基于IKKβ/NF-κB通路探讨温胆汤对睡眠障碍小鼠的神经保护作用

目的 探讨温胆汤对睡眠障碍小鼠神经损伤的影响及其机制。方法 小鼠采用改良版水平转盘睡眠剥夺法构建失眠模型,造模成功后随机分为模型组、艾司唑仑片组(0.15 mg/kg)和温胆汤低、高剂量组(12.5、50 g/kg),每组6只,另取6只作为对照组。给药干预7 d后,HE染色观察大脑皮层组织、海马CA1区组织、下丘脑组织变化;尼氏染色观察神经元损伤情况;ELISA法检测脑组织和血清中神经丝轻链(NEFL)、神经特异性烯醇化酶(NSE)、S100钙结合蛋白B(S100B)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)水平;免疫组化法检测脑组织中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达;Western blot法检测脑组织中GFAP、磷酸化IκB激酶β(p-IKKβ)、磷酸化核转录因子-κB(p-NF-κB)蛋白表达。结果 与模型组比较,温胆汤高剂量组小鼠神经元细胞数量增加,结构完整,排列整齐,神经元细胞核皱缩变形数量减少,尼氏小体增多,血清和脑组织NEFL、NSE、S100B、TNF-α、IL-6、IL-1β水平降低(P<0.01),脑组织GFAP表达降低(P<0.01),脑组织p-IKKβ和p-NF-κB磷酸化水平均降低(P<0.01)。结论 温胆汤能够减少睡眠障碍小鼠的神经损伤,减少促炎介质释放,其机制可能与抑制IKKβ/NF-κB通路的激活有关。

烙灸对兔激素性股骨头坏死组织中IKKβ、IκBα表达的影响

目的探讨烙灸治疗早期激素性股骨头坏死(steroid-induced osteonecrosis of the femoral head,SONFH)的作用机制。方法将新西兰兔按随机数表法分为空白组、模型组、烙灸组、抑制剂组,每组6只,采用内毒素联合激素的方法制备SONFH模型。烙灸组进行4周的烙灸治疗,抑制剂组给予IκBα磷酸化抑制剂Bay11-7082(1 mg·kg-1)腹腔注射3周。干预前后分别观察实验兔一般状况变化;HE染色观察各组实验兔股骨头组织病理学变化;Western blot和RT-qPCR分别检测股骨头组织中IKKβ、磷酸化IκBα(p-IκBα)蛋白及mRNA的表达变化;ELISA检测血清中核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)水平。结果与空白组比较,模型组实验兔逐渐出现精神萎靡、毛发暗淡等情况,股骨头组织骨小梁出现断裂、稀疏等改变,IKKβ、p-IκBα蛋白水平,IKKβmRNA水平及血清中NF-κB、TNF-α、IL-6水平均升高(P均<0.05);与模型组比较,烙灸组股骨头组织病理学改善,IKKβ、p-IκBα蛋白水平,IKKβmRNA水平及血清中NF-κB、TNF-α、IL-6水平均降低(P均<0.05),而IκBα蛋白及mRNA表达均升高(P均<0.05)。结论烙灸可改善早期SONFH骨代谢,缓解骨坏死,其机制与抑制TLR4/NF-κB通路有关。

