Application of an indirect immunofluorescent staining method for detection of Salmonella enteritidis in paraffin slices and antigen location in infected duck tissues

AIM:To detect Salmonella enteritidis (S. enteritidis) in paraffin slices and antigen location in infected duck tissues. METHODS:Rabbits were immunized with purified bacillus to obtain S. enteritidis-specific antibody, which were then extracted by the caprylic-ammonium sulphate method, purified through High-Q columns. An indirect immuno-fluorescent staining method (IFA) was established to detect the S. enteritidis antigen in paraffin slices. S. enteritidis was detected in each organ tissue of ducklings experimentally infected with S. enteritidis. RESULTS:The gland of Garder, heart, kidney, spleen, liver, brain, ileum, jejunum, bursa of Fabricius from S. enteritidis experimentally infected ducklings were positive or strongly positive, and the S. enteritidis antigen was mainly distributed in the infected cell cytoplasm.CONCLUSION:IFA is an intuitionist, sensitive and specific method in detecting S. enteritidis antigen in paraffin wax slices, and it is a good method in diagnosis and antigen location of S. enteritidis. We also conclude that the gland of Garder, heart, kidney, spleen, liver, ileum, jejunum are target organs in S. enteritidis infections of duck, and S. enteritidis is an intracellular parasitic bacterium.

用间接免疫荧光染色法检测鸭病毒性肠炎病毒在人工感染鸭体内的侵染过程和分布规律

用鸭病毒性肠炎病毒(DEV)CHv强毒株感染成年鸭复制鸭病毒性肠炎急性病例,分别于接种后不同时间,取心、肝、脾、肺、肾、胸腺、食道、十二指肠、胰腺、法氏囊和脑组织,制作切片,应用间接免疫荧光染色法(IFA)检测DEV在鸭体内的侵染过程和分布规律。结果显示:感染后4 h可在脾脏、胸腺和法氏囊中检测到DEV抗原;感染后6 h可在肝脏、食道、十二指肠、直肠及肺脏检测到DEV抗原;IFA对各组织器官中DEV的平均检出率为肝脏46/50、脾脏48/50、肺脏46/50、肾脏0/50、肠道46/50、法氏囊46/50、胸腺47/50、胰腺0/50、大脑0/50、食道44/50、心脏0/50。研究表明:在急性病例中,脾脏、法氏囊、胸腺、食道、肠道、肝脏和肺脏为DEV的主要靶器官;接种后,病毒首先在脾脏、胸腺、法氏囊中出现,然后病毒迅速传播到肝脏、消化道和肺脏中;IFA检测石蜡切片中DEV的方法具有直观、特异性强的优点,是对DEV进行检测和抗原定位的较好方法。

利用间接免疫荧光染色和协同凝集技术检测梨火疫病菌

提取梨火疫病菌 (0 0 5 6菌株 )的脂多糖免疫家兔 ,获得抗血清 ,建立了检测梨火疫病菌的间接免疫荧光染色和协同凝集检测技术 ,对梨火疫病菌的不同菌株和人工接种发病样品实施了检测。结果表明 ,这 2种方法可以准确、灵敏地检测梨火疫病菌及样品 ,方法简单、快速、实用 ,可以在中国口岸推广使用 ,减少梨火疫病进入中国的风险。

利用PCR和间接免疫荧光染色技术检测风信子黄腐病菌

根据风信子黄腐病菌(Xanthom onas hyacinthi,XHA)的fimA基因,合成了1对特异性引物JAAN/JARA,目的片段为226 bp,用来检测样本中有无目标细菌。用XHA全菌体免疫家兔,获得抗血清,建立了检测风信子黄腐病菌的间接免疫荧光染色检测技术。用上述两种方法对风信子黄腐病菌和人工接种发病样品进行检测。结果表明,这两种方法可以准确、灵敏地检测风信子黄腐病菌及带菌样品,方法简单、快速、实用,可以在口岸检疫中推广使用,以减少风信子黄腐病菌进入中国的风险。

