玄参水提取物对高糖暴露条件下INS-1细胞AMPK的激活作用

目的研究玄参水提取物(AESN)对高糖(HG)条件下INS-1细胞腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)活性的影响。方法将INS-1细胞培养于HG培养基中,并给予不同浓度AESN共孵育处理;利用细胞计数试剂-8(CCK-8)法检测AESN干预对细胞增殖/活力和焦亡小体形成的影响,使用Western blotting法观察AESN对细胞内AMPK表达及磷酸化水平的影响;利用时间分辨-荧光共振能量转移(TR-FRET)实验检测AESN对AMPK激酶活性的影响。结果CCK-8检测结果显示同正常培养条件相比,HG暴露显著降低INS-1细胞增殖/活力并增加焦亡小体形成数量,Western blotting检测结果表明HG暴露可导致细胞内AMPK磷酸化水平下降;而AESN共孵育可呈浓度依赖性地增加INS-1细胞增殖/活力、抑制焦亡小体形成并激活AMPK。TR-FRET实验结果表明,AESN可浓度依赖性增加AMPK激酶活性。结论AESN对HG暴露条件下INS-1细胞AMPK具有激活作用。

丝胶通过PI3K/Akt信号通路对受损INS-1细胞糖酵解的调控作用

目的观察丝胶对链脲佐菌素(STZ)致损伤大鼠胰岛素瘤细胞(INS-1细胞)PI3K/Akt信号通路和糖酵解的调控作用。方法实验以体外培养的INS-1细胞为研究对象随机分为五组,正常对照组、模型组、丝胶组、Akt1抑制剂组、Akt1激动剂组。运用蛋白印迹和实时荧光定量PCR法检测各分组细胞的磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K),蛋白激酶B(Akt),磷酸果糖激酶-1(PFK1),6-磷酸果糖-2,6-二磷酸酶(PFKFB2)的蛋白及mRNA的表达情况。结果与正常对照组相比,模型组PI3K,p-Akt,PFK1,PFKFB2的蛋白表达显著下降(P<0.05);丝胶组与模型组相比PI3K,p-Akt,PFK1,PFKFB2的蛋白表达显著增高(P<0.05);Akt1抑制剂组与丝胶组相比,p-Akt,PFK1,PFKFB2的蛋白表达显著降低(P<0.05);Akt1激动剂组与丝胶组相比,p-Akt,PFK1,PFKFB2的蛋白呈现上升的趋势。各组INS-1细胞中PI3K,Akt,PFK1,PFKFB2 mRNA的变化趋势与蛋白一致。结论丝胶对STZ致损伤INS-1细胞发挥保护作用的机制可能是,靶向Akt1影响PI3K/Akt信号通路增强糖酵解。

丝胶靶向Akt1调控PI3K/Akt信号通路促进STZ致损伤INS-1细胞增殖

目的探讨丝胶是否通过靶向Akt1调控磷酸肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)信号通路促进链脲佐菌素(STZ)致损伤大鼠胰岛素瘤细胞(INS-1细胞)增殖。方法INS-1细胞随机分为4组:对照组(不予任何处理)、模型组(给予10 mmol/L STZ处理细胞)、丝胶组(给予10 mmol/L STZ+600μg/mL丝胶处理细胞)、抑制剂组(给予10 mmol/LSTZ+600μg/mL丝胶+0.3 mmol/L的Akt1抑制剂A-674563处理细胞)。药物作用时间均为24 h。CCK-8法检测各组INS-1细胞存活率。免疫蛋白印迹法(western blot)检测PI3K/Akt信号通路相关蛋白PI3K、p-Akt和增殖相关蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞核增殖相关抗原Ki67(Ki67)的表达情况。结果与对照组相比,模型组INS-1细胞存活率下降(P<0.05),PI3K、p-Akt1、PCNA和Ki67的蛋白表达显著下降(P<0.05);与模型组相比,丝胶组INS-1细胞存活率上升(P<0.05),PI3K、p-Akt1、PCNA和Ki67的蛋白表达显著增多(P<0.05);与丝胶组相比,抑制剂组INS-1细胞存活率下降(P<0.05),p-Akt1、PCNA和Ki67的蛋白表达显著下降(P<0.05)。结论丝胶具有促进STZ致损伤INS-1细胞增殖的作用,其作用机制与丝胶通过靶向Akt1调控PI3K/Akt信号通路有关。