基于miR-429/IKKβ轴研究高丽参水提物对神经母细胞瘤细胞增殖、迁移、侵袭的作用

目的:研究高丽参水提物对神经母细胞瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响及机制。方法:将微小RNA(miRNA)-429抑制剂转染至SH-SY5Y细胞,随机分为miR-429下调组(常规培养)、高丽参+miR-429下调组(50 g/L高丽参水提物培养)。另取SH-SY5Y细胞,分为空白组(常规培养)和高丽参组(50 g/L高丽参水提物培养)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组细胞miR-429相对表达量;CCK-8法、划痕实验、Transwell实验检测各组细胞的增殖、迁移、侵袭能力;双荧光素酶实验验证miR-429与IκB激酶β(IKKβ)的靶系;蛋白质印迹法检测各组IKKβ蛋白表达。结果:与空白组对比,高丽参组miR-429表达量增加,24、48、72 h 3个时间点的细胞增殖能力、迁移率降低,侵袭细胞数量减少,IKKβ蛋白表达降低(P<0.05);miR-429下调组的miR-429表达量减少、3个时间点的细胞增殖能力增强,迁移率升高,侵袭细胞数量增加,IKKβ蛋白表达升高(P<0.05)。与高丽参组对比,高丽参+miR-429下调组miR-429表达量减少,24、48、72 h 3个时间点的细胞增殖能力增强,迁移率升高,侵袭细胞数增加,IKKβ蛋白表达升高(P<0.05)。与miR-429下调组对比,高丽参+miR-429下调组miR-429表达量增加,24、48、72 h 3个时间点细胞增殖能力增强,迁移率降低,侵袭细胞数减少,IKKβ蛋白表达量降低(P<0.05)。与转染IKKβ3′-UTR-WT和miR-429 mimic-NC的293T细胞对比,共转染IKKβ3′-UTR-MT与miR-429 mimic的293T细胞荧光素酶活性值升高(P<0.05)。结论:高丽参水提物可抑制神经母细胞瘤细胞的增殖、侵袭和迁移,可能与调控miR-429进一步靶向下调IKKβ表达有关。

日本对虾IKKβ基因克隆及其表达分析

【目的】明确日本对虾NF-κB抑制蛋白激酶β基因(PjIKKβ)生物学特征及其在各组织和哈维弧菌刺激下的表达模式,为揭示IKKβ在日本对虾先天免疫中的作用机制提供理论依据。【方法】克隆PjIKKβ基因cDNA序列,通过ORF Finder、ExPASy ProtParam、SMART、SignalP 5.0、TMHMM、Prot-Comp等在线软件进行生物信息学分析,并以实时荧光定量PCR检测PjIKKβ基因在日本对虾各组织及哈维弧菌悬液刺激后的表达模式。【结果】PjIKKβ基因序列全长2794 bp,其开放阅读框(ORF)长2373 bp,共编码790个氨基酸残基。PjIKKβ蛋白包含1个丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶催化结构域(S-TKc)、1个亮氨酸锌指结构域(LZ)和1个螺旋—环—螺旋结构域(HLH),定位于细胞质和细胞核中,无跨膜结构,无信号肽。PjIKKβ与凡纳滨对虾IKKβ氨基酸序列相似性最高(98%),其次是与斑节对虾IKKβ氨基酸序列(97%);多序列比对分析结果显示,各物种IKKβ蛋白序列在S-TKc结构域的保守性较高,而在其他区域的保守性低。基于IKKβ氨基酸序列相似性构建的系统发育进化树显示,在甲壳动物分支中日本对虾先与凡纳滨对虾聚在一起,再与斑节对虾聚为一个分支。PjIKKβ基因在日本对虾肝胰腺、肌肉、鳃、神经节、胃、心脏、血淋巴和眼柄等8个组织中均有表达,以神经节、肌肉、血淋巴和眼柄中的相对表达量较高,显著高于在其他组织中的相对表达量(P<0.05);注射后24、48和72 h,PjIKKβ基因在注射哈维弧菌日本对虾血淋巴中的相对表达量上调,且与注射PBS日本对虾的相对表达量存在极显著差异(P<0.01)。【结论】PjIKKβ蛋白含有1个S-TKc结构域、1个LZ结构域和1个HLH结构域,在进化过程中非常保守;PjIKKβ基因的组织表达特征及其在哈维弧菌刺激后的表达变化,进一步证实PjIKKβ基因参与了日本对虾的先天免疫应答反应。

