即刻早期基因IEX-1与肿瘤

即刻早期反应基因IEX-1(immediate early response gene X-1)作为即刻早期基因家族之一,参与细胞的多种生物学效应,其转录和表达受多种因素的调控如NF-κB、P53、SP1、AP2、1a-25(OH)2D3、TNF-α及电离辐射等。研究发现,IEX-1在多种肿瘤细胞中转录及表达降低或缺失,而电离辐射等则可以激活诱导其在多种类型肿瘤细胞和正常细胞中快速的表达,其激活表达与辐射后细胞的生长、周期、凋亡等的改变密切相关。辐射可诱导特性使其具有潜在的临床和基因工程生产应用前景。

子痫前期患者胎盘组织和人脐静脉内皮细胞中即刻早期反应基因X-1蛋白的表达

目的:探讨子痫前期(PE)患者胎盘组织和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中即刻早期反应基因X-1(IEX-1)蛋白的表达。方法:应用免疫组化SP法检测10例轻度PE、20例重度PE患者和20例正常足月孕妇(正常妊娠组)胎盘组织中IEX-1蛋白的表达。将HUVEC分别用胎牛血清(阴性对照组)、正常晚孕妇静脉血清(正常妊娠组)和重度PE患者血清(重度PE组)孵育24h,然后应用细胞免疫化学法检测细胞中IEX-1蛋白的表达,采用MTT法检测细胞增殖抑制率。结果:IEX-1蛋白主要表达于胎盘绒毛滋养细胞及蜕膜细胞的胞质,3组胎盘绒毛滋养细胞及底蜕膜细胞中的表达差异有统计学意义(H=26.620、16.932,P<0.001),重度PE组的表达强于轻度PE组(P<0.05),轻度PE组强于正常妊娠组(P<0.05)。正常妊娠组及重度PE组HUVEC胞质中有IEX-1蛋白的表达,且较阴性对照组明显增强(H=11.495,P=0.003)。阴性对照组、正常妊娠组和重度PE组HUVEC细胞增殖抑制率差异有统计学意义(F=113.438,P<0.001),重度PE组高于其他2组(P<0.05)。结论:IEX-1可能通过调节滋养细胞及蜕膜细胞凋亡,参与内皮细胞损伤过程,在PE发病中起着重要作用。

USP7调节EGR1的表达对喉癌细胞生物学行为的影响

目的本研究主要通过siRNA敲低喉癌细胞USP7表达后,检测经转录组测序筛选并与喉癌增殖、迁移相关基因早期生长反应基因1(EGR 1)的表达,以了解其在喉癌发病机制中的作用。方法设计特异性siRNA序列,包装慢病毒并转染喉癌HEp-2细胞特异性敲低泛素特异性蛋白酶7(USP7)表达,再通过RT-PCR和Western blot方法从基因和蛋白质水平检测EGR1的表达。结果①siRNA敲低喉癌细胞中USP7后,敲低组USP7 mRNA表达显著降低,同时敲低组USP7蛋白也显著下降;②RT-PCR检测到敲低后的喉癌细胞EGR1 mRNA表达上升,Western blot检测到EGR1蛋白质表达也呈上升;③CCK8实验检测到敲低后的喉癌细胞较阴性对照组和空白组细胞增殖能力明显下降;Transwell实验检测敲低组喉癌细胞迁移能力较阴性对照组和空白组明显下降。结论在USP7敲低后,EGR1在基因和蛋白水平上升,表明在喉癌的发生过程中USP7可能对EGR1的表达有抑制作用,因此,USP7可能通过抑制EGR1表达在喉癌发生发展过程中有一定作用,为喉癌的临床研究提供实验依据。

IEX-1基因转染对人卵巢癌细胞增殖活性及顺铂敏感性的影响

目的:探讨即刻早期反应基因-1(immediate early response gene X-1,IEX-1)转染人卵巢癌细胞SKOV3后,对顺铂药物敏感性的影响。方法:提取并鉴定重组质粒pEGFP-N1-IEX-1,采用脂质体介导将重组质粒转染到人卵巢癌细胞SKOV3,RT-PCR检测转染前后IEX-1mRNA和蛋白的表达情况,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测转染后卵巢癌细胞SKOV3增殖情况以及对顺铂敏感性的变化。结果:成功转染IEX-1基因后可检测到IEX-1mRNA的高表达;转染组细胞的增殖速度增快(P<0.05),但对顺铂的敏感性明显增强(P<0.05)。结论:IEX-1可增强卵巢癌细胞的体外增殖能力,并增强卵巢癌细胞体外对顺铂化疗的敏感性,为肿瘤的有效干预和治疗提供新的靶点。

