ESTABLISHMENT OF IMMUNO－PCR TECHNIQUE FOR THE DETECTION OF TUMOR ASSOCIATED ANTIGEN MG＿7－Ag ON THE GASTRIC CANCER

The gastric cancer associated antigen MG_7-Ag was detected by means of a newly established method,termed Immuno-PCR A McAb-recombinant DNA chimeric molecule was made which possesses bispecific binding affinity for antigen that had been immobilized on microtiter wells and the segment of the attached DNA was amplified by PCR. The antigen of gastric cancer cell line KATO III was monitored by this method. Analysis of PCR products by agarose gel electrophoresis after staining with ethidium bromide allowed as few as 20 cells to be detected readily and reproducibly. Immuno-PCR showed a 104 enhancement in detection sensitivity compared with ELISA assay. When the same numbers of cells ( 2×10e/ml ) were immobilized and then the serial diluted chimeric molecule was added. 3.8×10-14 moles and 3.0 × 10-11 moles were needed to give positive results with the Immuno-PCR and ELISA assay. respectively.Therefore, Immuno-PCR could give an enomous amplification capability with good specificity, and has a sensitivity much higher than any existing techniques for antigen detection.

夹心免疫PCR方法检测蓖麻毒素

目的 建立了双抗夹心免疫PCR的检测技术,检测极微量的抗原。方法 以亲和素作为连接分子连接生物素化抗体和生物素化DNA,应用于免疫PCR中,检测极微量的抗原。结果 建立了双抗夹心兔疫PCR的检测技术,检测蓖麻毒素的灵敏度达0.1pg/mL,与夹心ELISA方法比较灵敏度高103。结论 建立的免疫PCR系统灵敏度高,可用于各种微量抗原的检测。

免疫PCR检测技术及其在食品安全领域中的应用

免疫PCR技术是一种在免疫学和PCR技术基础上建立起来的新型检测技术,这种技术同时具有ELISA的高特异性和PCR的高灵敏性。本文介绍了免疫PCR的技术原理和反应体系,比较其不同种类和应用范围,指出免疫PCR存在的问题并提出相应的对策;归纳了目前免疫PCR在食品安全等领域中的应用;并结合免疫PCR技术的优势提出其在食品安全检测中的应用前景。

夹心免疫PCR方法检测金葡菌肠毒素B

目的 建立双抗夹心免疫PCR的检测技术 ,用于检测极微量的抗原。方法 以亲和素作为连接分子 ,连接生物素化抗体和生物素化DNA ,应用于免疫PCR中检测极微量金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)。结果 双抗夹心免疫PCR的检测技术 ,检测SEB的灵敏度达 0 1ng/L ,与夹心ELISA方法比较灵敏度高 10 3 倍。结论 双抗夹心免疫PCR系统灵敏度高 ,可用于各种微量抗原的检测。

免疫PCR方法快速检测饮料中的赤藓红

免疫PCR方法是结合免疫学和PCR原理的一种新型检测技术，具有高灵敏度、高自动化、操作简便等特点。研究采用PCR方法建立饮料中赤藓红快速检测方法。通过优化包被抗原浓度、探针DNA的量、抗体浓度等条件，结果显示：赤藓红的检测低限为10．0fg／g，线性浓度范围为0．05～50pg／g，果汁饮料中赤藓红的添加回收率为71．5％～112．6％，该方法简单、灵敏，适用于饮料中赤藓红的测定。

一种简易的免疫PCR方法的建立

免疫 Ｐ Ｃ Ｒ 为一种高敏感度检测抗原的新技术， 操作程序大多沿袭 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 方法． 用戊二醛作连接剂， 将蛋白质高效率包被在普通 Ｐ Ｃ Ｒ 管内壁， 使免疫及 Ｐ Ｃ Ｒ 反应用普通 Ｐ Ｃ Ｒ 仪得以在管中连贯地进行． 实验结果表明，标准曲线的线性关系好， 与 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 方法比较敏感度高出约１０ ５ ． 这一改良法的建立， 可望促进免疫 Ｐ Ｃ Ｒ