桑叶多糖含药血清对体外高糖培养INS-1细胞氧化应激损伤的保护作用研究

采用含桑叶多糖(mulberry leaf polysaccharide,MLP)的大鼠血清干预处理体外高糖培养的INS-1细胞,分别测定含MLP血清对高糖培养INS-1细胞中胰岛素含量、氧化应激标志物含量、细胞形态、抗氧化酶活性的影响,结果表明,MLP可明显提高高糖培养INS-1细胞中胰岛素含量,有效降低8-OHdG和丙二醛(MDA)含量,细胞形态明显改善,细胞中抗氧化酶SOD、CAT和GPx的活性明显升高,ROS含量显著降低。采用酶联免疫吸附测定MLP对高糖培养INS-1细胞线粒体呼吸链酶活性的影响,结果表明,MLP可显著提高高糖培养INS-1细胞线粒体呼吸链ComplexⅠ-Ⅳ复合酶的活性。最后采用Hoechst 33342染色、JC-1染色和免疫荧光组化法检测MLP对高糖培养INS-1细胞凋亡的影响,结果表明,MLP可明显提高线粒体膜电位,减少细胞色素C(Cyt-C)在胞浆中的表达,抑制细胞凋亡。上述结果表明,MLP可能通过提高细胞中抗氧化酶含量,改善线粒体能量代谢来减少氧化应激导致的细胞凋亡。

丝胶对STZ致损伤的INS-1细胞的保护作用

目的 探讨丝胶对链脲佐菌素(STZ)致损伤大鼠胰岛素瘤细胞(INS-1细胞)的保护作用。方法 实验以体外培养的INS-1细胞为研究对象,随机分为5组:正常对照组(常规条件培养细胞)、模型组(培养基中含10mmol/L的STZ)、丝胶低、中、高浓度组(培养基中分别含10mmol/L的STZ,及150μg/mL、300μg/mL、600μg/mL的丝胶),每组细胞药物作用时间均为24h。蛋白印迹和实时荧光定量PCR法检测各组细胞BCL-2与P53蛋白及mRNA的表达情况。流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况。结果 与正常对照组相比,在模型组中,INS-1细胞中BCL-2蛋白和mRNA的表达显著减少,P53蛋白和mRNA的表达显著增加,早期凋亡率显著升高(P<0.05)。与模型组相比,丝胶各组INS-1细胞BCL-2蛋白与mRNA的表达均显著增多,P53的蛋白与mRNA的表达均显著下降,早期凋亡率显著下降(P<0.05);3个丝胶组两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 丝胶对STZ致损伤INS-1细胞发挥保护作用的机制与调控凋亡蛋白,抑制INS-1细胞凋亡有关。

不同浓度葡萄糖对大鼠INS-1细胞的影响研究

目的探讨不同浓度葡萄糖对大鼠胰岛INS-1细胞胰岛素释放量的影响。方法研究时间为2020年9月—2021年6月,将大鼠INS-1胰岛细胞分别培养在正常1640培养基和葡萄糖浓度分别为5.5、16.7、25、33、50 mmol/L的培养液中培养48 h,CCK8检测细胞活力、大鼠胰岛素检测试剂盒检测胰岛素释放量和DCFH-DA探针检测活性氧(ROS)的水平。结果不同浓度葡萄糖的细胞活力比较,差异无统计学意义(P>0.05),但是与对照组(1.047±0.101)比较,糖浓度为50 mmol/L时细胞活力下降(0.727±0.096),差异有统计学意义(P<0.05);随着糖浓度的增加,胰岛素释放量、胰岛素细胞内含量和胰岛素总量较对照组显著下降,糖浓度33 mmol/L时(0.207±0.008)、(0.224±0.014)、(0.451±0.079)ng/mL最低,糖浓度50 mmol/L时(0.315±0.011)、(0.374±0.011)、(0.660±0.109)ng/mL有升高趋势;葡萄糖浓度超过16.7 mM后,细胞内的活性氧水平逐渐升高,均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论不同浓度葡萄糖对大鼠胰岛INS-1细胞胰岛素释放量的降低程度不同,为高糖损伤模型的建立和寻找具有保护胰岛细胞功能的临床药物提供实验数据。