间接免疫荧光抗体法对鸡传染性支气管炎病毒进行抗原定位

应用间接免疫荧光抗体（ＩＦＡ）法对ＩＢＶ感染后ＳＰＦ鸡不同脏器进行了跟踪检测。结果发现，在ＩＢＶ感染后的第７天，在气管、肾脏、脾脏、肺脏和肝脏等组织细胞中均不同程度地出现特异性的荧光。表明在感染的初期，ＩＢＶ具有广泛的组织嗜性；在感染的第１０天，只有肾脏、气管或肺脏中呈现荧光，而以肾脏中的荧光最强，特异性荧光持续时间最长的是肾脏，可达１４天，病毒存在于肾小管间质内浸润的淋巴细胞和巨噬细胞胞浆中。实验结果证实，ＩＦＡ方法具有直观、特异等特点，在抗原定位上具有独特的优点。

间接免疫荧光染色检测石蜡切片中的鸭病毒性肠炎病毒和抗原定位

差速离心和蔗糖密度梯度离心纯化鸭病毒性肠炎病毒(DEV)免疫兔制备兔抗DEV高免血清后,用DEAE-Sephadex A-50柱层析纯化的兔抗DEVIgG建立了间接免疫荧光染色法(IFA)检测石蜡切片中DEV的方法。IFA的最佳条件为:石蜡切片用10mmol/L pH6.0的柠檬酸缓冲液为微波修复液微波修复10min,胰酶修复20min;10%小牛血清室温封闭30min;加入1∶25的兔抗DEVIgG于4℃孵育过夜;再加入FITC标记的羊抗兔IgG于37℃孵育45min。以建立的IFA对DEV人工皮下感染死亡鸭的各组织器官进行检测,在死亡鸭的脾脏、胸腺、法氏囊、肝脏、食道、十二指肠、直肠及肺脏中检测到DEV抗原。研究表明,IFA检测石蜡切片中的DEV具有直观、特异性强的优点,是对DEV进行检测和抗原定位的良好方法。

乙型肝炎病毒感染者血清抗核抗体检测分析及临床意义

目的检测乙型肝炎病毒(HBV)感染者血清中抗核抗体(ANA)的阳性率并探讨其临床意义。方法采用间接免疫荧光法(IIF)检测120例HBV感染者、82名正常对照者的ANA。结果 120例HBV感染者中ANA阳性率为30.0%,明显高于正常对照组(4.2%);HBV感染组的ANA以低滴度(1∶100)为主,占58.3%;ANA荧光模式以颗粒型(41.7%)最为常见。结论 HBV感染可诱导以低滴度为主的ANA,其在诊断、鉴别诊断及治疗中有一定的意义,发病机制可能与自身免疫有关。

3种抗双链DNA抗体检测方法比较及其联合检测对系统性红斑狼疮的诊断价值研究

目的分析间接免疫荧光法(IIF)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫印迹法(IBT)检测抗双链DNA(dsDNA)抗体的差异,以及联合检测在系统性红斑狼疮(SLE)诊断中的应用价值。方法选取2012年1月至2015年3月确诊的SLE患者50例,以及同期其他自身免疫病(AID)患者100例和体检健康者100例。分别采用3种方法检测其血清抗dsDNA抗体,比较3种方法的灵敏度与特异度,并分析3种方法联合检测的灵敏度与特异度。结果IIF法特异度(99.5%)最高,ELISA法灵敏度(74.0%)最高。IIF与ELISA法、IIF与IBT法、ELISA与IBT法检测SLE患者抗dsDNA抗体的检出率比较,差异均有统计学意义(χ~2值分别为11.435、13.994、4.539,P<0.05);且一致性检验的Kappa值(κ)分别为0.411、0.522、0.278。3种方法串联检测特异度提高到99.5%,并联检测的灵敏度提高到82.0%。结论 3种检测抗dsDNA抗体的方法中,IIF特异度最高,ELISA灵敏度最高,联合检测可提高检测灵敏度与特异度。