检测HBVDNA/Ig-双特异性循环免疫复合物的免疫捕捉法PCR

目的:建立一种免疫捕捉法PCR技术,研究血清免疫复合物中不同Ig类型抗体结合HBV的情况,并初步探讨其意义。方法:以羊抗人μ、γ、α链的IgG为捕捉抗体,再利用PCR扩增捕捉物中的HBVDNA。结果:成功地建立了检测HBVDNA/IgM、IgG和IgATCIC的免疫捕捉法PCR技术。该技术特异性强、敏感性高、重复性好,可以显著提高HBVDNA的检出率。同时发现,结合HBV的抗体的Ig类型组合有明显差异,三者均阳性最高。结论:说明乙肝患者血清免疫复合物中有较多的病毒颗粒。研究HBVDNA/IgTCIC对乙肝发病机理的深入阐明可能具有重要意义。

免疫-PCR法检测梅毒螺旋体特异性抗体

以梅毒螺旋体重组蛋白为抗原,应用免疫-PCR方法检测梅毒螺旋体抗体,并同常规ELISA法进行比较,探讨免疫-PCR方法检测梅毒螺旋体特异性抗体的可行性。结果免疫-PCR法敏感性是常规ELISA法的104倍,阳性检出率高于ELISA法;对照血清标本梅毒螺旋体抗体检测为阴性。表明免疫-PCR方法具有较高敏感性和特异性,有一定的临床推广价值,对梅毒患者的早期诊断及时治疗等具有重要意义。

免疫PCR检测乳腺癌患者血清p185蛋白抗体

目的为乳腺癌诊断提供血清学新标志。方法免疫PCR方法检测血清抗p185蛋白抗体，酶免疫组化方法检测组织p185蛋白表达。结果乳腺癌患者血清抗p185蛋白抗体阳性率为30％，而非癌患者和正常人血清抗p185蛋白抗体均为阴性，乳腺癌患者血清中抗p185蛋白抗体显著高于非癌患者和正常人（P〈O．01）。p185蛋白阳性表达的乳腺癌患者抗p185蛋白抗体阳性率为69．2％，明显高于p185蛋白阴性表达组，血清p185抗体测定与p185蛋白表达密切相关（P〈0．01）。结论检测血清抗p185蛋白抗体是检测组织p185蛋白理想的替代工具。抗p53蛋白抗体可以作为乳腺癌血清学诊断新标志，用于乳腺癌的普查和早期诊断。

金磁微粒为载体的免疫PCR检测HIV-1 p24

目的建立以金磁微粒为载体的免疫PCR HIV-1 p24检测体系。方法以金磁微粒作为免疫PCR的载体并通过载体的特异性和非特异性反应验证其可行性;以小鼠抗HIV-1 p24单克隆抗体作为捕获抗体包被金磁微粒,生物素化的羊抗p24多克隆抗体作为检测抗体;报告DNA用生物素标记的引物通过PCR扩增预先制备,并通过链亲和素的桥联标记生物素化的多抗,被两抗体夹心捕获的人重组HIV-1 p24抗原通过PCR扩增报告DNA的方式予以检测;并对检测的灵敏度和线性检测范围进行分析。结果金磁微粒上偶联抗体的效率可〉95%,偶联抗体的一致性较好,几乎不产生非特异性吸附,分离与洗涤步骤更简便更彻底;免疫PCR检测p24的灵敏度为0.1ng/L,比ELISA法检测的灵敏度高1.5×10^4倍,线性检测范围为p24浓度在0.1～100ng/L。结论金磁微粒是较理想的免疫PCR反应载体,金磁微粒为载体的免疫PCR检测HIV-1 p24是一种可兹应用的高灵敏度的检测方法。

以金磁微球为载体的H5N1 AIV免疫PCR检测方法的建立

【目的】将高特异性的抗原-抗体反应与高灵敏性的PCR扩增技术相结合,建立快速检测低浓度H5N1禽流感病毒(Avianinfluenzavirus,AIV)的免疫PCR方法。【方法】以pUC19为模板,采用5′端标记有生物素的引物进行PCR扩增,制备含有生物素的报告DNA分子。以金磁微球为固相吸附载体,通过亲和素-生物素的桥联作用,将含有生物素的报告DNA分子与生物素标记的抗AIVH5N1血凝素蛋白的检测抗体分子连接,H5N1AIV与检测抗体结合后,体外扩增报告DNA,间接放大低含量病毒信号,建立可有效检测微量H5N1AIV的免疫PCR方法。对建立的免疫PCR方法的最适报告DNA浓度、最适链亲和素工作浓度、灵敏度和特异性进行确定和评价。【结果】建立的免疫PCR方法最适报告DNA质量浓度为1ng/mL,最适链亲和素工作质量浓度为20ng/mL,该方法可成功检测到10-4EID50/mL的H5N1AIV,而且特异性良好。【结论】建立的以金磁微球为吸附载体的免疫PCR是一种灵敏度高、特异性好的检测微量H5N1AIV的方法。