双核七配位K_4[In~Ⅲ(cydta)(H_2O)]_4·14H_2O配合物的合成与结构(英文)

采用X-射线衍射仪测定了配合物K4[In(cydta)(H2O)]4.14H2O(cydta=反式-1,2-环己二氨四乙酸)的结构,该晶体属于单斜晶系Fdd2空间群,晶体学数据为:a=1.4460(3)nm,b=3.5530(7)nm,c=1.6290(3)nm,β=90.21(3)°,V=8.369(3)nm3,Z=4,M=2228.93,Dc=1.769 gcm-3,μ=1.391 mm-1and F(000)=4464,R和wR值分别为0.0631和0.2786。共收集15331个独立衍射数据,其中14708[I>2.0σ()]为独立衍射点。配合物的分子由四个结构单元组成,每一结构单元[In(cydta)(H2O)]-铟离子七配位单帽变形三棱锥结构,其中心离子In与配体cydta中的两个N原子和四个O原子及一个水分子直接配位形成七配位结构.

改良的高效液相色谱法测定尿中1-羟基芘

改进并规范了尿中 1 羟基芘的碱水解 -高效液相色谱分析方法。尿样经碱水解、二氯甲烷提取后 ,用反相柱分离 ,荧光检测器检测。内标标准曲线法定量。标准曲线线性范围 10～ 50 0 μg L。尿样加标的检出限 (三倍噪声 )为 0 0 1ng ,定量限为 1 0 μg L尿。高、低两个浓度下的回收率分别为 99 5%和 94 0 % ;天内精密度为 5 8%和 6 2 % (RSD) ;天间精密度为 7 7%和 8 9% (RSD)。该方法可用于测定接触多环芳烃人群的尿中 1 羟基芘 ,具有快速简便。

番石榴酸对INS-1胰岛β细胞增殖、胰岛素合成与分泌的促进作用及其机制分析

目的考察番石榴酸（guavenoic acid，GA）对 INS-1胰岛β细胞增殖、细胞内胰岛素含量及分泌功能的影响，并探讨其可能的作用机制。方法培养 INS-1胰岛β细胞，给予GA（0.3、1、3、10、30 n·L^－1），并设空白对照组、溶媒对照组（0.1％ DMSO）、分泌模型组及阳性药组（150 nmol·L^－1格列苯脲含1‰DMSO），药物作用48 h。应用 MTT 法检测药物对 INS-1的影响。使用酸醇提取液提取细胞中胰岛素，用放射免疫法检测药物对 I 细胞增殖 NS-1细胞内胰岛素含量的影响。分别用5.6、16.7 mmol·L^－1葡萄糖干预细胞1 h建立基础胰岛素分泌模型（BIS）、高糖刺激胰岛素分泌模型（GSIS），用放射免疫法测定药物对 INS-1细胞胰岛素分泌的影响，结果以总蛋白量校正。荧光定量 PCR 法检测药物对INS-1细胞内胰岛素基因、PDX-1、MafA mRNA 表达的影响。结果与溶媒对照组比较，GA 能明显地促进 INS-1胰岛细胞的增殖（P ＜0.01）并能明显增加 INS-1细胞内胰岛素含量（P ＜0.01），0.3～30 nmol·L －1 GA 对 BIS 及 GSIS 均有明显促进作用（P ＜0.05或 P ＜0.01），0.3～30 nmol·L^－1 GA 明显地上调 Insulin mRNA 的相对表达（P ＜0.01）。3、30 nmol·L^－1 GA 明显地上调 PDX-1 mRNA 的相对表达（P ＜0.01）。3、30 nmol·L^－1 GA 能明显地上调 MafA mRNA 的相对表达（P ＜0.01）。结论GA 能促进 INS-1胰岛β细胞增殖；增加细胞内胰岛素含量与分泌量，可能与其上调 Insulin、PDX-1、MafA 基因表达有关。

