Study on In vitro Bacteriostasis of the Different Extract from Ilex Kudingcha C.J.Tseng

[ Objective ] The aim was to study bacteriostatic activity of the different extract from Ilex Kudingcha C. J. Tseng. [ Method ] By using test tube 2 -fold dilution method and Kirby-Baueer Disc Diffusionto,we conducted inhibitory test on S. aureus and E, coil and determined the minimal inhibitory concentration （MIC） and minimum bactericidal concentration （MBC）and the diameter of inhibition zone. [ Result ] The extract 1 had fairly strong in vitro bacteriostasis activities and than the extract2 and extract3. The MIC and MBC was 3.91 mg/ml and 31.25 mg/ml on S. aureus and E. coil [ Conclusion] The result showed that the different extract from Ilex Kudingcha C. J. Tseng had varying amount of different bacteriostatic activities,the Ilex Kudingcha C. J. Tseng was developed new and safe bacteriostatic reagent to provide reference.

HPLC法测定苦丁茶中的熊果酸和齐墩果酸的含量

目的:建立 HPLC 法同时测定苦丁茶中的熊果酸和齐墩果酸的含量。方法:色谱柱为 Betasil C_(18)柱(4.6mm×150mm,5μm),流动相为乙腈-水(95:5),检测波长为210nm,灵敏度为1.000AUFS,柱温为35℃,流速为0.5 mL·min^(-1)。结果:熊果酸的进样量在0.20～4.0μg范围内,峰面积与进样量之间线性关系良好,平均回收率为95.9%;齐墩果酸的进样量在0.17～3.5μg范围内,峰面积与进样量之间线性关系良好,平均回收率为93.3%。结论:本方法可同时测定苦丁茶中熊果酸和齐墩果酸的含量,结果准确,重复性好。

超临界CO_2萃取技术分离和纯化苦丁茶中熊果酸的工艺

对超临界CO2萃取苦丁茶中熊果酸的工艺进行了研究,并采用酸碱沉淀法纯化萃取液。结果表明:在以无水乙醇作为夹带剂,CO2流量为20L·h-1,萃取温度为45℃,萃取压力为30MPa,萃取时间为3h的萃取条件下,萃取效果最好,萃取率可达0.453%,最终能得到w=21.44%纯度的熊果酸粗品。该工艺优于传统的熊果酸提取方法,适于产业化生产。

苦丁茶多糖抗氧化活性研究

采用清除超氧阴离子自由基、清除羟自由基、清除DPPH自由基、双氧水诱导红细胞氧化溶血、红细胞自氧化溶血实验,对A、K_1、K_3三个苦丁茶多糖组分的抗氧化活性进行了研究,并与Vc进行了比较,结果表明:苦丁茶多糖对羟自由基、超氧阴离子自由基、DPPH自由基具有一定的清除作用;对H_2O_2诱导红细胞氧化溶血反应、对红细胞自氧化溶血反应都有显著的抑制作用。

分光光度法测定湘产苦丁茶中熊果酸含量

用5%香草醛-冰醋酸、高氯酸显色,以熊果酸纯品为对照,在波长548nm处用分光光度法测定湘产3种苦丁茶中熊果酸的含量。方法线性范围为20—100μg/5mL,实验回收率为98.96%,RSD=1.67%;精密度、重现性好;对照品和样品溶液在1h内稳定。该方法操作方便、简单,可用于苦丁茶中熊果酸的定量检测。

苦丁茶多糖的提取分离纯化及部分理化性质研究

以多糖提取率为指标,采用单因素实验和正交实验对苦丁茶多糖的提取工艺条件进行优化,确定最佳提取工艺为:水料比20:1、80℃、提取50 min。在此条件下,苦丁茶多糖提取率为2.43%,先后采用Sevag法脱蛋白、分级醇沉法、DEAE—52纤维素离子交换柱层析法对其进行分离纯化,最后得到K_1和K_22个组分。同时对各苦丁茶多糖进行理化性质分析,结合Sevag法预实验所得出的结果,推测苦丁茶多糖可能为以某种方式结合蛋白的糖缀合物。