电针联合刮痧法对颈型颈椎病家兔颈肌炎症因子及NF-κB/IκB/IKKβ信号通路的影响

目的探讨电针联合刮痧疗法对颈型颈椎病家兔颈肌炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α表达及NF-κB/IκB/IKKβ信号通路的影响。方法将40只新西兰家兔随机分为正常组、模型组、电针组、刮痧组、联合组,每组各8只。采用寒湿刺激加长期低头位的方法建立颈型颈椎病家兔模型。造模8周后,电针组选取双侧颈夹脊穴进行电针治疗;刮痧组选取督脉及两侧足太阳膀胱经刮痧治疗;联合组给予电针联合刮痧治疗。于造模前、造模后进行颈椎X线拍摄并评分。治疗15 d后留取家兔颈部两侧后伸肌,采用苏木精-伊红(HE)染色观察肌肉组织形态的变化。实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测颈肌IL-1β、IL-6、TNF-α、NF-κB p65、IκB、IKKβmRNA表达水平。Western blot法检测颈肌IL-1β、IL-6、TNF-α、NF-κB p65、IκB、IKKβ蛋白表达水平。结果与正常组比较,造模各组家兔X线评分均增高(均P<0.05)。与模型组比较,各治疗组家兔颈肌的炎性损伤均有所改善,其中联合组改善最明显。各治疗组IL-1β、IL-6、TNF-α、NF-κB p65、IKKβmRNA和蛋白表达水平低于模型组(均P<0.05),且联合组低于电针组、刮痧组(均P<0.05)。各治疗组IκB mRNA和蛋白表达高于模型组(均P<0.05),联合组高于电针组、刮痧组(均P<0.05)。结论电针联合刮痧疗法可改善颈部肌肉的病理损伤,作用优于单独电针或刮痧治疗。其作用机制可能是通过下调NF-κB/IκB/IKKβ信号通路相关因子的表达,进而降低IL-1β、IL-6、TNF-α等炎症因子的表达。

人增生性瘢痕成纤维细胞IKKβ特异性siRNA表达载体构建及表达

目的:体外合成并筛选人增生性瘢痕成纤维细胞特异性IKKβ-siRNA,构建其表达载体并检测其表达.方法:化学合成3条IKKβ-siRNA,分别转染体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞,采用RT-Q-PCR筛选出特异性IKKβ-siRNA,并采用PU6质粒构建载体,RT-Q-PCR检测其表达.结果:合成的3条IKKβ-siRNA链中,仅第二条有明显抑制IKKβ的mRNA表达的作用,并通过酶切鉴定和测序结果证明成功构建IKKβ-siRNA载体,经转染靶向IKKβ-siRNA的成纤维细胞,IKKβ的表达在转染后24h及48h均受到抑制.结论:应用RT-PCR可筛选出针对人增生性瘢痕成纤维细胞的特异性IKKβ-siRNA;可构建具有干扰效果的IKKβ-siRNA表达载体,转染后可以降低IKKβ的表达.

灭幽汤对实验性幽门螺杆菌相关性胃炎IKKβ表达的影响及意义

目的探讨IκB分子的上游蛋白激酶(IKKβ)对幽门螺杆菌相关性胃炎(HAG)病理变化的可能机制及灭幽汤在治疗HAG时的影响效应。方法建立HAG模型,采用幽门螺杆菌(H.py-lori)菌液灌胃造模,将造模成功的小鼠按体重随机分为模型组、丽珠得乐组、灭幽汤组。采用免疫组化法检测胃黏膜组织中核转录因子(NF-κB)I、KKβ的蛋白表达情况。HE染色观察胃组织病理变化。结果灭幽汤组能明显减轻胃组织的炎症反应,能抑制HAG胃组织中NF-κBI、KKβ蛋白的活性。正常对照组小鼠胃黏膜组织细胞内均有少量IKKβ、NF-κB表达。与正常对照组比较,模型组小鼠胃黏膜IKKβ及NF-κB表达增加(P<0.05);与模型组比较,灭幽汤组小鼠胃黏膜IKKβ及NF-κB表达降低(P<0.05)。结论灭幽汤能抑制H.pylori,改善胃黏膜血流,减轻胃黏膜炎症。NF-κB和IKKβ在HAG的炎症反应中发挥重要的作用,灭幽汤治疗HAG的机制可能是通过抑制IKKβ的激活和阻止NF-κB的活化实现的。

