1的表达能够减弱或增强肝癌细胞的迁移和侵袭能力。抑制或增强lncRNA FEZF1-AS1的表达水平可抑制或增强肝癌细胞中黏附分子的表达。经过30 d同等条件喂养后,对切除的裸鼠移植瘤进行测量,sh-FEZF1-AS1组和sh-NC组SMMC7721细胞移植瘤的肿瘤体积分别为(0.26±0.03)cm3和(0.63±0.06)cm3,差异有统计学意义(P<0.05);sh-FEZF1-AS1组和sh-NC组BEL-7402细胞移植瘤的肿瘤体积分别为(0.31±0.02)cm3和(0.72±0.08)cm3,差异有统计学意义(P<0.05)。结论lncRNA FEZF1-AS1可促进肝癌细胞的生长、迁移和侵袭。

FEZF1在结直肠癌组织和癌旁正常组织中的表达及临床意义

本文旨在探究FEZF1蛋白在结直肠癌组织和癌旁组织中的表达和其临床意义.通过免疫组化实验和Western Blot实验以及细胞实验,发现FEZF1在结直肠癌组织中低表达,并且其表达与肿瘤淋巴结转移(tumor node metastasis,TNM)分期具有显著相关性,在FEZF1低表达时,RKO细胞增殖和迁移能力提高,FEZF1高表达时RKO细胞增殖能力减弱.本研究证明了FEZF1是结直肠癌中的一个低表达蛋白,其表达与结直肠组织癌变的发生、发展相关,并且FEZF1会抑制结直肠癌细胞的增殖和迁移.

敲减FEZF1-AS1通过阻断JAK2/STAT3通路抑制食管鳞状细胞癌细胞的侵袭和迁移

目的探讨长链非编码RNA Fez家族锌指蛋白1反义核糖核酸1(FEZF1-AS1)与食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞侵袭、迁移以及与Janus激酶2/信号转导子和转录激活子3(JAK2/STAT3)信号通路的关系。方法用实时定量PCR检测ESCC的癌组织和ESCC细胞系中FEZF1-AS1的表达;构建敲减FEZF1-AS1的慢病毒表达载体,敲减KYSE150、KYSE510细胞的FEZF1-AS1后,流式细胞术检测细胞周期的变化,集落形成实验检测细胞增殖能力,TranswellTM侵袭实验检测细胞侵袭能力,TranswellTM迁移和划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot法检测JAK2和磷酸化的STAT3(p-STAT3)蛋白水平。结果在ESCC的癌组织FEZF1-AS1高表达;与正常食管鳞状上皮细胞相比,KYSE150、KYSE510细胞FEZF1-AS1表达高;敲减FEZF1-AS1表达后,ESCC癌细胞的细胞周期和增殖无明显变化,但明显抑制细胞的侵袭和迁移,且JAK2蛋白水平降低,p-STAT3蛋白水平增加。结论敲减FEZF1-AS1阻断JAK2/STAT3通路抑制ESCC细胞的侵袭和迁移。

miR-103a-3p、FEZF1在结直肠癌组织中的表达及其预后相关性

探讨微小RNA-103a-3p(miR-103a-3p)、Fez家族锌指蛋白1(FEZF1)在结直肠癌(CRC)组织中的表达水平及其与预后的关系。方法:选取2015年2月~2017年2月诊治的99例CRC患者的癌组织及其癌旁正常组织进行研究。利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测miR-103a-3p、FEZF1 mRNA表达水平;分析CRC患者癌组织miR-103a-3p、FEZF1 mRNA表达水平与临床病理特征的关系;Pearson法分析CRC患者癌组织miR-103a-3p表达水平与FEZF1 mRNA的相关性;采用Kaplan-Meier生存曲线分析癌组织miR-103a-3p、FEZF1 mRNA表达水平与CRC患者预后的关系;COX回归分析CRC患者预后的影响因素。结果:CRC患者癌组织miR-103a-3p表达水平明显高于癌旁正常组织(P<0.05),FEZF1 mRNA表达水平明显低于癌旁正常组织(P<0.05);CRC患者癌组织miR-103a-3p、FEZF1 mRNA表达水平与CRC患者TNM分期、淋巴结转移及肿瘤分化程度相关(P<0.05);CRC患者癌组织miR-103a-3p表达水平与FEZF1 mRNA表达水平呈负相关(P<0.05);miR-103a-3p低表达组、FEZF1 mRNA高表达组CRC患者术后36个月生存率显著高于miR-103a-3p高表达组、FEZF1 mRNA低表达组(P<0.05);miR-103a-3p是影响CRC患者预后的独立危险因素(P<0.05),FEZF1 mRNA是影响CRC患者预后的独立保护因素(P<0.05)。结论:CRC患者癌组织miR-103a-3p表达水平升高,FEZF1 mRNA表达水平降低,miR-103a-3p与FEZF1可能相互作用共同影响CRC发生发展,且两者均与CRC患者预后有关。

