南五味子二氯甲烷部位化学成分结构鉴定及对HepG2和INS-1细胞的影响

目的探讨南五味子二氯甲烷部位(SDP)对HepG2细胞胰岛素抵抗和INS-1细胞高糖损伤的影响。方法采用1×10^(-6) mol·L^(-1)胰岛素建立HepG2细胞胰岛素抵抗和30 mmol·L^(-1)葡萄糖建立INS-1细胞高糖损伤模型,并使用不同浓度的南五味子二氯甲烷部位进行干预。检测HepG2细胞中三酰甘油(TG)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、细胞内活性氧(ROS)、腺苷三磷酸水平(ATP)、葡萄糖水平;检测INS-1细胞中MDA、SOD、过氧化物歧化酶(GSH)、ROS、基础葡萄糖(BIS)和高糖(GSIS)水平;并采用UPLC-MS/MS法分析SDP中的化学成分。结果经胰岛素诱导48 h的HepG2细胞,模型组TG、MDA、ROS葡萄糖升高(P<0.01),SOD、ATP降低,经SDP干预后,TG、MDA、ROS均有所回调,SOD、ATP显著升高;经高糖诱导48 h的INS-1细胞,模型组MDA、ROS升高(P<0.01),SOD、GSH-Px、BIS、GSIS降低(P<0.01),SDP干预后MDA、ROS回调(P<0.01),SOD、GSH-Px、BIS、GSIS上升(P<0.01)。从SDP样品中共成功鉴定出1824个化学成分,其中134个木脂素类、283个酚酸类、283个香豆素等其他类化合物,而木脂素类化合物相对含量最高。结论SDP能改善HepG2细胞胰岛素抵抗和INS-1细胞高糖损伤,分析了SDP化学成分,为防治T2DM提供实验依据。

玄参水提取物对高糖暴露条件下INS-1细胞AMPK的激活作用

目的研究玄参水提取物(AESN)对高糖(HG)条件下INS-1细胞腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)活性的影响。方法将INS-1细胞培养于HG培养基中,并给予不同浓度AESN共孵育处理;利用细胞计数试剂-8(CCK-8)法检测AESN干预对细胞增殖/活力和焦亡小体形成的影响,使用Western blotting法观察AESN对细胞内AMPK表达及磷酸化水平的影响;利用时间分辨-荧光共振能量转移(TR-FRET)实验检测AESN对AMPK激酶活性的影响。结果CCK-8检测结果显示同正常培养条件相比,HG暴露显著降低INS-1细胞增殖/活力并增加焦亡小体形成数量,Western blotting检测结果表明HG暴露可导致细胞内AMPK磷酸化水平下降;而AESN共孵育可呈浓度依赖性地增加INS-1细胞增殖/活力、抑制焦亡小体形成并激活AMPK。TR-FRET实验结果表明,AESN可浓度依赖性增加AMPK激酶活性。结论AESN对HG暴露条件下INS-1细胞AMPK具有激活作用。

南五味子多糖对高糖损伤INS-1细胞及糖尿病小鼠的改善作用

目的结合体内外实验研究南五味子多糖(SSP)对高糖损伤大鼠胰岛细胞瘤细胞系INS-1细胞及糖尿病小鼠的影响,以期为防治糖尿病提供理论支持。方法SSP干预高糖损伤INS-1细胞,采用CCK8法检测各组细胞活力,ELISA法测定细胞上清液胰岛素含量,比色法检测SOD及GSH-Px活性与MDA含量,DCFH-DA荧光探针法检测ROS水平。建立糖尿病小鼠模型,随机分为NC组、Mod组、Met组、SSP-Low组、SSP-Hig组。给药21 d,记录小鼠体重变化。给药结束后,检测小鼠口服葡萄糖耐量、SOD活性和胰岛素水平以及胰腺组织病理变化。结果对于高糖损伤的INS-1细胞,SSP能够提高胰岛素分泌水平(P<0.01),使SOD及GSH-Px活性显著上升(P<0.01),MDA含量和ROS水平显著下降(P<0.01);对于糖尿病小鼠,SSP能够升高体重,改善糖耐量异常,使胰岛素水平和SOD活性增加(P<0.05),胰岛内细胞数量增多,改善胰岛形态。结论南五味子多糖对高糖损伤的INS-1细胞和糖尿病小鼠具有改善作用,值得进一步深入研究。

