猪支原体肺炎灭活疫苗的临床应用对比研究

为了评估5种市售的猪支原体肺炎(MPS)灭活疫苗的临床免疫效果,试验将规模猪场300头3日龄体重接近的仔猪随机分为5个免疫接种疫苗组[以猪肺炎支原体(Mhp)J株为疫苗株的猪支原体肺炎灭活苗A组,以P-5722-3株为疫苗株的猪支原体肺炎灭活苗B组,以P-5722-3株为疫苗株的猪支原体肺炎灭活苗C组,以SY株为疫苗株的猪支原体肺炎灭活苗D组,以NJ株为疫苗株的猪支原体肺炎灭活苗E组]和1个对照组,所有猪只于3,30,90,120,150日龄采血,175日龄解剖观察测定肺脏病变情况并进行Mhp抗原检测;测定猪群的体重、平均日增重、Mhp血清抗体水平、肺脏病变评分和肺组织Mhp阳性率,评价5种MPS灭活疫苗的临床免疫效果。结果表明:各疫苗组出栏重和平均日增重均较对照组有提高,其中3~27日龄仔猪阶段,D组平均日增重显著高于对照组(P<0.05);疫苗组较对照组肺脏病变程度减轻,降低幅度为8.3%~38.8%,其中D组降低幅度最大。各疫苗组之间Mhp阳性感染率差异不显著(P>0.05),A、C、D组猪只Mhp阳性感染率低于对照组,D组最低(为68.0%);3日龄开始,各组试验猪Mhp抗体水平呈下降趋势,至120日龄时降至最低。150日龄时,除D组Mhp抗体阳性率为0外,其他各组均出现Mhp抗体转阳的情况。说明5种疫苗对防止猪群感染Mhp或减轻症状具有不同程度的效果,其中D组MPS灭活苗(SY株)免疫效果更好,能显著提高仔猪的生长性能,减轻肺脏损伤。

猪支原体肺炎研究进展

猪支原体肺炎是猪肺炎支原体所引发的一种以气喘为主要症状,以肺部对称性肉变为主要病理变化的慢性接触性呼吸道传染病,在世界各地普遍存在,严重危害养猪业的健康发展。随着对猪肺炎支原体的深入研究,发现其单一感染致死率虽低,但是易引发其他病毒或细菌等病原的续发或并发感染,导致猪呼吸道疾病综合征,使得疫情变得更为复杂,增加猪病诊断与防控的难度,造成巨大的经济损失。论文根据猪肺炎支原体的最新研究进展,从病原学、流行病学特点、主要抗原蛋白的研究、诊断、疫苗研制、防控措施等六个方面做一综述,从而为猪肺炎支原体的进一步研究及该病的防控提供新思路。

不同猪支原体肺炎活疫苗菌株P46和P97基因序列差异性分析

对我国用于生产的3种猪支原体肺炎活疫苗菌株(168株、RM48株、Z株)进行P46和P97R1R2基因序列分析,考察其保守性和差异。提取来源于四家猪支原体肺炎活疫苗生产企业的疫苗株基因组DNA,以其为模板进行PCR扩增、测序;利用DNAStar序列分析软件对测序结果和国际标准株J株、232株、7448株、7422株一起进行比对,分析3种疫苗菌株和4个标准株之间核苷酸及氨基酸差异。结果发现,疫苗株Z株、RM48株、168株的P46基因序列相似性为100%,与J株、232株相似性为99.1%,与7422株、7448株相似性为98.9%。疫苗株RM48株和Z株的P97R1R2基因序列相似性为100%;而与疫苗株168株相似性为97.5%;三个疫苗株与J株、232株、7448株、7422株的P97R1R2基因相似性仅为90.1%~93.6%,差异主要发生在R1区重复序列的次数上。本研究为临床猪支原体肺炎活疫苗菌株的检测及不同菌株之间的差异鉴定研究奠定了基础。

几种佐剂对肌肉注射猪支原体肺炎活疫苗免疫刺激能力的增强作用研究

为增强现有猪支原体肺炎活疫苗的免疫刺激能力以实现肌肉注射免疫,向现有活疫苗中添加几种不同佐剂,考察其经肌肉免疫后机体的免疫应答情况。结果表明,免疫刺激复合物基质佐剂和左旋咪唑+壳聚糖混合佐剂能有效激发细胞免疫应答和体液免疫应答;左旋咪唑+黄芪多糖混合佐剂能增强疫苗的细胞免疫刺激能力,而对体液免疫无作用;皂角素佐剂未显示明显的免疫增强效果。本试验结果为肌肉注射猪支原体肺炎活疫苗的开发奠定了数据基础。

免疫刺激复合物基质为佐剂的猪支原体肺炎活疫苗肌肉注射免疫效果评价

试验旨在探讨免疫刺激复合物基质(ISCOM-基质)作为猪支原体肺炎168株活疫苗佐剂使用的可行性,并考察其配合疫苗肌肉注射时的免疫效力和攻毒保护效力。首先以Quil A、胆固醇和磷脂为原料,采用透析法制备ISCOM-基质,然后将制备好的ISCOM-基质与活疫苗混合孵育,检验其对活疫苗的毒性。于体外用ISCOM-matrix直接刺激或与刀豆蛋白共同刺激淋巴细胞,观察细胞的增殖应答情况。而后将添加ISCOM-matrix佐剂的猪支原体肺炎活疫苗肌肉注射免疫动物,检测血清抗体水平及淋巴细胞增殖应答水平,于免疫后8周攻毒,评价攻毒保护效力。结果表明,所制备的ISCOM-基质不影响活疫苗的活力,并且在体外可直接或协同刀豆蛋白刺激淋巴细胞产生明显的增殖反应,最低起效浓度为0.01 ng/ml;当作为佐剂与活疫苗配合肌肉注射免疫时,可以显著诱导动物对疫苗抗原的细胞免疫应答,体液免疫应答亦有一定程度增强。用肺炎支原体强毒攻毒后25 d剖检,免疫组病变明显较攻毒对照组减轻,显示出较好的攻毒保护效果。