芍药苷对STZ损伤的INS-1细胞的保护和修复作用

目的研究中药单体芍药苷对INS-1细胞的影响,及对链脲佐菌素(STZ)损伤的胰岛细胞的保护、修复作用,并初步探讨其保护机制。方法 INS-1细胞传代培养后,用四氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖活力,并测定细胞培养液中胰岛素浓度、丙二醛(MDA)浓度、总抗氧化能力(T-AOC)。结果芍药苷可促进INS-1细胞释放胰岛素。STZ损伤后,INS-1细胞活力降低;胰岛素分泌量减少;MDA含量明显升高;T-AOC下降。芍药苷保护组能不同程度改善STZ引起的上述指标的改变。结论芍药苷可促进INS-1细胞释放胰岛素,对STZ损伤的INS-1细胞有显著的保护作用,这种作用可能是通过提高INS-1细胞的抗氧化能力实现的。

不同葡萄糖浓度对INS-1细胞PPARδ表达的影响

目的研究不同葡萄糖浓度对大鼠INS-1细胞PPARδ表达的影响,以初步阐明PPARδ在胰岛细胞糖脂代谢关联中的作用。方法分别用含3、11、20mmol/L葡萄糖的RPMI1640培养基,培养INS-1细胞24h后,冻融法裂解细胞,检测INS-1细胞内的甘油三酯水平。提取RNA和核蛋白,RT-PCR半定量检测PPARδmRNA,Westernblot检测PPARδ蛋白表达。结果随着葡萄糖浓度的升高INS-1细胞内甘油三酯含量增高,而PPARδmRNA和蛋白的表达均明显降低。结论葡萄糖促进,INS-1细胞内甘油三酯沉积,而PPARδ的表达下降可能是高糖条件下胰岛细胞脂质沉积的重要原因。

丹酚酸B对间歇性高糖诱导的JNK活化和INS-1细胞凋亡的影响

目的观察丹酚酸B(Salvianolic acid B,Sal B)对间歇性高糖诱导的大鼠胰岛素瘤细胞(INS-1)c-Jun氨基末端激酶(JNK)活化和细胞凋亡的影响。方法 INS-1细胞与丹酚酸B预孵24 h后暴露于间歇性高糖(11.1 mmol·L^(-1)12 h,33.3 mmol·L^(-1)12 h)72 h。MTT法测定细胞活力,ELISA法测定葡萄糖刺激的胰岛素分泌能力,荧光探针DCFH-DA检测细胞内活性氧(ROS)水平,流式细胞术检测细胞凋亡水平,Western blot法检测胰十二指肠同源盒-1(PDX-1)蛋白表达和JNK活化水平。结果丹酚酸B可明显减轻间歇性高糖诱导的INS-1细胞损伤和凋亡(P<0.05,P<0.01),提高葡萄糖刺激的胰岛素分泌能力(P<0.05,P<0.01);与丹酚酸B预孵可明显降低细胞内ROS水平、抑制JNK活化,并提高PDX-1蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论丹酚酸B可有效减轻间歇性高糖诱导的INS-1细胞损伤和凋亡,提高胰岛素分泌水平,其机制可能与降低细胞内ROS水平、抑制JNK活化和上调PDX-1蛋白表达有关。