丝胶通过PI3K/Akt信号通路对受损INS-1细胞糖酵解的调控作用

目的观察丝胶对链脲佐菌素(STZ)致损伤大鼠胰岛素瘤细胞(INS-1细胞)PI3K/Akt信号通路和糖酵解的调控作用。方法实验以体外培养的INS-1细胞为研究对象随机分为五组,正常对照组、模型组、丝胶组、Akt1抑制剂组、Akt1激动剂组。运用蛋白印迹和实时荧光定量PCR法检测各分组细胞的磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K),蛋白激酶B(Akt),磷酸果糖激酶-1(PFK1),6-磷酸果糖-2,6-二磷酸酶(PFKFB2)的蛋白及mRNA的表达情况。结果与正常对照组相比,模型组PI3K,p-Akt,PFK1,PFKFB2的蛋白表达显著下降(P<0.05);丝胶组与模型组相比PI3K,p-Akt,PFK1,PFKFB2的蛋白表达显著增高(P<0.05);Akt1抑制剂组与丝胶组相比,p-Akt,PFK1,PFKFB2的蛋白表达显著降低(P<0.05);Akt1激动剂组与丝胶组相比,p-Akt,PFK1,PFKFB2的蛋白呈现上升的趋势。各组INS-1细胞中PI3K,Akt,PFK1,PFKFB2 mRNA的变化趋势与蛋白一致。结论丝胶对STZ致损伤INS-1细胞发挥保护作用的机制可能是,靶向Akt1影响PI3K/Akt信号通路增强糖酵解。

丝胶靶向Akt1调控PI3K/Akt信号通路促进STZ致损伤INS-1细胞增殖

目的探讨丝胶是否通过靶向Akt1调控磷酸肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)信号通路促进链脲佐菌素(STZ)致损伤大鼠胰岛素瘤细胞(INS-1细胞)增殖。方法INS-1细胞随机分为4组:对照组(不予任何处理)、模型组(给予10 mmol/L STZ处理细胞)、丝胶组(给予10 mmol/L STZ+600μg/mL丝胶处理细胞)、抑制剂组(给予10 mmol/LSTZ+600μg/mL丝胶+0.3 mmol/L的Akt1抑制剂A-674563处理细胞)。药物作用时间均为24 h。CCK-8法检测各组INS-1细胞存活率。免疫蛋白印迹法(western blot)检测PI3K/Akt信号通路相关蛋白PI3K、p-Akt和增殖相关蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞核增殖相关抗原Ki67(Ki67)的表达情况。结果与对照组相比,模型组INS-1细胞存活率下降(P<0.05),PI3K、p-Akt1、PCNA和Ki67的蛋白表达显著下降(P<0.05);与模型组相比,丝胶组INS-1细胞存活率上升(P<0.05),PI3K、p-Akt1、PCNA和Ki67的蛋白表达显著增多(P<0.05);与丝胶组相比,抑制剂组INS-1细胞存活率下降(P<0.05),p-Akt1、PCNA和Ki67的蛋白表达显著下降(P<0.05)。结论丝胶具有促进STZ致损伤INS-1细胞增殖的作用,其作用机制与丝胶通过靶向Akt1调控PI3K/Akt信号通路有关。

双核七配位K_4[In~Ⅲ(cydta)(H_2O)]_4·14H_2O配合物的合成与结构(英文)

采用X-射线衍射仪测定了配合物K4[In(cydta)(H2O)]4.14H2O(cydta=反式-1,2-环己二氨四乙酸)的结构,该晶体属于单斜晶系Fdd2空间群,晶体学数据为:a=1.4460(3)nm,b=3.5530(7)nm,c=1.6290(3)nm,β=90.21(3)°,V=8.369(3)nm3,Z=4,M=2228.93,Dc=1.769 gcm-3,μ=1.391 mm-1and F(000)=4464,R和wR值分别为0.0631和0.2786。共收集15331个独立衍射数据,其中14708[I>2.0σ()]为独立衍射点。配合物的分子由四个结构单元组成,每一结构单元[In(cydta)(H2O)]-铟离子七配位单帽变形三棱锥结构,其中心离子In与配体cydta中的两个N原子和四个O原子及一个水分子直接配位形成七配位结构.