苦丁茶冬青化学成分和药理作用研究进展

冬青属植物苦丁茶冬青(Ilex kudingcha C.J.Tseng)的叶或嫩叶,是民间常用的中草药,有清热解毒之功效。现代药理研究表明,苦丁茶冬青具有降脂减肥、降血糖、抗动脉粥样硬化、抗氧化和抗菌、抗病毒等活性。目前从苦丁茶冬青中已分离出大量的三萜及其皂苷类和酚酸类等化学成分,但其发挥功效的药效物质基础及其分子机制有待进一步研究。因此本文就近年来苦丁茶冬青叶化学成分及药理作用进行了分析和总结,为苦丁茶冬青药用资源的开发利用提供参考。

药用植物苦丁茶与近缘种的微形态研究——叶表皮特征的扫描电镜观察

在扫描电镜下对药用植物苦丁茶 (Ilex kudingcha C.J.Tseng)与 4个近缘种的叶表皮微形态进行了观察。结果显示这些材料的叶表皮仅远轴面有气孔器存在 ,气孔圆形至椭圆形 ,气孔外拱盖表面多平滑 ,拱盖内缘近平滑 ,浅波状或波状 ,外缘角质膜在气孔周围呈环形包着气孔。但各种间叶表皮的微形态特征具有较为明显的差异 ,有一定的分类鉴定意义。本研究结果支持将五棱苦丁茶 (I.pentagona S.K.Chen,Y.X.Feng et C.F.L iang)从苦丁茶中独立出来建立一新种 ,但因苦丁茶具有 2种类型气孔器外缘角质膜排列 ,而不支持对扣树 (I.kaushue S.Y.Hu)

反相高效液相色谱法测定苦丁茶中的熊果酸

建立反相高效液相色谱法测定苦丁茶中熊果酸的新方法。乙醇回流提取 ,酸碱沉淀分离制备样品溶液 ,在以甲醇 -水 -磷酸二氢钠 -二乙胺 (90∶ 10∶ 0 .10∶ 0 .0 2 )为流动相、hypersil- C18柱、检测波长 2 2 0 nm、流速为 0 .6 m L/min的条件下 ,熊果酸与其他三萜成分在 2 0 min内达到基线分离。熊果酸在 0 .16 0 8—0 .80 4 0 mg/m L范围内 ,浓度与峰面积呈良好的线性关系 ,加标回收率为 98.0 6 %— 10 1.8% ,RSD=1.73%— 2 .16 %。该法适用于苦丁茶药材及其他制剂中熊果酸的质量分析检验 ,为天然植物中熊果酸的开发提供了简便、准确的测定方法。

土壤pH、Eh对土壤-苦丁茶树系统中铅分布的影响

以苦丁茶冬青(Ilex kudingcha C.J.Tseng)扦插苗(15个月生)进行盆栽实验,通过土施H2SO4、Ca(OH)2和复合肥,改变土壤pH和氧化还原电位(Eh),研究土壤pH、Eh条件对土壤-苦丁茶树系统中铅分布的影响。结果表明:在所研究的土壤pH范围内,从酸性到碱性变化,铅在土壤中含量分布趋于减少,在苦丁茶树根、茎、叶中的含量分布趋于增多,呈现出酸性增大有利于降低铅对苦丁茶树的污染风险。随pH的变化,铅在土壤各层中含量改变较大的是中层,在苦丁茶树的根、茎、叶中含量变化较大的是根。随pH增大,苦丁茶树中铅含量增大,但铅主要被富集在茶树根部。改变土壤的Eh条件,对苦丁茶树及其土壤中铅的分布均有明显影响,其中以土壤的表层和茶树的根、叶影响较大。从减少铅污染的角度,存在适宜的土壤Eh值,如在Eh=260.5时茶树土壤将铅富集在表层,从而降低铅在茶树叶中的含量,对茶叶的安全性有利。