枸杞多糖通过抑制H_2O_2诱导的INS-1细胞凋亡促进胰岛素分泌

目的:探讨枸杞多糖对H2O2诱导胰岛INS-1细胞凋亡和胰岛素分泌功能的影响。方法:采用H2O2诱导INS-1细胞凋亡模型,用100 mg/L枸杞多糖处理INS-1细胞,MTT法检测细胞活力,放射免疫法检测胰岛素含量,流式细胞仪检测细胞凋亡,荧光定量PCR检测Bcl-2、Bax和Caspase-3的mRNA表达。结果 100 mg/L枸杞多糖能明显提高H2O2处理INS-1细胞的活力(P<0.01),促进细胞基础和葡萄糖刺激的胰岛素分泌(P<0.05,P<0.01),减少细胞凋亡(P<0.01),同时Bcl-2的表达明显升高(P<0.01),Bax和Caspase-3的表达明显降低(P<0.01,P<0.01)。结论:枸杞多糖可能通过促进Bcl-2的表达,抑制Bax和Caspase-3的表达,以降低H2O2诱导的INS-1凋亡,同时促进INS-1细胞的胰岛素分泌。

多氯联苯(PCB1254)诱导胰岛细胞凋亡的机制研究

目的 :本研究探讨多氯联苯(PCB1254)诱导体外培养胰岛β细胞株INS-1凋亡的可能机制。方法 :用不同浓度的PCB1254刺激INS-1细胞后,使用CCK-8法检测细胞活性,选择适当浓度的PCB1254进行INS-1细胞凋亡机制的研究;PCB1254(5μg/ml)刺激INS-1细胞后,倒置显微镜下观察细胞的形态学变化,并以流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测Cleaved Caspase-3、Caspase-3、Bim、Bcl-2、c-Fos、p-JNK、p-P38、p-ERK蛋白的表达;二氢乙啶(dihydroethidium,DHE)荧光探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;PCB1254诱导INS-1细胞凋亡后,使用ERK抑制剂PD98059进行干预,倒置显微镜下观察细胞凋亡情况。结果:随着浓度的增加,PCB1254对细胞活性的抑制逐渐增强,当浓度≥5μg/ml时,与对照组差异有统计学意义(P<0.01);倒置显微镜下观察PCB1254(5μg/ml)能引起INS-1细胞凋亡,凋亡细胞脱落,漂浮于培养基中;流式细胞术检测结果显示PCB1254能诱导INS-1细胞凋亡;Western blot检测凋亡细胞中凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、Bim表达上调,抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调,氧化应激相关蛋白c-Fos表达上调,ROS荧光增强;MAPK信号通路中p-ERK蛋白表达上调;ERK抑制剂PD98059干预后细胞凋亡无明显变化。结论:PCB1254可能通过氧化应激信号通路引起INS-1细胞的凋亡,此过程中伴有ERK信号通路的激活。

