用免疫电镜技术研究长叶车前花叶病毒株系的血清学关系

应用免疫吸附和免疫修饰电镜技术研究了长叶车前花叶病毒杭州株(RMvha)、油菜花叶病毒北京株(YMV15)、烟草花叶病毒上海株(TMVⅠ及TMVⅡ)、烟草花叶病毒浙江农科院番茄分离株(TMVno)等的血清学关系。以抗血清吸附的病毒量和病毒被抗血清修饰的强弱,确定各毒株间的血清学关系发现,RMVha与YMV15关系较近;TMVⅠ与TMVno有一定的血清学关系;伹RMVha、YMV15与TMVⅠ、TMVno之间的血清关系较远,其中以RMVha与TMVno关系最远。结果表明病毒被同源及异源抗血清吸附及修饰的差异可用以研究不同TMV、RMV间的血清关系。

马铃薯卷叶病毒的免疫吸附电镜(IBEM)快速诊断

本文应用免疫吸附电镜法,对马铃薯、洋酸浆和曼陀罗植株中的马铃薯叶病毒(PLRV)粒体进行了检侧,其结果为:马铃薯茎、叶、幼芽、休眠块茎在铜网上每标准面积(SA=1000μm^2)中的病毒数量分别为:71364/SA,55909/SA,2273/SA,909/SA,洋酸浆茎和叶中的病毒数量分别为:2273/SA,15455/SA,曼陀罗茎中为:3636/SA,同时,当马铃薯茎和叶汁液稀释到1:32和1:8时,仍能明显地检测出PLRV粒体,证明免疫吸附电镜法对检测马铃薯植株中PLRV是一种快速、灵敏、直接、可靠的方法。

侵染花椰菜的芜菁花叶病毒及RT-PCR扩增外壳蛋白基因研究

从杭州市郊区及本校附近菜园地表现严重花叶症状的花椰菜上分离到一种线状病毒，接种６科３１种鉴别寄主，能侵染５科２２种植物。病组织超薄切片可见风轮状内含体和片层聚集状内含体。感病的芥菜叶片，用０．５ｍｏｌ／Ｌ磷酸钾缓冲液（ｐＨ７．５）匀浆后汁液加４％ＰＥＧ－８０００沉淀３ｈ，５％～４０％甘油梯度离心纯化病毒，可获得较高的产量。提纯的病毒均为一弯曲的线状颗粒，长度７４０ｎｍ左右。病毒提纯液于２６４ｎｍ处有一吸收峰，为典型的核蛋白紫外吸收。ＴｕＭＶ－Ｈ分离株抗血清包被的铜网能大量吸附病毒颗粒。用特异的ＰＣＲ引物扩增其外壳蛋白基因，可得－０．９Ｋｂ的片段。

大麦黄花叶病毒部分粒子在相关抗血清修饰反应中的解体

在免疫电镜实验中,大麦黄花叶病毒(BaYMV)萧山分离物经其同源和日本分离物(BaYMV-J)、英国 W 株系(BaYMV-W)和联邦德国 So 株系(BaYMV-So)的抗血清修饰反应中,有些病毒粒子破坏而发生不同程度的解体。改变修饰反应条件,包括改变反应的时间、温度、抗血清工作浓度,用 IgG 代替完整抗血清.用提纯病毒液代替病叶浸出液以及在修饰前用戊二醛固定病毒粒子,均不能抑制和削弱对病毒粒子的破坏;而此病毒分离物对其血清学无关的英国 S 株系(BaYMV-S)抗血清则表现为稳定,从而进一步证实了我国 BaYMV 与日本BaYMV、英国 BaYMV-W 和联邦德国 BaYMV-So 之间有着紧密的血清学关系。病毒在抗血清中不稳定现象可作为确定大麦黄花叶病毒组或其它一些组群内部成员的血清学关系的一种有效方法。

草莓伪温和黄边病毒抗血清制备及血清学检测技术研究

将提纯的草莓伪温和黄边病毒（ＳｔｒａｗｂｅｒｒｙｐｓｅｕｄｏｍｉｌｄｙｅｌｌｏｗｅｄｇｅｖｉｒｕｓＳＰＭＹＥＶ）作抗原免疫家兔，获得效价较高的抗血清，经ＳＤＳ－对流免疫电泳测其效价为１：１２８．四点疫吸附固定法检测ＳＰＭＹＥＶ效果甚理想，可检测到微量病素，提纯病毒浓度低至０．０５μｇ／ｍｌ仍有效果．酶联免疫吸附测定法检出灵敏度也相当高，当病毒浓度为０．１μｇ／ｍｌ时及病叶汁液稀释至１０２４倍时，仍呈阳性反应．免疫电镜技术检视，ＳＰＭＹＥＶ抗血清能清晰地”捕获”同源病毒，并且有装饰作用，抗血清以稀释为１：５００时“捕获”病毒粒子最多．

感染大麦黄花叶病毒(BaYMV)的大麦细胞质内含体及细胞器病变的研究

超薄切片电镜观察表明,在感染大麦黄花叶病毒(BaYMV)的大麦(品种“早熟3号”)叶肉细胞中,液泡周围偶而可看到病毒颗粒束,在发病后期黄化或坏死的叶肉细胞中,可见到散布的病毒颗粒。在所有表现症状的病叶叶肉细胞,表皮细胞和木质部薄壁细胞中均可观察到风轮体、束状体、板状集结体以及膜状体等细胞质内含体,未见 卷简体和细胞核内含体。感病初期细胞中,细胞质丰富,核糖体数量增加,内质网肥大,随着病毒症状发喂,叶绿体、线粒体等细胞器逐渐肿大,外膜破裂直至解体。

我国一些地区发生的小麦土传病毒病的病原研究

我国浙江、江苏、四川等省发生的小麦土传病毒病,由禾谷多粘菌(Polymyxa graminis)传播,只感染小麦,感病植株幼叶表现为退绿到黄化的条斑,老叶表现为花叶和坏死。我们提纯各地分离物研究表明,病毒粒子呈线状,直径13～14nm,长度为200～1800nm,其中350～850nm的比例较高。病毒外壳由二种分子量分别约为30kd和27kd的结构蛋白组成。病毒粒子周围能均匀地“修饰”小麦梭条斑花叶病毒(WSSMV)抗血清和小麦黄花叶病毒(WYMV)抗血清,反应均很强烈。鉴于上述特性,认为本病害是由小麦棱条斑花叶病毒(WSSMV)引起的。

应用免疫电镜技术快速检测菜豆黄花叶病毒、马铃薯M病毒和燕麦花叶病毒

应用免疫吸附电流技术(ISEM)可有效地检测腐汁液中的菜豆黄花叶病毒(BYMV)、马铃薯M病毒(PVM)和燕麦花叶病毒(OMV)。BYMV,PVM和OMV三种抗血清的适宜工作浓度和对铜网的适宜包被时间均为1000倍和1小时,对同源病毒的适宜捕获时间分别为4℃下2、2和8小时。PVM和OMV的病汁液检测灵敏度均为稀释4000倍,而BYMV病汁液稀释16000倍时还能检测到少量病毒料子。ISEM捕获法和修饰法的结果表明,这三种病毒之间无血清学交叉反应。