改良的高效液相色谱法测定尿中1-羟基芘

改进并规范了尿中 1 羟基芘的碱水解 -高效液相色谱分析方法。尿样经碱水解、二氯甲烷提取后 ,用反相柱分离 ,荧光检测器检测。内标标准曲线法定量。标准曲线线性范围 10～ 50 0 μg L。尿样加标的检出限 (三倍噪声 )为 0 0 1ng ,定量限为 1 0 μg L尿。高、低两个浓度下的回收率分别为 99 5%和 94 0 % ;天内精密度为 5 8%和 6 2 % (RSD) ;天间精密度为 7 7%和 8 9% (RSD)。该方法可用于测定接触多环芳烃人群的尿中 1 羟基芘 ,具有快速简便。

番石榴酸对INS-1胰岛β细胞增殖、胰岛素合成与分泌的促进作用及其机制分析

目的考察番石榴酸（guavenoic acid，GA）对 INS-1胰岛β细胞增殖、细胞内胰岛素含量及分泌功能的影响，并探讨其可能的作用机制。方法培养 INS-1胰岛β细胞，给予GA（0.3、1、3、10、30 n·L^－1），并设空白对照组、溶媒对照组（0.1％ DMSO）、分泌模型组及阳性药组（150 nmol·L^－1格列苯脲含1‰DMSO），药物作用48 h。应用 MTT 法检测药物对 INS-1的影响。使用酸醇提取液提取细胞中胰岛素，用放射免疫法检测药物对 I 细胞增殖 NS-1细胞内胰岛素含量的影响。分别用5.6、16.7 mmol·L^－1葡萄糖干预细胞1 h建立基础胰岛素分泌模型（BIS）、高糖刺激胰岛素分泌模型（GSIS），用放射免疫法测定药物对 INS-1细胞胰岛素分泌的影响，结果以总蛋白量校正。荧光定量 PCR 法检测药物对INS-1细胞内胰岛素基因、PDX-1、MafA mRNA 表达的影响。结果与溶媒对照组比较，GA 能明显地促进 INS-1胰岛细胞的增殖（P ＜0.01）并能明显增加 INS-1细胞内胰岛素含量（P ＜0.01），0.3～30 nmol·L －1 GA 对 BIS 及 GSIS 均有明显促进作用（P ＜0.05或 P ＜0.01），0.3～30 nmol·L^－1 GA 明显地上调 Insulin mRNA 的相对表达（P ＜0.01）。3、30 nmol·L^－1 GA 明显地上调 PDX-1 mRNA 的相对表达（P ＜0.01）。3、30 nmol·L^－1 GA 能明显地上调 MafA mRNA 的相对表达（P ＜0.01）。结论GA 能促进 INS-1胰岛β细胞增殖；增加细胞内胰岛素含量与分泌量，可能与其上调 Insulin、PDX-1、MafA 基因表达有关。

芍药苷对STZ损伤的INS-1细胞的保护和修复作用

目的研究中药单体芍药苷对INS-1细胞的影响,及对链脲佐菌素(STZ)损伤的胰岛细胞的保护、修复作用,并初步探讨其保护机制。方法 INS-1细胞传代培养后,用四氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖活力,并测定细胞培养液中胰岛素浓度、丙二醛(MDA)浓度、总抗氧化能力(T-AOC)。结果芍药苷可促进INS-1细胞释放胰岛素。STZ损伤后,INS-1细胞活力降低;胰岛素分泌量减少;MDA含量明显升高;T-AOC下降。芍药苷保护组能不同程度改善STZ引起的上述指标的改变。结论芍药苷可促进INS-1细胞释放胰岛素,对STZ损伤的INS-1细胞有显著的保护作用,这种作用可能是通过提高INS-1细胞的抗氧化能力实现的。