苦丁茶冬青叶多糖的分离纯化及其对羟自由基的清除作用

苦丁茶冬青叶经乙醇脱脂、水提醇沉和Sevag法除蛋白,得苦丁茶冬青叶粗多糖KPSⅡ。KPSⅡ经DEAE-纤维素阴离子交换层析柱分离纯化,得到两个纯化多糖组分KPSⅢa和KPSⅢb。KPSⅢa和KPSⅢb经过硫酸水解,还原乙酰化,用气相色谱方法测定了其组成及相对含量。KPSⅢa与KPSⅢb均主要由阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖组成,其摩尔比分别为10.2:1.0:1.2:8.0:5.4和17.7:1.0:1.1:1.8:4.1。以Fenton反应为产生·OH模型,用紫外分光光度法实验了苦丁茶冬青叶多糖(KPSⅡ、KPSⅢa、KPSⅢb)对模型中产生的·OH的清除作用。结果表明,KPSⅡ、KPSⅢa、KPSⅢb对·OH都具有一定的清除作用,且清除率与多糖的浓度存在一定的量效关系。苦丁茶冬青叶粗多糖KPSⅡ对·OH的清除作用均比纯化多糖(KPSⅢa、KPSⅢb)强。

苦丁茶冬青叶多糖KPS Ⅲa的热分析研究

采用热重、热重-红外联用及差示扫描量热法研究苦丁茶冬青叶多糖KPSⅢa的热稳定性。结果表明,苦丁茶冬青叶多糖在225℃以下只失去吸附水,在225～625℃间发生剧烈的裂解反应,产生水和二氧化碳;与肝素、淀粉、半乳糖及甲壳素的热分析比较,含有硫酸酯的苦丁茶冬青叶多糖和肝素的热稳定性较低,含氨基的甲壳素的热稳定性最好。说明苦丁茶冬青叶多糖在225℃以下相对稳定,不同的基团对多糖的热稳定性有很大影响。

苦丁茶与近缘种的果皮微形态特征及其分类学意义

在扫描电镜下对药用植物苦丁茶 (IlexkudingchaC .J.Tseng)与 4个近缘种的果皮微形态进行了观察。结果显示这些材料的果皮上均有气孔器存在 ,气孔圆形至椭圆形 ,气孔外拱盖表面近平滑或有蜡质碎片 ,拱盖内缘近平滑稀浅波状 ,外缘角质膜在气孔周围呈环形包着气孔。但各种间果皮的微形态特征具有较为明显的差异 ,有一定的分类鉴定意义。本研究结果表明扣树(I .kaushueS .Y .Hu)的果实有指状毛附属物 ,不支持与苦丁茶的合并。五棱苦丁茶 (I.pen tagonaS .K .Chen ,Y .X .FengetC .F .Liang )的果皮特征与苦丁茶较近 ,但有明显差异 ,支持将其从苦丁茶中独立出来建立一新种。

苦丁茶中总皂苷含量的测定

建立了苦丁茶 (IlexkudinchaC .J .Tseng) 总皂苷F含量的测定方法。以苦丁茶皂苷F作对照品 ,φ =8%香草醛无水乙醇溶液和 φ =77%硫酸溶液为显色剂 ,6 0℃恒温反应 10min ,分光光度法测定苦丁茶总皂苷的含量。最大吸收波长 5 34nm ,在 6～ 36 μg mL范围内浓度与吸光度线性关系良好 ,相关系数r=0 9995。平均回收率为 97 17% ,RSD =1 6 9%。测定了苦丁茶不同产品的总皂苷含量 ,结果表明方法简便 ,重现性好。该法可作为苦丁茶质量检测的方法之一。

广西天等县无公害苦丁茶园的卫生质量评价

采用污染指数法对广西天等县无公害苦丁茶园的土壤、灌溉水以及苦丁茶的卫生质量进行综合评价。结果显示:天等县无公害茶园土壤和茶园灌溉水的所有卫生指标的单项污染指数均小于1,茶园的土壤综合污染指数为0.73,灌溉水综合污染指数为0.43;苦丁茶所有检测项目仅检测出3项,其中铅的污染指数为0.06,铜的污染指数为0.26,八氯二丙醚的污染指数为0.7,其余指标的污染指数均为0。说明天等县无公害茶园的环境质量与产品质量均达到无公害的要求,该基地可作为生产无公害苦丁茶的示范基地。