2015—2017年川中地区儿童急性呼吸道感染病原学分析

目的探讨川中地区儿童急性呼吸道感染病原学流行的特点。方法采用间接免疫荧光法检测2015年10月至2017年10月该院就诊并诊断为急性呼吸道感染的12 511例儿童,检测其血清9种特异性呼吸道病原体IgM抗体[Q热立克次体(COX)、肺炎衣原体(CPn)、肺炎支原体(MP)、副流感病毒1、2、3型(PIVs)、呼吸道合胞病毒(RSV)、甲型流感病毒(INFA)、嗜肺军团菌血清1型(LP1)、腺病毒(ADV)、乙型流感病毒(INFB)],并对结果进行分析。结果 12 511例标本共检出呼吸道病原体IgM抗体阳性1 481例,阳性率11.8%;MP阳性检出率最高为8.5%,其次是PIVs、RSV、INFB、ADV、LP1、INFA,但均未检出COX和CPn。女性患儿MP阳性率显著高于男性(P<0.05)。各年龄段患儿呼吸道病原体感染率不同(P<0.05),7~14岁组感染率最高,明显高于0~1岁组,所有年龄段、不同月份dMP检出率最高,主要分布于9、11、12月份(>10%),PIVs高发于9、10月,RSV高发于10月,其余散在分布。结论该地区急性呼吸道感染患儿呼吸道病原体主要是肺炎支原体、副流感病毒1、2、3型、呼吸道合胞病毒,女性感染率明显高于男性,学龄前患儿发病率较高,<1岁患儿发病率偏低,冬季相对高发。

EUROPattern全自动免疫荧光核型和滴度判读系统检测抗核抗体的应用评价

目的:评价EUROPattern全自动免疫荧光核型和滴度判读系统对抗核抗体荧光片的应用价值。方法:选取苏州市立医院本部血清标本202例,其中包括确诊的177例自身免疫病患者血清标本及25例健康体检者血清标本。应用Sprinter XL全自动间接免疫荧光仪检测抗核抗体,分别采用EUROPattern Suit全自动判读系统以及传统目视判读方法对两组血清标本抗核抗体的核型及滴度进行分析,比较两种方法的分析结果并进行评价。结果:①全自动判读系统和目视判读方法在202例血清标本中阳性率分别为85.6%和86.1%,两种判读方法阳性率无显著差异(P=0.886);比较两种方法的性能验证指标,灵敏度、特异性、准确度、阳性预测值和阴性预测值,其差异均无显著性(P均>0.05)。②全自动判读系统和目视判读方法显示荧光核型同时阳性169例,同时阴性24例,总体符合率为95.5%,一致性检验Kappa值为0.816。③全自动判读系统与目视判读方法的荧光核型分布显示,其总体一致率为85.1%;不同荧光模式一致率由高到低为核点型(100%)、着丝点型(93.8%)、均质型(91.7%)、核仁型(88.5%)、胞质型(84.6%)、颗粒型和混合型(均80.0%)。④除混合型外,两种方法滴度判读均有较高的符合率(81.8%~100.0%)。结论:与传统目视判读结果比较,全自动荧光判读系统对抗核抗体核型和滴度判读具有较高的灵敏度、特异性及符合率,可以较好地满足临床需求。

局部二维结构描述的HEp-2染色模式分类

Hep-2染色模式分类主要用于免疫疾病诊断,但已有方法受荧光成像环境,细胞图像自身的视觉特性的影响,分类准确率较低.本文提出一种新的适合于HEp-2染色模式分类的特征提取方法.在构建了不同尺度下的高斯平滑图像序列后,利用shape index实现图像二维结构的直观描述,进而通过多灰度阈值图像结构的空间分解,使其同时具备对微观二维图像结构和空间信息的描述能力.该方法在ICPR和SNP HEp-2数据集的两折交叉细胞级测试中,分别获得89.83%和87.49%的准确率,在ICPR的28折交叉细胞级和图像级测试分别达到60.5%和70.56%的准确率,明显优于LBP、CLBP等方法,和CoALBP特征相当.