丹酚酸B对间歇性高糖诱导的JNK活化和INS-1细胞凋亡的影响

目的观察丹酚酸B(Salvianolic acid B,Sal B)对间歇性高糖诱导的大鼠胰岛素瘤细胞(INS-1)c-Jun氨基末端激酶(JNK)活化和细胞凋亡的影响。方法 INS-1细胞与丹酚酸B预孵24 h后暴露于间歇性高糖(11.1 mmol·L^(-1)12 h,33.3 mmol·L^(-1)12 h)72 h。MTT法测定细胞活力,ELISA法测定葡萄糖刺激的胰岛素分泌能力,荧光探针DCFH-DA检测细胞内活性氧(ROS)水平,流式细胞术检测细胞凋亡水平,Western blot法检测胰十二指肠同源盒-1(PDX-1)蛋白表达和JNK活化水平。结果丹酚酸B可明显减轻间歇性高糖诱导的INS-1细胞损伤和凋亡(P<0.05,P<0.01),提高葡萄糖刺激的胰岛素分泌能力(P<0.05,P<0.01);与丹酚酸B预孵可明显降低细胞内ROS水平、抑制JNK活化,并提高PDX-1蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论丹酚酸B可有效减轻间歇性高糖诱导的INS-1细胞损伤和凋亡,提高胰岛素分泌水平,其机制可能与降低细胞内ROS水平、抑制JNK活化和上调PDX-1蛋白表达有关。

不同葡萄糖浓度对INS-1细胞PPARδ表达的影响

目的研究不同葡萄糖浓度对大鼠INS-1细胞PPARδ表达的影响,以初步阐明PPARδ在胰岛细胞糖脂代谢关联中的作用。方法分别用含3、11、20mmol/L葡萄糖的RPMI1640培养基,培养INS-1细胞24h后,冻融法裂解细胞,检测INS-1细胞内的甘油三酯水平。提取RNA和核蛋白,RT-PCR半定量检测PPARδmRNA,Westernblot检测PPARδ蛋白表达。结果随着葡萄糖浓度的升高INS-1细胞内甘油三酯含量增高,而PPARδmRNA和蛋白的表达均明显降低。结论葡萄糖促进,INS-1细胞内甘油三酯沉积,而PPARδ的表达下降可能是高糖条件下胰岛细胞脂质沉积的重要原因。

枸杞多糖通过抑制H_2O_2诱导的INS-1细胞凋亡促进胰岛素分泌

目的:探讨枸杞多糖对H2O2诱导胰岛INS-1细胞凋亡和胰岛素分泌功能的影响。方法:采用H2O2诱导INS-1细胞凋亡模型,用100 mg/L枸杞多糖处理INS-1细胞,MTT法检测细胞活力,放射免疫法检测胰岛素含量,流式细胞仪检测细胞凋亡,荧光定量PCR检测Bcl-2、Bax和Caspase-3的mRNA表达。结果 100 mg/L枸杞多糖能明显提高H2O2处理INS-1细胞的活力(P<0.01),促进细胞基础和葡萄糖刺激的胰岛素分泌(P<0.05,P<0.01),减少细胞凋亡(P<0.01),同时Bcl-2的表达明显升高(P<0.01),Bax和Caspase-3的表达明显降低(P<0.01,P<0.01)。结论:枸杞多糖可能通过促进Bcl-2的表达,抑制Bax和Caspase-3的表达,以降低H2O2诱导的INS-1凋亡,同时促进INS-1细胞的胰岛素分泌。