冬凌草甲素对骨质疏松大鼠骨折愈合的影响及其机制

目的探讨冬凌草甲素对骨质疏松大鼠骨折愈合的影响及其机制。方法将SD大鼠随机分为对照组、模型组、冬凌草甲素低剂量组、冬凌草甲素高剂量组、戊酸雌二醇组、冬凌草甲素高剂量+环巴胺组,每组12只。X射线检测评估大鼠骨折愈合情况;ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平;三点弯曲实验检测股骨最大载荷和最大位移;双能X线骨密度扫描仪检测股骨骨密度;HE-阿尔新蓝染色检测骨痂组织病理变化;Western blot检测碱性磷酸酶(ALP)、Runt相关转录因子2(Runx2)、Shh、Gli1蛋白表达。结果与对照组比较,模型组骨小梁结构紊乱,骨折线清晰,血清中TNF-α和IL-6水平升高(P<0.05),股骨最大载荷、最大位移、骨密度及ALP、Runx2、Shh和Gli1蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,冬凌草甲素低剂量组、冬凌草甲素高剂量组和戊酸雌二醇组骨小梁排列较密集,骨折线模糊不清,血清中TNF-α、IL-6水平降低(P<0.05),股骨最大载荷、最大位移、骨密度及ALP、Runx2、Shh、Gli1蛋白表达升高(P<0.05);与冬凌草甲素高剂量组比较,冬凌草甲素高剂量+环巴胺组骨小梁结构疏松,骨折线较清晰,血清中TNF-α和IL-6水平升高(P<0.05),股骨最大载荷、最大位移、骨密度及ALP、Runx2、Shh和Gli1蛋白表达降低(P<0.05)。结论冬凌草甲素可能通过激活声波刺猬(Shh)/Gli家族锌指蛋白1(Gli1)信号通路促进骨质疏松大鼠骨折愈合。

槐耳多糖调节Shh-Gli1信号通路对肺癌细胞增殖、凋亡和血管生成的影响

目的研究槐耳多糖通过调节索尼克刺猬-Gli家族锌指蛋白1(Shh-Gli1)信号通路对肺癌细胞A549增殖、凋亡和血管生成的影响。方法将肺癌细胞A549分为对照组(正常培养)及低、中、高剂量实验组(2、5、10μg·mL^(-1)槐耳多糖)。给药24h后,以噻唑蓝法检测细胞增殖水平,以流式细胞术检测细胞凋亡水平,以比色法检测细胞中胱天蛋白酶3(caspase-3)酶活性,以蛋白质印迹实验检测细胞中血管内皮细胞生长因子(VEGF)、血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)、Shh及Gli1蛋白的表达水平。结果对照组和低、中、高剂量实验组的细胞存活率分别为100.00%、(73.13±3.86)%、(47.97±6.12)%和(30.73±6.67)%,细胞凋亡率分别为(0.72±0.04)%、(19.21±1.27)%、(29.48±0.92)%和(46.29±2.81)%,细胞中caspase-3酶活性分别为1.00、1.33±0.08、1.71±0.09和2.28±0.14,VEGF蛋白相对表达水平分别为1.17±0.04、0.95±0.08、0.39±0.04和0.11±0.03VEGFR2蛋白相对表达水平分别为0.99±0.04、0.80±0.030.29±0.03和0.24±0.03,Gli1蛋白相对表达水平分别为1.22±0.04、1.07±0.04、0.60±0.04和0.41±0.05。对照组的上述指标与低、中、高剂量实验组相比,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论槐耳多糖可通过调节Shh-Gli1信号通路抑制肺癌细胞的增殖及血管生成,并促进其凋亡。

一种用于筛选具有抗肿瘤活性的沙利度胺衍生物分子平台的建立

目的建立用于筛选具有抗肿瘤活性的沙利度胺衍生物的分子平台。方法从人胎肝c DNA文库中分别扩增cereblon(CRBN)和Ikaros家族锌指蛋白1(Ikaros family zinc finger protein 1,IKZF1)c DNA,并将其克隆入p XJ40-myc和pc DNA3-FLAG载体中,将其转染293T细胞,通过检测沙利度胺及其衍生物对CRBN和IKZF1蛋白相互作用的改变,间接反映其在肿瘤抑制中的作用。结果 CRBN和IKZF1在293T细胞中均得到表达,沙利度胺及其两个衍生物可显著增强CRBN和IKZF1的结合。结论成功建立了用于筛选具有抗肿瘤活性的沙利度胺衍生物分子平台,初步发现2个沙利度胺衍生物可显著增强CRBN和IKZF1的结合,提示其具有潜在的抗癌活性。