IEX-1和NT在卵巢癌组织中的表达及其意义

目的:检测卵巢癌组织中即刻早期反应基因X-1(IEX-1)和硝基酪氨酸(Nitro tyrosine,NT)的表达,探讨IEX-1与NT在卵巢癌发生发展中的作用。方法:选取郑州大学附属医院妇产科2007年1月～2008年10月104例卵巢肿瘤蜡块,其中良性卵巢肿瘤20例、交界性瘤24例、恶性组织60例,采用免疫组织化学方法检测卵巢组织中IEX-1与NT的表达,并分析两者的相关性。结果:①IEX-1在卵巢癌组织中的表达率38.3%,明显低于良性及交界性卵巢肿瘤(P<0.01);NT在卵巢癌组织中的表达率76.0%,明显高于良性及交界性卵巢肿瘤(P<0.001);②卵巢癌组织中IEX-1和NT蛋白的表达均与FIGO分期、组织学分级相关(P<0.05),与患者年龄、肿瘤的组织学类型无关(P>0.05);③IEX-1蛋白的阳性表达和NT蛋白的阳性表达在卵巢癌组织中的表达呈负相关(r=-0.271,P<0.05)。结论:IEX-1和NT蛋白的表达变化可能与卵巢癌的发生发展有关。

即刻早期反应基因-1在乳腺癌新辅助化疗后表达的变化及对预后的意义

目的探讨即刻早期反应基因-1(IEX-1)在乳腺癌新辅助化疗(NCT)后表达的变化及在预后判断中的意义。方法选取2012年1月至2017年1月首诊首治并接受NCT的110例乳腺癌女性患者作为研究对象进行回顾性研究,采用二步法免疫组化方法检测NCT前后乳腺癌组织中IEX-1表达的变化,采用Kaplan-Meier和Log-rank法分析其对无病生存期(DFS)及总生存期(OS)的影响。结果 NCT前乳腺癌组织中IEX-1蛋白均阴性;NCT后,IEX-1蛋白阳性表达45例(40. 9%),阴性65例。生存分析显示,IEX-1蛋白阳性表达组患者的DFS、OS均低于IEX-1蛋白阴性表达组(P均<0. 01)。多因素Cox比例风险回归模型分析发现,IEX-1蛋白阳性表达为乳腺癌预后的独立风险因素[HR=4. 921,95%CI=(1. 273~19. 018),P=0. 021]。结论乳腺癌NCT前后检测IEX-1有助于预后判断,IEX-1可能成为乳腺癌NCT疗效的预后指标。

即刻早期反应基因对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导乳腺癌细胞HCC1937凋亡的影响

目的观察即刻早期反应基因（IER3）在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）诱导乳腺癌细胞HCC1937凋亡中的作用。方法采用实时定量聚合酶链反应（Real-timePCR）检测TRAIL和IER3干预48h前后TRAIL和IER3基因表达改变，分别于24、48、72、96、120h后采用噻唑蓝（MTT）法检测HCC1937细胞的增殖，10～14d后采用细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成能力，24h后采用Hoechst33258染色检测细胞凋亡。结果与阴性对照组比较，TRAIL组和IER3＋TRAIL组的TRAIL相对表达量分别是42．69±3．88和46．36±3．55；IER3组和IER3＋TRAIL组的IER相对表达量分别是5．08±1．40和9．66±2．25。TRAIL、IER3及TRAIL＋IER3组在120h时的抑制率（％）分别为（50．95±7．45）、（25．39±4．49）及（72．01±2．95）。IER3＋TRAIL组的细胞克隆形成能力明显降低，而细胞凋亡率明显增高。结论IER3能增强TRAIL诱导乳腺癌细胞HCC1937的凋亡，两者联合具有协同诱导细胞凋亡的作用。