苦丁茶多糖活性成分动态累积及其抑菌活性

目的:研究苦丁茶(Ilex kudingcha C.J.Tseng.)中主要抑菌活性成分多糖在不同采收月份的动态累积规律。方法:将不同采收期的苦丁茶叶水浴回流提取3次,用杯碟法分别测定其对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌3种菌的抑菌圈直径,比较不同采收期苦丁茶水提物抑菌圈直径大小,确定最佳采收期。通过苯酚硫酸法测定不同采收期苦丁茶提取物中多糖含量,分析多糖含量与苦丁茶抑菌能力之间相关性;同时采集不同采收期红外光谱,分析与多糖相关的特征峰强度变化规律及其与抑菌活性之间的相关性。结果:在一年的不同月份生长期内,苦丁茶多糖含量在1—3月份逐渐增加,4月份达到最大值96.6 mg/g,然后呈缓慢下降的趋势,7—10月变化不大,11月份后含量显著降低,12月达到全年最低值47.7 mg/g。苦丁茶水提物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌3种菌的抑制作用在4月份最大,12月份最小,与苦丁茶多糖含量的变化规律基本一致。结论:苦丁茶抑菌活性多糖成分4月份含量最高,为最佳采收期;苷类和多糖为苦丁茶抑菌活性成分。

广西苦丁茶提取物体外抗单纯疱疹病毒1型活性的实验研究

目的探讨不同苦丁茶提取物体外抗单纯疱疹病毒1型(HSV-1)的作用。方法采用细胞病变效应法(Cytopatho-genic effect,CPE)和空斑减数实验(Plaque reduction assay)测定不同苦丁茶提取物抗HSV-1活性,计算药物对病变的抑制率和半数抑制浓度(50%inhibiting concentration,IC50),并从药物对细胞的保护,对病毒增殖的影响及对病毒感染细胞的综合作用3个方面初步探索苦丁茶提取物抗HSV-1病毒活性的机理。结果苦丁茶水提物能明显抑制HSV-1的致病变作用,IC50为108.24μg/ml,药物对细胞的保护及对病毒感染细胞的综合作用中均表现出明显的活性。结论苦丁茶水提物具有显著的抗HSV-1活性,且初步推测其抗病毒活性是作用在病毒和受体结合,侵入Vero细胞阶段。

苦丁茶冬青叶多糖的提取及含量测定

目的 研究苦丁茶冬青叶多糖含量的测定方法。方法 以水提醇沉的方法从苦丁茶冬青叶中提取得到苦丁茶冬青叶多糖并以正交实验优化显色条件，采用苯酚-硫酸法测定其多糖含量。结果 测定波长为482nm，最佳显色条件为6％苯酚用量1．0ml，浓硫酸用量7．0ml，反应时间40min。标准曲线回归方程为A=0．0546C-0．0033（n=10），r=0．9998，并在2．51-45．11mg·L^-1范围内呈良好线性关系。平均回收率为98．55％，RSD=1．86％（n=5）。测得多糖平均含量为31．90％，RSD=1．75％（n=6）。结论 该方法简单、准确、重现性好，可为其继续研究开发及应用提供参考依据。

反相高效液相色谱-光电二极管阵列检测器法测定苦丁茶中乌索酸的含量

目的建立苦丁茶中乌索酸含量的测定方法,同时采用光电二极管阵列检测器检测乌索酸色谱峰的纯度。方法色谱柱为Nucleosil C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-水(87∶13),流速0.8 ml/min,检测波长210 nm,柱温26℃。结果乌索酸在1.636-17.724μg(r=0.999 8)范围内峰面积与进样量呈良好的线性关系,乌索酸的平均回收率为99.3%(RSD为1.7%)。结论该方法样品处理简单,准确度高,分离效能好,适合于苦丁茶叶中乌索酸含量的测定。

苦丁茶冬青扦插繁育技术研究

以苦丁茶冬青当年生半木质化的枝条作为扦插材料,通过对比试验研究植物生长调节剂、处理时间和营养土配方与组合等对苦丁茶冬青扦插生根和装袋移栽的影响。结果表明,使用300 mg/L、p H 6.5的萘乙酸(NAA)溶液处理8.0 h以上对苦丁茶冬青插穗的生根效果最佳,移栽的营养土采用黄泥、河沙、椰糠和牛粪并添加复合肥后混匀堆放熟化,对苦丁茶冬青种苗的装袋存活效果较好。