NIK和IKKβ连接蛋白、C-myc和细胞周期蛋白D1在结肠癌组织中的表达及意义

目的检测结肠癌组织中NIK和IKKβ连接蛋白(NIBP)、磷酸化p65(p-p65)和C-myc、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的表达,并探讨其意义。方法收集广西医科大学第一附属医院结直肠外科2013年2月—2014年2月经外科手术切除及消化内科肠镜活检的部分标本151例,其中正常结肠黏膜16例、结肠腺瘤21例、结肠癌114例。采用SP免疫组化法分别检测正常结肠黏膜组织、结肠腺瘤组织及结肠癌组织NIBP、p-p65、C-myc和cyclin D1阳性细胞表达率;分析结肠癌组织中NIBP、C-myc和cyclin D1阳性细胞表达率与p-p65阳性细胞表达率的相关性。结果正常结肠黏膜组织、结肠腺瘤组织、结肠癌组织的NIBP、p-p65、C-myc和cyclin D1阳性细胞表达率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结肠癌组织NIBP、p-p65、C-myc和cyclin D1阳性细胞表达率高于正常结肠黏膜组织和结肠腺瘤组织(P<0.017);正常结肠黏膜组织、结肠腺瘤组织中NIBP、p-p65、C-myc和cyclin D1阳性细胞表达率比较,差异无统计学意义(P>0.017)。不同组织学类型、浸润深度及有无淋巴结转移、远处转移患者结肠癌组织NIBP、p-p65、C-myc和cyclin D1阳性细胞表达率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。分化程度越低、TNM分期越高、Duke's分期越高患者结肠癌组织NIBP、p-p65、C-myc和cyclin D1阳性细胞表达率越高(P<0.05)。NIBP、C-myc、cyclin D1阳性细胞表达率与p-p65阳性细胞表达率均呈正相关(P<0.05)。结论 NIBP可能通过激活核因子κB(NF-κB)信号转导通路上调C-myc和cyclin D1等的表达而影响结肠癌的治疗发生、发展、侵袭和转移,为临床发现结肠癌的治疗新靶点提供了参考依据。

小檗碱抑制IKKβ Ser 181磷酸化改善高糖诱导的3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的分子机制

目的研究小檗碱对高糖诱导的3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的作用,探讨小檗碱改善胰岛素抵抗的分子机制。方法以25 mmol/L葡萄糖加0.6 nmol/L胰岛素诱导3T3-L1脂肪细胞产生胰岛素抵抗,予以小檗碱进行干预,同时以阿司匹林作为阳性对照,以2-脱氧-[3H]-D-葡萄糖摄入法观察葡萄糖的转运率,用Western blotting检测IKKβ蛋白,IKKβ Ser 181磷酸化,IRS-1蛋白,IRS-1 Ser 307磷酸化,PI-3K p85蛋白,GLUT4蛋白的表达。结果25 mmol/L葡萄糖加0.6 nmol/L胰岛素作用18 h使3T3-L1脂肪细胞胰岛素刺激的葡萄糖转运抑制60%,IKKβSer 181磷酸化、IRS-1 Ser 307磷酸化的表达增加,IRS-1和PI-3K p85蛋白的表达减少;同时加入小檗碱或阿司匹林则可逆转上述效应。但高糖、小檗碱、阿司匹林对3T3-L1脂肪细胞IKKβ蛋白、GLUT4蛋白的表达无明显影响。结论小檗碱可以明显改善高糖诱导的胰岛素抵抗,其分子机制可能是小檗碱通过抑制IKKβSer181磷酸化,使IRS-1丝氨酸残基磷酸化减少而酪氨酸残基磷酸化增加,调节胰岛素信号蛋白的表达来实现的。

