ELISA试剂盒检测Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗Vero细胞宿主蛋白残留量的验证

目的验证ELISA试剂盒检测Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Sabin strain inactivated poliovirus vaccine,sIPV)中Vero细胞宿主细胞蛋白(host cell protein,HCP)残留量的适用性。方法用同一批ELISA试剂盒检测sIPV中Vero细胞HCP残留量,验证其专属性、重复性、中间精密度、准确度、线性、范围、定量限和耐用性等指标。结果将样品用2种不同稀释液(样品稀释液和疫苗稀释液)稀释后,检测Vero细胞HCP残留量结果均<12.5 ng/mL,表明该方法专属性强;同一检验人员检测同一样品6次,Vero细胞HCP残留量结果均<12.5 ng/mL;不同检验人员检测同一样品6次,Vero细胞HCP残留量结果均<12.5 ng/mL,表明具有良好的重复性和中间精密度;准确度试验中回收率均在99%~106%,CV为2%;在12.5~400.0 ng/mL的线性范围内,标准曲线线性良好(R^(2)>0.98);定量限为50.0 ng/mL;显色时间在25~35 min内对实验无影响,显色温度在36~37℃内对实验无影响,耐用性良好。结论ELISA试剂盒检测sIPV中Vero细胞HCP残留量具有较好的专属性、重复性、中间精密度、准确度、线性和耐用性,可用于sIPV中Vero细胞HCP残留量的检测。

甲型肝炎灭活疫苗(Vero细胞)中Vero细胞残留蛋白含量检测方法的研究

建立甲型肝炎灭活疫苗制品中Vero细胞残留蛋白含量测定方法。制备Vero细胞蛋白抗原,免疫家兔制备抗血清,提取纯化抗血清IgG并以酶标记,建立酶联免疫吸附法检测系统。用Vero细胞蛋白抗原参考品绘制定量标准曲线,并对各项指标进行验证。结果显示兔抗IgG效价为1:32,通过Western blot表明兔抗IgG与Vero细胞蛋白抗原能特异性结合;通过方阵试验确定抗体包被浓度为1:400,酶标抗体工作浓度为1:200～1:400,抗原参考品检测范围为25～800ng/ml,线性关系良好,r=0.995,该试剂特异性、精密度及准确度良好,稳定性试验证明在4℃可保存半年。建立了酶联免疫吸附法,可用于甲型肝炎灭活疫苗中Vero细胞残留蛋白含量的检测。