多氯联苯(PCB1254)诱导胰岛细胞凋亡的机制研究

目的 :本研究探讨多氯联苯(PCB1254)诱导体外培养胰岛β细胞株INS-1凋亡的可能机制。方法 :用不同浓度的PCB1254刺激INS-1细胞后,使用CCK-8法检测细胞活性,选择适当浓度的PCB1254进行INS-1细胞凋亡机制的研究;PCB1254(5μg/ml)刺激INS-1细胞后,倒置显微镜下观察细胞的形态学变化,并以流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测Cleaved Caspase-3、Caspase-3、Bim、Bcl-2、c-Fos、p-JNK、p-P38、p-ERK蛋白的表达;二氢乙啶(dihydroethidium,DHE)荧光探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;PCB1254诱导INS-1细胞凋亡后,使用ERK抑制剂PD98059进行干预,倒置显微镜下观察细胞凋亡情况。结果:随着浓度的增加,PCB1254对细胞活性的抑制逐渐增强,当浓度≥5μg/ml时,与对照组差异有统计学意义(P<0.01);倒置显微镜下观察PCB1254(5μg/ml)能引起INS-1细胞凋亡,凋亡细胞脱落,漂浮于培养基中;流式细胞术检测结果显示PCB1254能诱导INS-1细胞凋亡;Western blot检测凋亡细胞中凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、Bim表达上调,抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调,氧化应激相关蛋白c-Fos表达上调,ROS荧光增强;MAPK信号通路中p-ERK蛋白表达上调;ERK抑制剂PD98059干预后细胞凋亡无明显变化。结论:PCB1254可能通过氧化应激信号通路引起INS-1细胞的凋亡,此过程中伴有ERK信号通路的激活。

妊娠期糖尿病中患者miR-138-5p通过调控缺氧诱导因子1α保护β细胞功能

目的:探讨在妊娠期糖尿病(GDM)患者中miR-138-5p对胰岛β细胞功能的影响及其相关作用机制。方法:通过RT-qPCR对比15例GDM患者与15例的正常健康孕妇外周血中miR-138-5p的表达差异;miR-138-5p mimic及inhibitor分别转染入β细胞系INS-1细胞中,过表达或抑制其在该细胞中的表达水平,并通过RT-qPCR验证转染效率;利用MTT增殖实验、Annexin V-FITC凋亡实验及胰岛素释放实验分别检测miR-138-5p对INS-1细胞的增殖、凋亡和胰岛素释放能力的影响;通过miRNA靶基因预测软件Target Scan筛选miR-138-5p的目标靶基因,并利用双荧光素酶基因报告及Western blot实验进行验证;功能挽救实验证实miR-138-5p是否通过靶向调控其目标基因而发挥对INS-1细胞的增殖、凋亡及胰岛素释放能力影响;Western blot实验检测miR-138-5p在INS-1细胞中作用的分子信号通路。结果:与正常健康孕妇相比,GDM患者外周血中miR-138-5p的表达显著低表达;在INS-1细胞中转染miR-138-5p mimic及inhibitor后可显著促进或抑制miR-138-5p的表达;过表达miR-138-5p可明显促进INS-1细胞的增殖,抑制其发生凋亡并促进细胞对胰岛素的释放能力;而下调miR-138-5p的表达,可显著抑制INS-1细胞的增殖,促进其发生凋亡及抑制细胞的胰岛素释放能力;通过miRNA靶基因预测软件Target Scan筛选缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)为miR-138-5p的目标靶基因,双荧光素酶基因报告实验及Western blot实验提示miR-138-5p可抑制INS-1细胞中HIF-1α的表达;功能挽救实验证实miR-138-5p通过调控HIF-1α的表达,影响INS-1细胞的增殖、凋亡及胰岛素释放能力;Western blot实验明确miR-138-5p可能通过靶向调控HIF-1α的表达,影响PI3K/AKT信号通路中PI3K、AKT及其磷酸化后的p-PI3K、p-AKT蛋白而发挥对INS-1细胞的作用。结论:在GDM患者中,miR-138-5p可能通过靶向调控HIF-1α的表达,进而影响PI3K/AKT信号通路,促进β细胞的增殖、抑制其凋亡,并促进其胰岛素释放能力从而保护β细胞的功能。