通心络胶囊对糖尿病小鼠视网膜IKKβ/IKBα/NF-κB通路的作用

目的观察通心络胶囊对糖尿病小鼠视网膜IKKβ/IKBα/NF-κB通路的影响。方法 40只KK/Upj-Ay小鼠随机分为模型组、通心络低(1 g·kg-1)、中(2 g·kg-1)、高(4 g·kg-1)剂量组,每组各10只,10只C57BL/6小鼠为对照组。通心络组按相应剂量灌胃给药,对照组和模型组给予等体积的蒸馏水,每天1次,连续12周。测定体质量、空腹血糖值(fasting blood glucose,FBG),伊文思蓝法(evans blue method,EB)测定血-视网膜屏障的通透性,HE染色法观察视网膜形态学变化,Real-time PCR(qPCR)和Western blot法测定IKKβ、IKBα、NF-κB mRNA和蛋白的表达及P-IKBα和核NF-κB蛋白的表达。结果通心络高剂量组较中、低剂量组细胞结构更致密,排列更有序。通心络低、中、高剂量组EB含量分别(20.82±3.88)ng·mL-1、(16.43±2.60)ng·mL-1、(16.14±2.42)ng·mL-1,较模型组(25.53±3.57)ng·mL-1明显下降(均为P<0.05)。通心络中、高剂量组IKKβmRNA和蛋白表达量较模型组显著下降(均为P<0.01);通心络组IKBαmRNA,通心络中、高剂量组IKBα蛋白以及PIKBα蛋白的表达均较模型组显著下降(均为P<0.01),通心络低、中、高剂量组核NF-κB蛋白表达量为0.52±0.05、0.43±0.05、0.34±0.04,显著低于模型组(0.61±0.07)(均为P<0.05)。结论通心络胶囊可明显改善KK/Upj-Ay小鼠视网膜病变,其机制与抑制IKKβ/IKBα/NF-κB通路相关。

眼针对脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑皮层组织IKKβ/NF-κB表达的影响

目的观察眼针对脑缺血再灌注损伤(CIRI)模型大鼠脑皮层组织中IκB激酶β(IKKβ)及核因子-κB(NF-κB)表达,探讨眼针治疗脑损伤的作用机制。方法健康雄性SPF级Wistar雄性大鼠60只,随机分为正常组、假手术组、CIRI模型组和眼针组。CIRI模型组和眼针组采用改良的线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血(MACO)再灌注动物模型。Western blot检测大鼠缺血侧脑皮层IKKβ、NF-κB蛋白表达的变化。结果与正常组及假手术组比较,模型组大鼠缺血侧脑皮层组织IKKβ及NF-κB蛋白水平均显示出高表达(P<0.01),眼针组同模型组相比,IKKβ及NF-κB蛋白表达则下调(P<0.01)。结论眼针抑制脑皮层组织中IKKβ及NF-κB的表达,可能是眼针治疗CIRI的主要作用机制之一。

复方蜥蜴散不同微粒组合剂对胃癌前病变模型大鼠IKKβ、RelA蛋白表达的影响

目的:研究复方蜥蜴散不同微粒组合剂(FFXY)治疗对胃癌前病变(PLGC)大鼠凋亡相关蛋白RelA(P65)及IKKβ表达的影响,揭示其治疗PLGC的可能作用机制。方法:将120只SPF级SD大鼠随机分为空白对照组,模型对照组,维酶素治疗组,复方蜥蜴散80目、100目等量混合治疗组,80目治疗组及100目治疗组,每组20只,除空白组外,均采取MNNG配合饥饱失常及情绪刺激综合造模。造模成功后分别作相应处理,应用免疫组化法检测其对胃黏膜组织IKKβ、RelA蛋白表达的影响,并对实验结果进行统计分析。结果:通过图像分析软件对免疫组化图像光密度的测算,1模型组IKKβ、RelA的阳性表达高于空白对照组,有显著性差异(P<0.01);2其他各治疗组IKKβ、RelA的阳性表达均低于模型对照(P<0.01);3FFXY各治疗组IKKβ、RelA的阳性表达均低于维酶素治疗组(P<0.05);480目、100目等量混合组两种因子阳性表达低于80目组和100目组(P<0.05),80目组和100目组两种因子表达相当。结论:1通过MNNG等综合诱导因素造模成功;2FFXY各组和维酶素组治疗PLGC均有效,其中FFXY各组对PLGC大鼠疗效均优于维酶素组,尤以80目、100目等量混合剂量组疗效最显著。表明FFXY对PLGC胃黏膜损伤可能具有保护、修复和治疗作用,其作用机制可能是通过降低或抑制PLGC组织中IKKβ、RelA的表达,从而促进细胞凋亡。

