固定化胰蛋白酶壳聚糖树脂的制备及其对大豆胰蛋白酶抑制剂的吸附性

通过反向悬浮交联法制备了壳聚糖树脂,采用环氧氯丙烷活化,对树脂固定胰蛋白酶进行研究。通过正交设计实验,优化了壳聚糖树脂的活化、偶联条件;结果表明,4.0g壳聚糖树脂,加入1.6mL环氧氯丙烷,8.0mL1.0mol/LNaOH,活化温度60℃、偶联温度30℃时,胰蛋白酶可达到较大偶联量,偶联量为24.63mg/g壳聚糖树脂;添加硼氢化钠4.0mg,1,4-二氧六环6.0mL时,可将壳聚糖树脂的活化效果分别提高2倍、1倍。固定化酶活性检测表明,胰蛋白酶已成功地偶联到壳聚糖树脂上,并具有亲和吸附胰蛋白酶抑制剂活性,对大豆胰蛋白酶抑制剂的清除率约为33.3%。此固定化胰蛋白酶树脂可作为一种新型、廉价的亲和载体材料。

改性与修饰壳聚糖固定化酶纯化抑肽酶研究

采用化学改性与修饰微珠壳聚糖为载体,共价法偶联牛胰蛋白酶,制成抑肽酶亲和吸附剂,单位活力5190KIU/g(湿),蛋白质偶联率605%,酶活性回收率55%;将其直接亲和层析牛肺提取液,分离纯化高比活抑肽酶.方法过程简单,样品比活力5700KIU/mg,质量稳定,成本较低;该吸附剂机械强度高,抗污染能力较强,非特异性吸附较小,可以反复使用,价格低廉,适合工业化生产.

固定化胰蛋白酶水解花生蛋白制备多肽的研究

以海藻酸钠为载体,戊二醛为交联剂固定化胰蛋白酶,考察固定化工艺的选择、固定化酶水解花生蛋白的优化条件及固定化酶的稳定性。结果表明:海藻酸钠固定化胰蛋白酶的最佳条件为:海藻酸钠浓度3%、加酶量4%、戊二醛浓度3%、氯化钙浓度0.2mol/L。此条件下酶活力回收率为50.34%。水解花生蛋白的最佳条件为:固液化1:20、pH7.5、温度60℃、时间6h、加酶量5%,此条件下氨基氮含量最高为1.57mg/ml。固定化酶重复使用7次,酶活力仍保持50%以上。

交联海藻酸钠磁性微球的制备及固定化胰蛋白酶研究

制备了交联海藻酸钠磁性微球,并以磁性微球为载体,戊二醛为交联剂,将胰蛋白酶固定化;利用透射电镜、粒度分析、红外分析对交联海藻酸钠磁性微球进行了表征;探讨给酶量、戊二醛浓度和pH值对固定化酶活性的影响;与自由酶比较,考察了固定酶的酶学性质。结果表明:交联海藻酸钠磁性微球是固定化胰蛋白酶的良好载体,固定化酶最适宜的条件是吸附时间12h,给酶量为100mg/0.1g磁性载体、交联剂戊二醛浓度为5%、溶液pH值为6,同时将酶固定化后,酶的稳定性和催化性能均有所提高。