核致密斑点型抗核抗体的临床应用

目的探讨核致密斑点型(AC-2)自身抗体的临床应用。方法收集19例南京大学医学院附属鼓楼医院检验科的血清标本,免疫印迹法(WB)检测抗核抗体谱(IgG)和抗DFS70抗体(IgG),间接免疫荧光法(IIF)检测抗核抗体(IgG),观察并记录结果。结果19例标本中,抗DFS70抗体均为阳性,抗核抗体核型均为AC-2,抗核抗体谱中有2例阳性。结论AC-2是荧光模型国际共识(ICAP)定义的细胞核核型中的斑点型的亚型之一,国内检验人员应努力学习其荧光显微镜下表现,了解其临床意义,为临床提供准确的检验报告。

血清ANCA检测在原发性小血管炎中的临床意义

目的检测原发性小血管炎患者血清抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)并探讨其临床意义。方法应用间接免疫荧光(IIF)法检测50例原发性小血管炎疾病患者血清中ANCA的检出率。结果50例原发性小血管炎血清中,韦格纳肉芽肿(WG)阳性率95%,为C-ANCA阳性;显微镜下多血管炎(MPA)阳性率50%,为P-ANCA阳性;过敏性紫癜(AP)阳性率37.5%,为P-ANCA阳性;白塞病(BD)3例,ANCA均为阴性;未分型原发性小血管炎(UCPSV)阳性率66.67%,其中C-ANCA 4例,P-ANCA 6例。结论抗中性粒细胞胞浆抗体在原发性小血管炎中,部分疾病与抗中性粒细胞胞浆抗体密切相关,尤其是韦格纳肉芽肿阳性率95%,提示C-ANCA可作为韦格纳肉芽肿血清学标志性抗体,ANCA检测对血管炎的发病及诊断具有一定的作用。

SARS病房工作的医护人员血清中特异抗体测定分析

目的 检测密切接触SARS患者的医护人员血清中SARS病毒IgM及IgG抗体的水平 ,对SARS病毒有无隐性感染作初步调查。方法 分别用酶联免疫吸附法和间接免疫荧光法 (IIFA)检测 2 0 0例正常人 ,2 0 0例在SARS病房工作 1个月的医护人员血清中SARS病毒IgM及IgG抗体的水平。结果 正常人及医护人员血清中未检测到SARS病毒IgM及IgG抗体。结论 不同于普通的流行性传染性疾病 ,SARS病毒可能不具有隐性感染性。

一种猪圆环病毒Ⅱ型ELISA抗体检测试剂盒的临床应用

采用猪圆环病毒2-dCap-ELISA抗体检测试剂盒,对河北、山西两地共441份猪血清样品进行检测。结果显示,河北保定地区349份血清样品中阳性样品为306份,感染率为87.68%;山西地区92份血清样品中阳性样品为77份,感染率为83.7%。与标准的间接免疫荧光检测法进行比较,该ELISA检测试剂盒的诊断敏感性为95.48%(380/398),诊断特异性为93.02%(40/43),总符合率为95.24%。由此表明该试剂盒是一种简便、快速、灵敏、适合于大规模临床应用的猪圆环病毒2型抗体检测试剂盒。

大鼠脑为底物间接免疫荧光法检测谷氨酸脱羧酶抗体的研究

目的寻找一种更简便快速的谷氨酸脱羧酶抗体(GADab)的检测方法。方法制备小鼠、大鼠脑印片、人胰腺匀浆涂片,摸索实验条件,建立改良的免疫荧光方法,并与ELISA方法比对,对其特异性、可行性、准确性等进行评估。结果所建立的方法与现行的酶免疫吸附法和以人胰腺为底物的传统免疫荧光法对GADab的检测结果无显著差异。结论大鼠脑可代替正常人胰腺用于GADab免疫荧光检测。

反向被动血凝抑制试验与血凝抑制试验用于EHF诊断及血清分型的研究

对山东省莒南县和滕州市158例流行性出血热(EHF)病人血清,同步用IFAT、RPHI及HI试验检测了EHF抗体。以IFAT检测结果为标准,RPHI的灵敏度、特异度、阳性预告值、符合率及校正符合率分别为97.06％、77.27％、96.35％、94.30％及87.91％;HI分别为94.85％、81.82％、96.99％、93.04％及86.42％。后两者作为诊断试验可与IFAT媲美,不需用荧光显微镜,简便易行,便于基层使用。用于EHF病人血清分型,这两种试验结果基本一致,RPHI更为简便,值得推广。