苦酸通调方对自发性糖尿病大鼠腹部脂肪组织中NF-κB及IKKβ蛋白表达的影响

目的观察苦酸通调方对自发性糖尿病大鼠腹部脂肪组织中NF-κB及IKKβ蛋白表达的影响。方法将高脂饲料喂养的雄性SPF级ZDF大鼠30只,随机分为模型组、苦酸通调组、吡格列酮组3组,普通饲料喂养的雄性SPF级ZL大鼠为正常对照组,每组各10只。苦酸通调方组按照3.29 g/(kg·d)灌胃,吡格列酮组按照1.07 mg/(kg·d)灌胃。模型组和正常对照组灌服等体积蒸馏水,每天1次,连续12周。经Western blot法检测各组大鼠腹部脂肪组织中NF-κB、IKKβ蛋白的表达水平。结果在治疗第12周末,模型组、吡格列酮组、苦酸通调组大鼠腹腔脂肪组织中NF-κB、IKKβ蛋白表达明显高于正常对照组(P<0.01)。与模型组相比,苦酸通调组和吡格列酮组NF-κB、IKKβ蛋白的表达均明显降低(P<0.01,P<0.05),且苦酸通调组优于吡格列酮组(P<0.05)。结论苦酸通调方组在一定程度上能抑制糖尿病大鼠腹部脂肪组织中NF-κB、IKKβ蛋白的表达,可能是苦酸通调方抑制炎症信号通路的传导而发挥其改善胰岛素抵抗治疗糖尿病的机制之一。

IKKβ和NF-κB p65在食管癌及癌前病变中的表达

目的探讨IKKβ和NF-κB p65在食管癌和癌前病变组织中的表达及意义。方法采用免疫组化PV-9000法检测正常食管上皮、基底细胞增生、间变和鳞状细胞癌中IKKβ和NF-κB p65的表达情况,以及在食管癌不同分化、淋巴结转移、浸润程度中的表达情况。结果IKKβ、NF-κB p65在不同组织中阳性表达率分别为:正常上皮(19.7%/12.8%)、基底细胞增生(46.7%/43.3%)、间变(76.0%/64.0%)和鳞状细胞癌(84.8%/75.8%),且随着食管病变进展,阳性表达率明显升高,正常上皮与鳞状细胞癌之间有明显差异(P<0.05);IKKβ、NF-κB p65的表达与食管癌组织的淋巴结转移和浸润程度呈正相关(P<0.05)。结论IKKβ、NF-κB p65在食管癌和癌前病变表达激活,可能与食管癌的发生发展及转移浸润密切相关。

IκBα、IKKα、IKKβ与Tim-3在肿瘤患者中表达及相关性研究

核因子（NF）-κB是重要的转录调控因子,其广泛存在于各种细胞中,参与免疫应激、细胞增殖、生长分化及细胞凋亡。NF-κB通常与其抑制蛋白IκB相结合,以非活性状态储存于细胞质中,只有当激活IκB激酶（IKK）,水解IκB,解除了IκB的抑制作用,NF-κB才能进入细胞核中并与相应靶基因上的DNA序列（κB位点）结合,发挥基因转录功能。

有氧运动通过抑制肝脏IKKβ/NF-κB信号通路改善胰岛素抵抗小鼠炎症反应

目的:探讨连续和间歇有氧运动对胰岛素抵抗小鼠炎症反应的改善作用及IKKβ/NF-κB炎症通路的调控机制。方法:以高脂高果糖饲料喂养小鼠,建立胰岛素抵抗模型。将雄性C57BL/6小鼠随机分为4组:正常对照组(NC)、高脂高果糖喂养对照组(HC)、高脂高果糖喂养连续有氧运动组(HE)和高脂高果糖喂养间歇有氧运动组(HI),每组10只。HE组和HI组小鼠根据运动方案分别进行连续和间歇有氧运动训练,每周5天,共8周。实验结束后,禁食10 h后处死小鼠,采样。采用葡萄糖试剂盒检测血清FBG含量;ELISA法检测血清FINS、TNF-α、FFA、IL-6、IL-10、CRP和APN含量;Western blotting法检测肝脏IKKβ与NF-κB蛋白及其磷酸化表达。结果:经连续和间歇有氧运动干预后,1)胰岛素抵抗小鼠的体质量、FBG含量及FINS含量显著降低(P<0.05),葡萄糖耐量受损情况(AUC值,P<0.05)得到显著改善,胰岛素抵抗指数(HOMA-IR值,P<0.05)显著降低,胰岛素敏感性(QUICKI值,P<0.05)显著增加;2)胰岛素抵抗小鼠血清中促炎因子的含量(TNF-α、FFA、IL-6、CRP,P<0.05)显著降低,血清抗炎因子的含量(IL-10、APN,P<0.05)显著增加;3)胰岛素抵抗小鼠肝脏IKKβ和NF-κB的蛋白磷酸化水平显著降低(P<0.05);4)对于胰岛素抵抗小鼠炎症反应的改善作用,间歇有氧运动优于连续有氧运动。结论:连续和间歇有氧运动均能显著改善由高脂高果糖饮食诱导的胰岛素抵抗及炎症反应,且间歇有氧运动干预效果更佳,其作用机制可能是通过抑制IKKβ/NF-κB炎症通路,减少促炎因子及增加抗炎因子的分泌,从而改善胰岛素抵抗小鼠的炎症反应。