一种新的免疫-PCR系统的建立和应用研究

把PCR技术作为指示系统引入免疫检测中，建立了免疫－KR技术。在本研究中，以PEI作交联剂，首次成功地将特异性抗体直接与DNA交联，构建了三种Ab－DNA基因探针，组成新的免疫-PCR检测系统．此三种特异性汕Ab-NDA探针可用于检测三种相应抗原。检测HSA抗原的最低含量可达10－10mg／ml，灵敏度比ELISA高106倍。

免疫PCR检测微量H5亚型禽流感病毒

为了有效检测低浓度禽流感病毒,笔者通过将高特异性的抗原-抗体反应与高灵敏性的PCR扩增技术相结合,建立了一种快速检测痕量H5亚型禽流感病毒的间接免疫PCR方法和间接"三明治"抗体夹心免疫PCR方法。以TopYield 96孔板为固相免疫吸附载体,以禽流感病毒H5蛋白为检测对象,通过一系列免疫反应及亲和素-生物素桥联作用,将生物素标记的报告DNA分子和生物素标记的禽流感病毒H5亚型抗体分子连接。充分洗涤后,在TopYield板孔中添加PCR反应液,对板壁偶联的报告DNA进行PCR扩增,间接达到检测微量禽流感病毒H5蛋白的目标。通过优化报告DNA分子和链亲和素的浓度,2种免疫PCR技术都可检测到约1fg的禽流感病毒H5蛋白,与常规ELISA方法相比,灵敏性提高了近1 000倍。

免疫-PCR检测肾综合征出血热患者血清中抗核衣壳蛋白抗体方法的建立

目的 建立高灵敏性和高特异性的免疫 -PCR方法检测肾综合征出血热 (HFRS)患者血清中抗核衣壳蛋白抗体。方法 用汉坦病毒 ( 76 - 118株 )重组核衣壳蛋白为抗原包被聚苯乙烯微滴度板 ,与经ELISA法和临床均已确诊为HFRS患者的血清进行抗原抗体特异性反应 ,以链霉亲和素为桥梁将生物素标记的抗体与生物素标记的DNA指示分子相连 ,PCR扩增DNA指示分子 ,通过检测指示分子DNA来反映肾综合征出血热患者血清中抗核衣壳蛋白抗体的水平 ,并与传统的ELISA法进行比较。结果 免疫 -PCR检测肾综合征出血热患者血清中抗核衣壳蛋白抗体的敏感性是ELISA法的 2 5 0 0 0倍 ;30例HFRS阳性患者血清免疫 -PCR检测均为阳性 ,2 0例甲型肝炎阳性血清和 2 0例正常人血清免疫 -PCR检测均为阴性。结论 免疫 -PCR方法敏感性高 ,特异性强 。

免疫-PCR法检测柯萨奇病毒B组抗原的实验研究

目的 :建立免疫 - PCR法 ,对分离培养的柯萨奇 B组病毒 (Cox B)毒株及临床可疑为 Cox B感染的血清标本进行检测。方法 :以间日疟原虫 SSU r RNA基因为指示分子 ,采用生物素进行末端标记 ,利用酶联免疫吸附试验 (EL ISA)和 PCR原理 ,建立免疫 - PCR法 ,并对 6 0份临床标本进行检测。 结果 :该方法具有较高敏感性和特异性 ,其敏感性是 EL ISA法的 3 0 0 0倍 ,也高出 RT- PCR法 10倍。 结论 :免疫 - PCR法是检测 Cox B抗原的敏感而特异的方法 ,为 Cox B的临床早期快速鉴定和流行病学研究等提供了一种新的微量抗原检测手段。

免疫PCR检测HIV-1 p24的实验研究

目的以HIV-1 p24为检测对象,建立以金磁微粒为固相载体的免疫PCR检测技术。方法以鼠抗HIV-1 p24单克隆抗体作为捕获抗体,包被金磁微粒,以生物素化的羊抗p24多克隆抗体作为检测抗体。报告DNA为甘蓝型油菜肉桂酰辅酶A还原酶基因的一个片段,用生物素标记的引物通过PCR扩增预先制备,通过链亲和素的桥联标记生物素化的多抗,被两抗体夹心捕获的人重组HIV-1 p24抗原通过PCR扩增报告DNA的方式予以检测。并且优化了免疫PCR的检测条件,对检测灵敏度进行了分析。结果为降低非特异性扩增,链亲和素和用于标记的DNA的浓度分别控制在0.1mg/L和10ng/L。免疫PCR检测的灵敏度为0.1ng/L,比ELISA法检测的灵敏度高1.5×104倍。结论金磁微粒为载体的免疫PCR检测HIV-1 p24抗原是一种灵敏度较高的检测方法。