含环碳酸酯基固定化酶载体的合成及其性能研究

环碳酸酯基具有于温和条件下与氨基反应形成羟基与氨基甲酸酯的特征 .通过反相悬浮聚合 ,以乙烯撑碳酸酯为反应性单体 ,亲水性N ,N′ 亚甲基双丙烯酰胺为交联剂 ,分别选用N 乙烯基吡咯烷酮和丙烯酸 β 羟乙酯两种亲水性共单体为合成酶载体的成分 ,首次以二甲基甲酰胺和线型高分子聚乙二醇 40 0为复合致孔剂合成了两种性能优越的 ,可快速且可保持酶活力的固载胰蛋白酶的大孔型交联高分子酶载体 .其以σ共价键形成的固定化酶和以纯物理吸附形式吸附的酶同时存在于树脂骨架之中 ,根据相似相容原理 ,固载于载体上的酶分子容易吸附溶液中酶分子使其以物理吸附的形式存在 ,后者在经过 6次使用后近乎定量脱落 ,最终保持 85%活力不变者当为σ共价键结合酶 .纯σ共价键结合于高分子骨架的酶不易脱落 ,利用这一特性可使固定化酶的催化过程简化 ,可避免繁杂而冗长的分离脱落酶的过程 .可望将这种高分子酶载体用于临床医学中属于多肽类的分子量为 2 0 0 0左右的中级分子量毒素的无泄露排除 .

不同载体固定化胰蛋白酶酶学特性的研究

目的:研究以壳聚糖、复合硅胶、阴离子交换树脂为载体固定化胰蛋白酶的酶学特性。方法:通过测定不同载体固定化胰蛋白酶的活力得其最适反应温度值、最适反应pH值和米氏常数(Km)值。结果:以壳聚糖、复合硅胶、阴离子交换树脂为载体制备固定化胰蛋白酶的最适反应温度分别为70℃、60℃、60℃;最适反应pH值分别为7.5、8.0、8.0;表观米氏常数K’m分别为22.72mg/ml、25.12mg/ml、29.04mg/ml。结论:与游离酶相比,固定化胰蛋白酶均表现出一定的热稳定性、酸碱稳定性,利于工业化生产。

介孔材料SBA-15固定化胰蛋白酶的研究

在酸性条件下以正硅酸乙酯(TEOS)为硅源、非离子表面活性剂Pluronic P123为模板剂合成了介孔分子筛SBA-15,将其作为载体,对胰蛋白酶进行了固定化研究。研究了固定化条件对固定化酶量的影响,以及固定化酶的热稳定性和操作稳定性。结果表明,当酶液浓度大于5mg/mL,固定化时间10h时,胰蛋白酶的固定化效果最好,固定化酶量可达23.6mg/g。固定化酶的热稳定性与游离酶相比有了显著的提高,且固定化酶具有较好的操作稳定性,连续反应6批次后,酶的剩余活性仍保持在40%以上。

胰蛋白酶固定化技术研究

以脱乙酰壳聚糖为载体，明胶包埋，戊二醛为交联剂，对胰蛋白酶的固定化条件和固定化胰蛋白酶的性质进行研究。文章报道的新工艺是一种制备固定化胰蛋酶的理想方法，它兼有絮凝法迅速方便、包埋法成型容易和交联法强度大等优点。研究中就交联剂用量、明胶用量、ｐＨ 值以及载体与酶的比例对固定化胰蛋白酶的影响进行比较，在所选择的固定化条件下，固定化酶的活性回收率可达５８．２％ 以上。固定化酶的最适温度为６８ ℃，最适ｐＨ 值为７．９， Ｋｍ 值升高，热稳定性、ｐＨ 值贮存稳定性以及在乙醇溶液中的抗变性亦明显高于可溶性胰蛋白酶。在柱式反应器内，当以２．５％ 酪蛋白为底物时，其操作半衰期为４７ ｄ 左右。

Fe_3O_4磁性纳米粒子固定化胰蛋白酶

以Fe3O4@mSiO2@nSiO2介孔材料为载体,γ-氨丙基三乙氧基硅烷接枝,戊二醛交联,研究胰蛋白酶的固定化及其在蛋白酶解中的应用。对蛋白酶固定化条件的优化研究表明,φ(戊二醛)=1.875%、给酶量为0.3 mg/mL、反应时间为4 h时酶的固定化效率可达50.5%,且保持77.3%相同含量酶的活性。对牛血清蛋白的酶解实验表明,在微波辅助作用下,磁性微球材料固定化酶可快速高效地酶解牛血清蛋白,酶解液在λ=280 nm处有较明显的吸收信号变化,HPLC分析表明酶解液中多肽片段吸收值变化明显,同时有新的多肽片段生成。