妊娠期糖尿病中患者miR-138-5p通过调控缺氧诱导因子1α保护β细胞功能

目的:探讨在妊娠期糖尿病(GDM)患者中miR-138-5p对胰岛β细胞功能的影响及其相关作用机制。方法:通过RT-qPCR对比15例GDM患者与15例的正常健康孕妇外周血中miR-138-5p的表达差异;miR-138-5p mimic及inhibitor分别转染入β细胞系INS-1细胞中,过表达或抑制其在该细胞中的表达水平,并通过RT-qPCR验证转染效率;利用MTT增殖实验、Annexin V-FITC凋亡实验及胰岛素释放实验分别检测miR-138-5p对INS-1细胞的增殖、凋亡和胰岛素释放能力的影响;通过miRNA靶基因预测软件Target Scan筛选miR-138-5p的目标靶基因,并利用双荧光素酶基因报告及Western blot实验进行验证;功能挽救实验证实miR-138-5p是否通过靶向调控其目标基因而发挥对INS-1细胞的增殖、凋亡及胰岛素释放能力影响;Western blot实验检测miR-138-5p在INS-1细胞中作用的分子信号通路。结果:与正常健康孕妇相比,GDM患者外周血中miR-138-5p的表达显著低表达;在INS-1细胞中转染miR-138-5p mimic及inhibitor后可显著促进或抑制miR-138-5p的表达;过表达miR-138-5p可明显促进INS-1细胞的增殖,抑制其发生凋亡并促进细胞对胰岛素的释放能力;而下调miR-138-5p的表达,可显著抑制INS-1细胞的增殖,促进其发生凋亡及抑制细胞的胰岛素释放能力;通过miRNA靶基因预测软件Target Scan筛选缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)为miR-138-5p的目标靶基因,双荧光素酶基因报告实验及Western blot实验提示miR-138-5p可抑制INS-1细胞中HIF-1α的表达;功能挽救实验证实miR-138-5p通过调控HIF-1α的表达,影响INS-1细胞的增殖、凋亡及胰岛素释放能力;Western blot实验明确miR-138-5p可能通过靶向调控HIF-1α的表达,影响PI3K/AKT信号通路中PI3K、AKT及其磷酸化后的p-PI3K、p-AKT蛋白而发挥对INS-1细胞的作用。结论:在GDM患者中,miR-138-5p可能通过靶向调控HIF-1α的表达,进而影响PI3K/AKT信号通路,促进β细胞的增殖、抑制其凋亡,并促进其胰岛素释放能力从而保护β细胞的功能。

胰岛β细胞株INS-1和MIN6有关糖毒性的比较研究

目的探讨INS-1和MIN6细胞株在有关糖毒性研究的不同表型。方法胰岛素瘤细胞株INS-1和MIN-6分别在含5和25mM糖浓度的无血浆培养基中孵育24h。MTT法测定细胞活性,细胞凋亡通过annexinV-PI双染,流式细胞仪检测分析。结果 INS-1细胞在高糖条件下细胞活性明显降低,细胞凋亡率、死亡率明显增加,而MIN6细胞在高糖环境下细胞活性增加,凋亡率下降,死亡率无明显变化。结论 MIN6细胞比INS-1细胞能耐受更高的糖毒性。

高糖对INS-1细胞损伤存在记忆效应

目的观察大鼠胰岛细胞对高糖损伤是否存在记忆效应,并对其机制进行初步探讨。方法以INS-1(大鼠胰岛瘤细胞株)细胞作为研究对象,观察INS-1细胞经历48 h持续高糖(33.3 mmol/L)刺激后,纠正高糖状态,以11.1 mmol/L糖浓度继续培养,检测细胞活力,凋亡相关基因(bax,caspase-3)的mRNA水平和活性氧(ROS)水平的变化。INS-1细胞处理组分为:对照组(11.1 mmol/L葡萄糖×7 d);高糖组(33.3 mmol/L葡萄糖×2 d);3 d记忆组(33.3 mmol/L葡萄糖×2 d+11.1mmol/L葡萄糖×3 d);5 d记忆组(33.3 mmol/L葡萄糖×2 d+11.1 mmol/L葡萄糖×5 d)。Real-Time PCR检测bax,cas-pase-3的mRNA水平,Dihydroethidium(DHE探针)检测ROS水平,MTT法测定细胞活力。结果高糖组细胞活力较对照组显著降低(P<0.001)。而ROS水平,bax,Caspase-3的mRNA水平较对照组显著增高(P<0.05)。在3 d记忆组及5 d记忆组,细胞活力较对照组显著降低(P<0.001),ROS水平,bax,Caspase-3的mRNA水平较对照组显著增高(P<0.05)。结论高糖对INS-1细胞的损伤存在记忆效应,主要表现为细胞活力的持续降低,促凋亡基因的持续高表达。ROS水平的持续升高可能与记忆效应产生有密切关系。