胰岛β细胞株INS-1和MIN6有关糖毒性的比较研究

目的探讨INS-1和MIN6细胞株在有关糖毒性研究的不同表型。方法胰岛素瘤细胞株INS-1和MIN-6分别在含5和25mM糖浓度的无血浆培养基中孵育24h。MTT法测定细胞活性,细胞凋亡通过annexinV-PI双染,流式细胞仪检测分析。结果 INS-1细胞在高糖条件下细胞活性明显降低,细胞凋亡率、死亡率明显增加,而MIN6细胞在高糖环境下细胞活性增加,凋亡率下降,死亡率无明显变化。结论 MIN6细胞比INS-1细胞能耐受更高的糖毒性。

高糖对INS-1细胞损伤存在记忆效应

目的观察大鼠胰岛细胞对高糖损伤是否存在记忆效应,并对其机制进行初步探讨。方法以INS-1(大鼠胰岛瘤细胞株)细胞作为研究对象,观察INS-1细胞经历48 h持续高糖(33.3 mmol/L)刺激后,纠正高糖状态,以11.1 mmol/L糖浓度继续培养,检测细胞活力,凋亡相关基因(bax,caspase-3)的mRNA水平和活性氧(ROS)水平的变化。INS-1细胞处理组分为:对照组(11.1 mmol/L葡萄糖×7 d);高糖组(33.3 mmol/L葡萄糖×2 d);3 d记忆组(33.3 mmol/L葡萄糖×2 d+11.1mmol/L葡萄糖×3 d);5 d记忆组(33.3 mmol/L葡萄糖×2 d+11.1 mmol/L葡萄糖×5 d)。Real-Time PCR检测bax,cas-pase-3的mRNA水平,Dihydroethidium(DHE探针)检测ROS水平,MTT法测定细胞活力。结果高糖组细胞活力较对照组显著降低(P<0.001)。而ROS水平,bax,Caspase-3的mRNA水平较对照组显著增高(P<0.05)。在3 d记忆组及5 d记忆组,细胞活力较对照组显著降低(P<0.001),ROS水平,bax,Caspase-3的mRNA水平较对照组显著增高(P<0.05)。结论高糖对INS-1细胞的损伤存在记忆效应,主要表现为细胞活力的持续降低,促凋亡基因的持续高表达。ROS水平的持续升高可能与记忆效应产生有密切关系。

苦参碱对INS-1细胞胰岛素分泌的影响

目的观察苦参碱对大鼠胰岛素瘤细胞(INS-1)分泌胰岛素的作用及对链脲佐菌素(STZ)损伤大鼠INS-1细胞的保护和修复作用。方法实验分为5组:正常对照组,STZ组,苦参碱低、中、高3个浓度组。用四氮唑蓝(MTT)法测细胞活性、放免法测胰岛素分泌量、TBA比色法测丙二醛(MDA)含量和比色法测总抗氧化能力(T-AOC)。结果苦参碱可以增强INS-1细胞活性(P<0.05);刺激INS-1细胞分泌胰岛素(P<0.05);提高STZ损伤的INS-1细胞活性(P<0.05);促进STZ损伤的INS-1细胞胰岛素的分泌(P<0.05);降低STZ损伤的INS-1细胞MDA含量(P<0.05);升高STZ损伤的INS-1细胞的T-AOC(P<0.05)。结论苦参碱能够增强INS-1细胞活性,刺激其分泌胰岛素,减轻STZ对INS-1细胞的损伤作用,提高STZ损伤的INS-1细胞的抗氧化能力。