胰蛋白酶交联聚体的制备及性质研究

交联酶聚体(CLEA)是一种新型的无载体固定化技术.以胰蛋白酶为模型体系,系统地研究了CLEA技术的制备工艺、应用条件、稳定性及结构形貌.(1)在制备工艺中考察了各步骤对CLEA酶活保留的影响,重点分析了沉淀剂浓度、类型的影响,结果表明100%乙醇是较为理想的沉淀剂;(2)在应用条件确定中测定CLEA的最适催化温度为70℃,最适催化pH为9.0,并解释了温度-活性、pH-活性曲线的漂移现象;(3)稳定性研究结果表明CLEA技术大幅提高了胰蛋白酶的热稳定性、溶剂稳定性,且无酶泄漏;(4)在形貌表征中分别利用扫描电子显微镜、光学显微镜和激光粒度分析对CLEA的微观结构进行了多尺度研究,着重讨论了其独特结构与优良特性间的关系.本文所得结论为胰蛋白酶CLEA的应用提供基础数据,并为CLEA技术应用于其它酶种提供参考。

双醛氧化纤维素固定胰蛋白酶性质研究

研究固定化酶载体-氧化型纤维素条件优化,并用此载体固定胰蛋白酶。结果表明,当氧化剂高碘酸钠浓度为0.5 mol.L-1,氧化环境pH 2,氧化时间为3.5 h,反应温度为35℃时,氧化纤维素醛基质量分数可到达74.06%。以此为载体固定胰蛋白酶,可得到固定化胰蛋白酶最适温度为60℃,最适pH 9.0,固定化酶比自由酶热稳定性提高。在最适条件下,固定酶可重复使用5次以上,之后活性才有所下降,将固定化酶置于4℃冷藏保存,5 d后活性保持在90%,固定化酶表现出较高使用和贮藏稳定性,为胰蛋白酶广泛应用奠定基础。

高磁性壳聚糖微粒的制备与应用

采用壳聚糖包埋磁粉 ,经戊二醛修饰、环氧氯丙烷交联制得高磁性壳聚糖微粒 .此微粒共价结合卵清粘蛋白得到磁性亲和吸附剂 。

固定化胰蛋白酶水解乌鸡肉制备功能肽的研究

以海藻酸钠为载体,戊二醛为交联剂固定化胰蛋白酶,考察胰蛋白酶的固定化工艺,固定化酶水解乌鸡肉的工艺条件及固定化酶的稳定性。结果表明:固定化胰蛋白酶的最佳条件为:海藻酸钠浓度4%、加酶量10%、pH7.5、温度70℃,酶活力回收率为38.84%;水解乌鸡肉的最佳条件为:固液比1:3(m/V)、pH7.5、加酶量10%、温度60℃,氨基氮含量最高为2.18mg/ml,固定化酶重复使用8次,酶活力仍保持50%以上。

介孔分子筛MCM-41固定化胰蛋白酶的研究

以介孔分子筛MCM-41作为载体,戊二醛作为交联剂,对胰蛋白酶进行了固定化。研究了固定化条件对酶活及酶活性回收率的影响,并对固定化酶的热稳定性和操作稳定性做了探讨。结果表明,当每克载体的给酶量为30mg,固定化温度15℃,固定化时间3h,pH8.0,戊二醛体积分数0.4%时,胰蛋白酶的固定化效果最好,此时平均酶活性回收率达60%左右。固定化酶的热稳定性与游离酶相比有了显著的提高,并且固定化酶具有较好的操作稳定性,连续反应10批后,酶剩余活性仍保持在80%以上。