苦参碱对INS-1细胞胰岛素分泌的影响

目的观察苦参碱对大鼠胰岛素瘤细胞(INS-1)分泌胰岛素的作用及对链脲佐菌素(STZ)损伤大鼠INS-1细胞的保护和修复作用。方法实验分为5组:正常对照组,STZ组,苦参碱低、中、高3个浓度组。用四氮唑蓝(MTT)法测细胞活性、放免法测胰岛素分泌量、TBA比色法测丙二醛(MDA)含量和比色法测总抗氧化能力(T-AOC)。结果苦参碱可以增强INS-1细胞活性(P<0.05);刺激INS-1细胞分泌胰岛素(P<0.05);提高STZ损伤的INS-1细胞活性(P<0.05);促进STZ损伤的INS-1细胞胰岛素的分泌(P<0.05);降低STZ损伤的INS-1细胞MDA含量(P<0.05);升高STZ损伤的INS-1细胞的T-AOC(P<0.05)。结论苦参碱能够增强INS-1细胞活性,刺激其分泌胰岛素,减轻STZ对INS-1细胞的损伤作用,提高STZ损伤的INS-1细胞的抗氧化能力。

艾塞那肽对间歇性高糖环境下胰岛INS-1细胞的保护作用

目的评价间歇性高糖对胰岛β细胞的损害及艾塞那肽(Exenatide)的保护作用。方法取大鼠胰岛INS-1细胞分为5组;正常糖(5.5mmol/L)对照组、恒定性高糖(30mmol/L)组和恒定性高糖+Exenatide(100nmol/L)组按分组所述对细胞进行培养,间歇性高糖组和间歇性高糖+Exenatide组采用高糖与正常糖交替(每24h更替1次)培养细胞。培养7d后检测各组细胞内活性氧自由基(ROS)和黄嘌呤氧化酶(XOD)水平,同时检测细胞增殖和凋亡情况。结果与正常糖对照组比较,恒定性高糖组及间歇性高糖组细胞内ROS、XOD水平和细胞凋亡率明显增加(P<0.01),细胞增殖活性明显降低(P<0.01),尤以间歇性高糖组更为明显。恒定性高糖+Exenatide组的ROS、XOD水平和细胞凋亡率明显低于恒定性高糖组(P<0.05),而间歇性高糖+Exenatide组明显低于间歇性高糖组(P<0.01);恒定性高糖+Exenatide组和间歇性高糖+Exenatide组的细胞增殖活性与正常糖对照组无统计学差异。结论间歇性高糖和恒定性高糖均能增加大鼠INS-1细胞内氧化应激水平,从而促进细胞凋亡、抑制细胞增殖,尤以间歇性高糖更为明显;Ex-enatide可显著减轻高糖对细胞的损害。

小鼠PPARδ腺病毒载体的构建及其在INS-1细胞中的表达

目的构建含有小鼠过氧化物酶增殖激活受体δ(peroxisom e proliferate activated receptor delta,PPARδ)基因的重组腺病毒表达载体。方法通过KpnⅠ和EcoRⅤ双酶切,从pCDNA3.0-mPPARδ载体中得到含有小鼠PPARδ全长编码序列的片段,将mPPARδ与pAdtrack-CMV相连接并用Pm eⅠ线性化后,转化含有pAdeasy骨架质粒的细菌B J5183,在细菌内同源重组后得到pAd-mPPARδ质粒。pAd-mPPARδ经PacⅠ线性化后用L ipofectam ineTM2000转染HEK293细胞,包装得到含PPARδ基因的病毒重组子,将病毒重组子在HEK293细胞中扩增后,反复冻融得到滴度较高的含PPARδ的病毒液。将收集的病毒液感染INS-1细胞,绿色荧光观察GFP和W estern b lot检测PPARδ蛋白的表达。结果成功构建了含有小鼠PPARδ基因的重组腺病毒载体,病毒滴度为1.5×1010pfu/m。l重组腺病毒感染后可使INS-1细胞PPARδ蛋白表达明显增加。结论该重组腺病毒载体的构建为研究PPARδ基因在胰岛细胞中生物学功能提供了一定的工作基础。