乌头汤通过lncRNANEAT1调控IRE1α/XBP1途径减轻软骨细胞内质网应激的作用

目的:探讨乌头汤通过lncRNA NEAT1调控IRE1α/XBP1途径减轻毒胡萝卜素(TG)诱导的软骨细胞内质网应激的作用与机制。方法:采用荧光原位杂交(FISH)检测25μmol/L TG诱导的软骨细胞中lncRNA NEAT1分布情况;构建lncRNA NEAT1沉默软骨细胞,Real-time PCR检测其IRE1α、XBP1 mRNA水平变化;Western Blot检测其IRE1α、XBP1蛋白表达。使用第一代软骨细胞进行后续实验,设置空白组(10%DMEM)、TG组(25μmol/L TG+10%DMEM)、乌头汤含药血清组(25μmol/L TG+不同浓度含药血清)。Real-time PCR检测TG诱导的软骨细胞中lncRNA NEAT1 mRNA水平变化;Western Blot检测TG诱导的软骨细胞中IRE1α、XBP1、EDEM1、CHOP蛋白表达。免疫荧光染色观察各组软骨细胞中IRE1α、Caspase-12的荧光表达量。流式细胞术检测各组软骨细胞凋亡率情况。结果:FISH结果显示,lncRNANEAT1主要分布于软骨细胞的胞核中。与TG+Lenti-control组比较,TG+sh-NEAT1组IRE1α、XBP1 mRNA与蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。与TG组比较,乌头汤含药血清组lncRNA NEAT1水平及IRE1α、XBP1、EDEM1、CHOP蛋白表达显著降低(P<0.01),IRE1α、Caspase-12的荧光表达量显著降低(P<0.05),软骨细胞凋亡率显著下降(P<0.05)。结论:乌头汤可通过lncRNA NEAT1调控IRE1α/XBP1途径减轻TG诱导的软骨细胞内质网应激,延缓软骨细胞退变。

脑梗死患者血清中lncRNA NEAT1水平变化与血小板功能的相关性分析

目的 探讨长链非编码RNA(Long noncoding RNA,lncRNA)核富集丰富转录本1(Nuclear enriched abundant transcript, NEAT1)在脑梗死患者血清中的表达水平变化,并分析其与血小板功能的关系。方法 选取2019年12月-2020年12月本院就诊并确诊为脑梗死患者85例为脑梗死组,同时选取体检健康者70例为对照组;采用连续动态血小板功能检测法进行血小板粘附实验(Platelet adhesiveness test, Pad T)、血小板凝聚实验(Platelet aggre-gation test, Pag T);采用电阻抗法测定血小板分布宽度(Platelet distribution width, PDW)、血小板压积(Platelet hematocrit, PCT)、血小板计数(Platelet count, PLT)、平均血小板体积(Mean platelet volume, MPV);采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)法对血清中lncRNA NEAT1表达水平进行检测;Pearson法分析lncRNA NEAT1表达水平与上述血小板功能指标的相关性;受试者工作特征(Receiver operating characteristic,ROC)曲线评价血清lncRNA NEAT1水平对脑梗死发生的预测价值;采用多因素Logistic回归分析法分析发生脑梗死的影响因素。结果 与对照组比较,脑梗死组患者血清中lncRNA NEAT1水平明显升高(P<0.05);脑梗死组患者PDW,MPV,Pad T,Pag T水平均显著高于对照组,PLT,PCT水平低于对照组(P<0.05);血清lncRNA NEAT1水平与PLT,PCT水平均呈负相关(r≤-0.305,P<0.05),与PDW,MPV,Pad T,Pag T水平均呈正相关(r≥0.277,P<0.05);ROC曲线分析显示,血清lncRNA NEAT1水平预测脑梗死患者的曲线下面积(Area under the curve,AUC)为0.956(95%CI=0.910~0.982),对应的敏感度为96.25%,特异度为92.00%;多因素Logistic回归分析显示血清lncRNA NEAT1水平、PDW,MPV,Pad T,Pag T水平升高、PLT,PCT水平降低均是影响脑梗死发生的独立危险因素。结论 脑梗死患者血清中lncRNA NEAT1表达水平升高,且与血小板功能密切相关,可用于预测脑梗死的发生。