自身免疫性抗体在急性胰腺炎病程中的表达及意义

目的 探讨一种针对胰腺间质结构的自身免疫性抗体在急性胰腺炎不同病程中的表达情况 ,并分析其可能的意义。方法 采用临床病例分析的方法 ,于发病后第 1、2、4、7天分别取静脉血 ,用间接免疫荧光法对血样中的抗胰腺间质抗体进行定性分析。并测定尿淀粉酶和观察临床体征的变化。结果 随着病程的进展 ,该抗体的阳性表达率逐渐增加 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,其阳性表达率的增加与临床症状的好转 (r =0 .996)及生化指标的恢复呈正相关 (r =0 .95 1)。结论 在急性胰腺炎患者的恢复期血清中逐渐有增强的自身抗体表达 ,该抗体主要是针对胰腺的间质结构 。

上皮细胞分化紊乱导致创伤性假性上皮瘤样增生病变形成

目的:创伤早期处理不当可继发罕见的假性上皮瘤样增生(PEH)。本研究探讨创伤愈合过程中上皮细胞异常分化与PEH发生之间的关系。方法:将来自临床11例因创(烧)伤继发PEH病变(n=11)及其边缘正常皮肤(PEH-N,n=6)标本,采用组织病理学和电子显微镜技术观察PEH上皮组织形态改变,并结合免疫组化技术,观察人广谱角蛋白(p-CK)、Ⅳ型胶原、层粘连蛋白(LN)及其受体(LN-R)、β1-整合素、上皮性钙粘蛋白(E-Cad)、β-连环蛋白(β-Cat)、粘着斑激酶(FAK)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)和增殖细胞核抗原(PCNA)在PEH组织中定位和分布特征。结果:与PEH-N组相比,PEH呈现鳞状上皮不典型增生,可见上皮基底细胞脱落;超微结构显示上皮细胞变形,核-浆比增加,细胞间连接松解,新形成的肿瘤样细胞从上皮细胞原位"脱壳"样迁移;相同部位免疫组化显示基底细胞p-CK、Ⅳ型胶原、LN和LN-R、E-Cad和ICAM-1表达能力丧失或显著减弱,但β-Cat、FAK、β1-整合素和PCNA的免疫反应性增强,深层间质内肿瘤样细胞恢复p-CK、CK19、E-Cad和ICAM-1的免疫活性,成堆聚集或增殖后形成实变的上皮岛。结论:本研究首次揭示创伤性PEH上皮细胞存在去分化后再分化现象,是上皮反应性增生及其良性病变的重要特征。局部炎症感染因素的刺激,导致上皮细胞缺失ICAM-1和E-Cad以及对FAK和β-Cat的过度反应,特别是基底细胞上β-Cat/E-Cad高信号落差,可能是上皮细胞丧失分化和结构形成能力、完成细胞迁移的重要机制。

常州地区儿童急性呼吸道感染病原体的流行病学研究

目的探讨常州地区儿童急性呼吸道感染(ARI)的病原体种类和流行病学特征。方法应用间接免疫荧光技术检测2 259例ARI患儿血清中9种病原微生物IgM型抗体,包括嗜肺军团菌1型(LP-1)、肺炎支原体(MP)、Q热立克次体(QFR)、肺炎衣原体(CP)、腺病毒(ADV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、甲型流感病毒(FluA)、乙型流感病毒(FluB)和副流感病毒(PIV),并进行统计分析。结果 2 259例患儿IgM型抗体阳性例数达856例,检出率为37.9%。单一感染601例,占70.2%(601/856),其中以MP为主,阳性率达43.6%;而FluB、RSV、PIV阳性率分别为11.4%、6.3%和5.3%。混合感染占29.8%(255/856),主要以MP合并FluB感染为主,占8.4%;而MP合并PIV、MP合并RSV、MP合并LP-1、MP合并PIV和RSV感染分别为5.8%、2.9%、2.4%和1.4%。856例阳性病例中,MP在<1岁组、1～4岁组、5～8岁组、>8岁组中所占比例分别为34.4%、64.0%、51.5%和54.6%,1～4岁组高于其他组(χ2=18.127,P<0.01)。RSV、FluB和PIV阳性构成情况相似(P>0.05)。儿童ARI检出率在秋、冬季节最高,分别为11.8%和13.6%。结论常州地区儿童ARI中以MP为主要病原体,并合并病毒感染。1～4岁儿童为易感人群,好发于秋、冬季节,大环内酯类抗菌药物联合病毒唑治疗效果明显。