连梅颗粒对糖尿病大鼠腹部脂肪组织中NF-κB及IKKβ蛋白表达的影响

目的:观察连梅颗粒对自发性糖尿病大鼠腹部脂肪组织中NF-κB及IKKβ蛋白表达的影响。方法:将高脂饲料喂养的雄性SPF级ZDF(Zucker Diabetic Fatty rat)大鼠随机分为模型组、连梅颗粒组、吡格列酮组,普通饲料喂养的雄性SPF级ZL(Zucker Lean)大鼠为正常对照组,每组各10只。连梅颗粒组按照5.1g·kg-1灌胃给药,吡格列酮组按照1.07mg·kg-1灌胃给药,连续给药12周。经Western blot法检测各组大鼠腹部脂肪组织中NF-κB、IKKβ蛋白的表达水平。结果:在治疗第12周末,模型组、吡格列酮组、连梅颗粒组大鼠腹腔脂肪组织中NF-κB、IKKβ蛋白的表达明显高于正常对照组(P<0.01)。连梅颗粒组和吡格列酮组与模型组相比均明显降低(P<0.01,P<0.05),且连梅颗粒组优于吡格列酮组(P<0.05)。结论:连梅颗粒组在一定程度上能抑制糖尿病大鼠腹部脂肪组织中NF-κB及IKKβ蛋白的表达。

高糖磷酸化IKKβ Ser181诱导3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的分子机制

目的:探讨IKKβ及胰岛素信号转导分子在高糖诱导3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗中的作用。方法:采用高糖加胰岛素诱导的胰岛素抵抗细胞模型,以2-脱氧-[3H]-D-葡萄糖摄入法观察葡萄糖的转运率,用Western blot检测IKKβ蛋白,IKKβ Ser181磷酸化,IRS-1蛋白,IRS-1Ser307磷酸化,PI-3Kp85蛋白及GLUT4蛋白的表达。结果:仅高糖加胰岛素模型组,胰岛素刺激的葡萄糖转运减少55%,同时IKKβ Ser181磷酸化、IRS-1Ser307磷酸化的表达显著增加,IRS-1蛋白和PI-3Kp85蛋白的表达显著减少,而IKKβ蛋白及GLUT4蛋白的表达无明显影响。结论:只有在胰岛素存在的条件下,高糖才可以诱导胰岛素抵抗,其分子机制可能与其激活IKKβSer181,使其下游的IRS-1和PI-3Kp85蛋白表达减少抑制葡萄糖转运有关,而与IKKβ蛋白及GLUT4蛋白的表达无关。

IKKβ真核表达载体的构建及表达

目的构建核转录因子κB抑制蛋白激酶(inhibitor of kappa B kinase,IKK)β真核表达载体,以便进一步探讨其生物学作用。方法从人正常肝细胞L02中提取RNA,并利用IKKβ特异性引物通过RT-PCR方法扩增了IKKβcD-NA,并克隆入pcDNA3载体中,构建重组载体pcDNA3-IKKβ。将重组载体转染入HEK293细胞中,并通过免疫印迹方法检测IKKβ的表达。结果酶切及测序结果显示,重组质粒构建成功;免疫印迹结果显示,瞬时转染重组质粒的人胚肾细胞HEK293中可有效表达IKKβ。结论本研究成功构建了IKKβ真核表达载体,并能够在真核细胞中进行表达,为进一步研究IKKβ的生物学功能奠定了基础。