艾塞那肽对间歇性高糖环境下胰岛INS-1细胞的保护作用

目的评价间歇性高糖对胰岛β细胞的损害及艾塞那肽(Exenatide)的保护作用。方法取大鼠胰岛INS-1细胞分为5组;正常糖(5.5mmol/L)对照组、恒定性高糖(30mmol/L)组和恒定性高糖+Exenatide(100nmol/L)组按分组所述对细胞进行培养,间歇性高糖组和间歇性高糖+Exenatide组采用高糖与正常糖交替(每24h更替1次)培养细胞。培养7d后检测各组细胞内活性氧自由基(ROS)和黄嘌呤氧化酶(XOD)水平,同时检测细胞增殖和凋亡情况。结果与正常糖对照组比较,恒定性高糖组及间歇性高糖组细胞内ROS、XOD水平和细胞凋亡率明显增加(P<0.01),细胞增殖活性明显降低(P<0.01),尤以间歇性高糖组更为明显。恒定性高糖+Exenatide组的ROS、XOD水平和细胞凋亡率明显低于恒定性高糖组(P<0.05),而间歇性高糖+Exenatide组明显低于间歇性高糖组(P<0.01);恒定性高糖+Exenatide组和间歇性高糖+Exenatide组的细胞增殖活性与正常糖对照组无统计学差异。结论间歇性高糖和恒定性高糖均能增加大鼠INS-1细胞内氧化应激水平,从而促进细胞凋亡、抑制细胞增殖,尤以间歇性高糖更为明显;Ex-enatide可显著减轻高糖对细胞的损害。

二至丸对H2O2诱导的INS-1胰岛β细胞氧化应激损伤的影响

目的探讨二至丸对H2O2诱导的INS-1胰岛β细胞氧化应激损伤的影响。方法采用H2O2(终浓度500μmol·L^-1)诱导INS-1细胞建立氧化损伤模型,并以不同浓度二至丸(10、50、250μg·mL^-1)进行干预。采用CCK-8法检测细胞活力;ELISA法测定细胞胰岛素分泌量;DCFH-DA荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS)水平;比色法检测细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及丙二醛(MDA)含量;Western Blot法测定细胞内过氧化氢酶(CAT)蛋白表达。结果二至丸在浓度为0.5~500μg·mL^-1时对INS-1细胞增殖活力无明显抑制作用。与空白对照组比较,模型组细胞在基础葡萄糖(BIS)/高糖(GSIS)状态下的胰岛素分泌量、SOD、GSH-Px含量及CAT蛋白表达水平显著降低(P<0.01),ROS、MDA含量显著升高(P<0.01)。与模型组比较,二至丸中、高剂量组(50、250μg·mL^-1)可显著促进H2O2诱导氧化损伤INS-1细胞BIS/GSIS状态下的胰岛素分泌量(P<0.05,P<0.01),提高SOD、GSH-Px含量及CAT蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01),降低MDA含量(P<0.05,P<0.01);二至丸各剂量组均可显著降低氧化损伤INS-1细胞内的ROS水平(P<0.01)。结论二至丸能够改善H2O2诱导的INS-1胰岛β细胞氧化应激损伤及保护其细胞功能,其作用机制可能与抑制细胞内ROS生成、提高抗氧化酶活性及其蛋白表达水平有关。

小鼠PPARδ腺病毒载体的构建及其在INS-1细胞中的表达

目的构建含有小鼠过氧化物酶增殖激活受体δ(peroxisom e proliferate activated receptor delta,PPARδ)基因的重组腺病毒表达载体。方法通过KpnⅠ和EcoRⅤ双酶切,从pCDNA3.0-mPPARδ载体中得到含有小鼠PPARδ全长编码序列的片段,将mPPARδ与pAdtrack-CMV相连接并用Pm eⅠ线性化后,转化含有pAdeasy骨架质粒的细菌B J5183,在细菌内同源重组后得到pAd-mPPARδ质粒。pAd-mPPARδ经PacⅠ线性化后用L ipofectam ineTM2000转染HEK293细胞,包装得到含PPARδ基因的病毒重组子,将病毒重组子在HEK293细胞中扩增后,反复冻融得到滴度较高的含PPARδ的病毒液。将收集的病毒液感染INS-1细胞,绿色荧光观察GFP和W estern b lot检测PPARδ蛋白的表达。结果成功构建了含有小鼠PPARδ基因的重组腺病毒载体,病毒滴度为1.5×1010pfu/m。l重组腺病毒感染后可使INS-1细胞PPARδ蛋白表达明显增加。结论该重组腺病毒载体的构建为研究PPARδ基因在胰岛细胞中生物学功能提供了一定的工作基础。