猪支原体肺炎免疫试验

用无支原体肺炎病猪场的哺乳仔猪 1 1窝共计 1 0 7头 ,分为 4组 ,1组 2 6头猪 ,按疫苗生产厂的免疫方法 ,于 1 5日龄胸腔注射弱毒疫苗 2头份 ;2组 2 6头猪 ,在 1 5日龄时胸腔注射弱毒疫苗 1头份 ,2周后肌肉注射灭活疫苗 1头份 ;3组2 7头猪 ,按疫苗生产厂免疫方法于 1 5日龄和 30日龄肌肉注射灭活疫苗各 1头份 ;4组 2 8头 ,不注射猪支原体肺炎疫苗以作对照。在接种疫苗后 ,分别于 1 2 0天、1 80天、 2 40天进行同居感染和攻毒试验。经临床检查 ,X线胸透结果表明 ,第 2组在 1 5日龄首免弱毒活苗 ,2周后二免灭活苗的免疫保护率最高 ,2 40天的免疫保护为 91 7% ,比 1组和 3组两种常规免疫法的保护率 (75 %和 6 6 7% )分别提高1 6 7和 2 5个百分点。对猪支原体肺炎IHA抗体的监测结果也同样表明 ,第 2组的免疫效果最好 ,2 40天的IHA抗体阳性检出率为 1 0 0 % ,而 1组和 3组均为71 4%。

猪肺炎支原体自家油乳苗免疫效果评价

试验采用已经分离得到的猪肺炎支原体,经扩大繁殖后制成油乳剂灭活疫苗,并采用ELISA抗体检测方法进行疫苗免疫学效果评价。结果表明:自制疫苗2次采血抗体合格率100%(滴度达1∶16以上);进口疫苗2次采血抗体合格率为100%;而国产疫苗在抗体滴度和维持时间上比较进口疫苗和自家苗差,第2次采血抗体合格率仅为20%。自制疫苗的免疫接种效果明显优于国产疫苗,与进口疫苗相当。

猪支原体肺炎灭活疫苗(GD0503株)冻融后稳定性研究

为了探究猪支原体肺炎灭活疫苗(GD0503株)-70℃冻融后性状是否改变,本试验研究将GD0503株与白油佐剂以不同水油比、与含有不同比例硬脂酸铝的白油佐剂乳化的疫苗,以及GD0503株不同抗原含量与白油佐剂乳化的疫苗,分别置-70℃冻融1次和冻融3次进行稳定性检测;同时也选取了不同公司不同种类的油佐剂疫苗10种,与猪支原体肺炎灭活疫苗(GD0503株)分别置-70℃冻融1次进行稳定性检测。结果表明∶(1)GD0503株与白油佐剂以不同水油比(1∶1.5、1∶2和1∶3)乳化的疫苗、与含有不同比例硬脂酸铝(0、1.0%、1.2%和2.0%)的白油佐剂乳化的疫苗和不同抗原含量与白油佐剂1∶2乳化的疫苗-70℃冻融1次和冻融3次管底均无明显水相析出,不破乳;(2)不同公司的10种油佐剂疫苗在-70℃冻融1次后有7种发生破乳,猪支原体肺炎灭活疫苗(GD0503株)和另外3种疫苗性状保持不变。上述结果证实,我们制备的猪支原体肺炎灭活疫苗(GD0503株)在-70℃保存后性状保持不变(不破乳)。

猪支原体肺炎亚单位疫苗的免疫应答

利用分子克隆、定点突变以及重组表达技术获得猪肺炎支原体的主要免疫原蛋白p36、p46、p65和p97R1-Nrdf。设立以重组蛋白p36、p46和p65为试验Ⅰ组,以p36、p46、p65和p97R1-Nrdf为试验Ⅱ组,猪支原体疫苗安百克(M+PAC)为试验Ⅲ组,PBS+佐剂为空白对照组来免疫BALB/c小鼠。检测小鼠血清、肺脏以及经蛋白刺激脾淋巴细胞的猪肺炎支原体抗体、IFN-γ和IL-4。结果显示,Ⅱ组的猪肺炎支原体抗体水平极显著高于Ⅰ、Ⅲ组(P<0.01);Ⅱ组IFN-γ水平极显著高于Ⅲ组,而Ⅱ组与Ⅰ组、Ⅰ组与Ⅲ组的IFN-γ水平无显著差异(P<0.05);但Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组的IL-4水平差异不显著(P<0.05),但都极显著高于对照组(P<0.01);肺的检测结果中猪肺炎支原体抗体、IFN-γ和IL-4水平呈现一致性,都为Ⅱ组>Ⅰ组>Ⅲ组>对照组;而经刺激脾淋巴细胞检测结果为Ⅱ组的猪肺炎支原体抗体和IFN-γ水平最高,而IL-4水平为Ⅲ组最高。由此可见,Ⅱ组通过激活体液免疫和细胞免疫途径,产生的猪支原体肺炎抗体水平最高;Ⅰ组亦能通过这2种免疫途径达到与Ⅲ组同样的免疫效果。