免疫磁分离-荧光PCR应用在肉类单增李斯特氏菌的检测

目的建立适用于肉类产品中单核增生李斯特氏菌的荧光PCR检测方法。方法根据单增李斯特氏菌溶血素基因hlyA,设计合成引物和荧光探针,结合免疫磁珠筛选,选择简便的DNA提取方法,建立适用于检测肉类制品中单增李斯特氏菌的荧光PCR方法。对该方法进行特异性、灵敏度及模拟样品检测效果的研究。结果对20株不同菌属的标准菌株和30株野生李斯特氏菌菌株,及混合菌液的检测,结果显示该方法具有良好的特异性。对染菌模拟样本的检测结果表明,经过24h增菌,该方法的检测低限为1cfu/g,整个流程只需27h。结论免疫磁分离荧光PCR方法为快速、简便和准确检测肉类制品中单增李斯氏菌提供了一个新的途径。

免疫PCR方法检测乳腺癌患者血清抗p53蛋白抗体

目的为乳腺癌诊断提供血清学新方法.方法免疫PCR方法检测血清抗p53蛋白抗体,酶免疫组化方法检测组织p53蛋白表达.结果乳腺癌患者血清抗p53蛋白抗体阳性率为39.5%,而非癌患者和正常人血清抗p53蛋白抗体均为阴性,乳腺癌患者血清中抗p53蛋白抗体显著高于非癌患者和正常人(P＜0.01).p53蛋白阳性表达的乳腺癌患者抗p53蛋白抗体阳性率为64.2%,明显高于p53蛋白阴性表达组,血清p53抗体测定与p53蛋白表达密切相关(P＜0.01).结论检测血清抗p53蛋白抗体是检测组织p53蛋白理想的替代工具抗p53蛋白抗体可以作为乳腺癌血清学诊断新标志,用于乳腺癌的普查和早期诊断.

免疫PCR方法在血清抗Sm抗体测定中的应用

目的 :将免疫PCR方法应用于血清抗Sm抗体测定中。方法 :采用SaHIgG DNA探针建立了血清抗Sm抗体免疫PCR检测方法。结果 :该法测定SLE患者血清抗Sm抗体的特异性强 ,敏感性是ELISA方法的 10 7倍。批内和批间变异系数分别为 2 3%～ 4 8%和 3 7%～ 6 9% ,而且与ELISA方法呈高度正相关。结论

免疫PCR法诊断梅毒螺旋体抗原和抗体的方法学研究

目的建立免疫PCR方法检测梅毒螺旋体抗原和梅毒螺旋体抗体两种方法学,并比较两种方法学的敏感性、特异性和重复性。方法选择2011年我院梅毒血清学ELISA法检测者1520例并梅毒分期;建立免疫PCR法检测梅毒螺旋体抗原和梅毒螺旋体抗体两种方法,然后对梅毒螺旋体血清学阳性标本10倍系列稀释,比较免疫PCR法敏感性;同时采用正常健康血清标本观察免疫PCR法特异性;最后采集梅毒阳性血液分装成两份标本,监测两种免疫PCR法试验批内和日间重复性。结果 1 520例患者中,梅毒患者136例。梅毒患者中女性占77.2%(105/136),孕妇占19.1%(26/136)。梅毒分期以一期梅毒感染为主,与其他期比较具有统计学意义(P<0.05)。IPCR-Ag法检测梅毒螺旋体抗原敏感性是ELISA法的104倍,TPPA和TRUST法的106。IPCR-Ab法检测梅毒螺旋体抗体敏感性是ELISA法的103倍,TPPA和TRUST法的105。两种免疫PCR法测检查正常健康人群梅毒螺旋体结果均为阴性。IPCR-Ab法试验批内CV为11.61%,日间CV为18.12%;IPCR-Ag法试验批内CV为18.61%,日间CV为22.24%,两者相比具有统计学意义(P<0.05)。结论免疫PCR法检测梅毒螺旋体具有高度的敏感性和特异性,但重复性较差。