新型亲水聚合物修饰硅胶颗粒固定化酶的制备及在蛋白质组鉴定中的应用

采用原子转移自由基聚合法制备了亲水聚合物修饰的硅胶颗粒作为一种新型固定化酶载体,在实现胰蛋白酶高密度固定的同时,显著降低了载体材料非特异性吸附导致的样品损失。因此,该固定化酶材料兼具高酶解效率和高回收率的特性。以标准蛋白质牛血清白蛋白(BSA)为样本,使用该固定化酶1 min即可完成酶解,鉴定到肽段对BSA的氨基酸序列覆盖率可达90%以上。该固定化酶材料成功应用于酵母菌全蛋白质复杂样本的酶解,从3min酶解产物中鉴定到666个蛋白质,超过同样条件下溶液酶解12 h的鉴定结果。

吸附—交联法固定胰蛋白酶及在澄清啤酒中的应用

胰蛋白酶的固定化采用吸附—交联法。在单因素试验基础上 ,通过正交试验 ,获得了胰蛋白酶固定化的最佳条件 :酶与载体体积比为 2∶ 1,吸附时间为 10 h,p H=4 .5 ,缓冲液浓度为 0 .0 5 mol/ L,戊二醛的质量分数为 0 .1%。此条件下制得的磁性酶活力回收在 5 0 %左右 ,相对酶活力达 74 % 。

聚丙烯－胰蛋白酶膜的制备与性能

讨论了用空气等离子体活化处理技术制备聚丙烯－胰蛋白酶膜的方法。研究了等离子体处理参数和接枝反应条件对聚丙烯接枝丙烯酸的接枝率和聚丙烯－胰蛋白酶固定化酶膜活力的影响。评价了聚丙烯－胰蛋白酶膜的稳定性。用ＩＲ和ＥＳＣＡ分析了接枝膜和聚丙烯－胰蛋白酶的结构与组成。

新型鳞片状聚合物修饰硅胶填料固定化酶的制备及其在蛋白质组鉴定中的应用

利用原子转移自由基聚合法制备了鳞片状聚合物修饰的硅胶填料,将其作为一种新型的固定化酶载体,实现了蛋白酶的高密度固定,从而明显缩短了复杂蛋白质样品的酶解时间。使用标准蛋白质对固定化酶的酶解效率进行了考察,结果表明:鳞片状聚合物修饰的新型固定化酶硅胶填料具有较高的酶解效率,酶解标准蛋白质1 min后,鉴定到肽段的氨基酸序列覆盖率可达95%以上。将该固定化酶硅胶填料成功应用于大肠杆菌全蛋白质的酶解,从2 min酶解肽段的混合物中鉴定到的蛋白质数量超过同样条件下溶液酶解12 h的结果。另外,该固定化酶硅胶填料可以重复使用,其酶解效率具有良好的稳定性和重现性;该固定化酶具有较好的样品回收率,因而可以应用于蛋白质组学研究中。

固定化胰蛋白酶的制备研究

以壳聚糖为载体,戊二醛为交联剂,采用交联-吸附法对胰蛋白酶的固定化条件进行了初探。实验结果表明:酶用量、戊二醛浓度、pH值、温度等对壳聚糖微球固定化的胰蛋白酶活力有显著影响,最适固定化条件为:壳聚糖0.125g、酶用量14mg,交联剂浓度0.2%(v/v),pH值7.5,固定化温度35℃,交联时间2h,吸附时间5h。在此条件下酶活力回收率为76.57%。

固定化酶解猪小肠黏膜制备肝素的工艺研究

本文以肝素效价为指标,探索了固定化胰蛋白酶对小肠黏膜的酶解作用。在单因素试验基础上采用Box-Behnken中心组合试验设计和响应面(RSM)分析法,以肝素效价为响应值,通过考察p H值、加酶量、酶解温度及料液比,优化了固定化胰蛋白酶酶解制备肝素的工艺,建立了二次回归方程。结果表明,p H值、酶解温度、加酶量、及料液比均对肝素提取具有显著影响。固定化酶制备肝素最佳工艺条件为:p H为11,加酶质量分数为0.24%,酶解温度为46℃,料液比为1∶3.3(g/m L),酶解时间为5 h,在此条件下获得肝素酶解液效价为15.28 U。