2007年深圳市Yamagata系B型流感病毒基因特性的分析

目的分析2007年深圳市Yamagata系B型流感病毒血凝素(HA)基因的特性。方法将2007年深圳市分离到的Yamagata系B型流感毒株进行血凝素HA片段核苷酸序列测定并推导出其氨基酸序列,用SIMMONIC软件和Mega软件对其进行分析。结果2007年在深圳市流行的Yamagata系B型流感病毒根据197-199位氨基酸的差异可以划分为A、B、C3个分支。分支C在197位上有糖基化位点的增加,而分支A、B则未在该区域呈现出糖基化位点的特征性结构。此外与今年的国内代表株B/Fujianxinluo/54/06相比,除了40号位点上的氨基酸变异为共同存在外,其余大多数的氨基酸点变异是散发存在的。部分的变异位点处在HA1区的抗原表位,可能会导致病毒的抗原性改变。结论2007年在深圳市流行的Yamagata系B型流感病毒与B/Fujianxinluo/54/06相比基因特性已发生变化,并呈现出多样性的变化趋势。

内蒙古自治区2015-2018年B Yamagata系流感病毒全基因组序列分析

目的了解2015-2018年内蒙古自治区B Yamagata系流感病毒的全基因组序列特征。方法采集流感样病例呼吸道标本进行流感病毒分离,提取病毒RNA,采用一步法RT-PCR扩增病毒全基因组序列并测序,通过生物信息学软件分析病毒基因特征。结果本次研究的B Yamagata系流感病毒全基因与B/Phuket/3073/2013疫苗株的核苷酸同源性在97.7%～99.9%之间;B/Inner Mongolia/1200/2015和B/Inner Mongolia/1178/2015毒株发生抗原漂移,并出现HA-BY/NABV系间重配现象;所有毒株对神经氨酸酶抑制剂敏感。结论 2015-2018年内蒙古自治区B Yamagata系流感病毒抗原性和基因特征在逐渐发生变异,出现系间重配株,部分流感流行株与疫苗匹配性不佳。

甲型和乙型流感病毒感染A549细胞后固有免疫分子的比较研究

目的:探讨固有免疫应答在人肺腺癌细胞A549感染流感病毒进程中的作用。方法:采用100TCID50 A/Brisbane/02/2018(A/BR18,H1N1)和B/Phuket/3073/2013(B/PH13,B Yamagata)流感病毒感染A549细胞,Hoechst染色和流式细胞术检测细胞凋亡,qPCR检测感染后24 h、48 h、72 h细胞因子IFN-α、IFN-β、TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8、IL-10及TLR7、Mx1 mRNA水平。结果:与PBS组比较,H1N1组和BY组A549细胞出现不同比例细胞凋亡(P<0.01);H1N1组和BY组IFN-αmRNA水平在感染24 h、48 h、72 h时均升高(P<0.01),IFN-βmRNA水平在48 h和72 h时显著升高(P<0.01);H1N1组和BY组TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8和IL-15 mRNA水平在感染48 h、72 h时明显升高(P<0.01),IL-10 mRNA水平随感染时间延长呈降低趋势,IL-13 mRNA水平在感染72 h时H1N1组高于BY组(P<0.05);H1N1组和BY组TLR7和Mx1 mRNA水平在感染各时间点均有不同程度升高(P<0.05)。结论:固有免疫分子TLR7、促炎细胞因子及炎症抑制因子参与A549细胞抗病毒感染进程,甲型H1N1毒力、致病性和病毒活跃度均高于乙型B Yamagata。

珠海市2007-2008年乙型流感病毒基因特性分析

目的了解珠海市近两年乙型流感病毒的基因变异情况。方法采集珠海市流感样病例样本进行流感病毒的分离和鉴定,并对分离到的乙型流感病毒进行核酸的提取,采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增病毒基因后进行病毒血凝素HA1基因核苷酸序列测定,用Mega、DNA Star、GeneDoc软件对测序结果进行分析处理,并与WHO推荐的疫苗株基因序列进行比对。结果 2007-2008年分离的乙型流感毒株分属于Yamagata系和Victoria系两个谱系,谱系内毒株间距离很近。Yamagata系毒株与B/Brisbane/3/2007的核苷酸同源性极高,在99.4%~99.7%之间;Victoria系乙型流感病毒株与B/Malasia/2506/2004的核苷酸同源性亦很高,在98.6%~99.1%之间。与疫苗株和其它流行株相比,本次分离的两个谱系毒株均未发现核苷酸的丢失和插入,但均增加一个潜在的糖基化位点。结论珠海市人群交替流行着Yamagata系和Victoria系两个抗原性不同的进化系的乙型流感病毒,病毒的基因发生了变异。2007-2008两年WHO推荐的乙型流感疫苗株与我地区当年流行株为不同谱系毒株,预防保护效果不好。

2006至2014年北京单中心儿童乙型流感病毒流行监测

目的了解北京单中心儿童乙型流感病毒的流行趋势,为流感的防控提供数据支持。方法 2006年9月至2014年5月对首都儿科研究所附属儿童医院门诊和急诊采集流感样病例的咽拭子标本,采用传代狗肾细胞（MDCK细胞）行流感病毒和副流感病毒的分离,并用特异性血清对分离到的流感病毒进行凝集抑制试验鉴定型别。同时接种人喉癌细胞（HEp-2）行呼吸道合胞病毒和腺病毒的分离。分为8个监测年度,以2006年9月至2007年8月（2006至2007年）为1个监测年度,余7个年度类推。对8个监测年度乙型流感病毒的流行特征行描述性分析,并与同期甲型流感病毒的流行特点进行比较。结果 6 150份咽拭子标本检测了流感病毒,分离到乙型流感病毒345株（5.6%）,其中166株（48.1%）B/V系毒株和179株（51.9%）B/Y系毒株。18个监测年度,出现5个乙型流感病毒的流行高峰。除2006至2007年外,2007至2008、2009至2010、2011至2012和2013至2014年的流行高峰呈隔年流行的特点,月阳性率最高可达46.2%（2008年1月和2012年2月）。2006至2007、2009至2010、2010至2011和2013至2014年,甲型流感病毒阳性率高于乙型流感病毒,且乙型流感流行高峰均出现在甲型流感流行高峰后;2007至2008和2011至2012年,乙型流感病毒阳性率高于甲型流感病毒,且乙型流感病毒流行高峰均出现在甲型流感流行高峰前。28个监测年度中2006至2007、2007至2008、2010至2011和2011至2012年B/V系和B/Y系乙型流感病毒同时流行,余4个年度为其中之一流行株流行。2009至2010、2011至2012和2013至2014年的流行株与WHO推荐的流感疫苗中的乙型流感病毒型别相匹配。3345例乙型流感病毒阳性患儿中,~12岁以下组中随着患儿年龄增大而乙型流感病毒阳性率增高。结论 2006年9月至2014年5月北京地区儿童乙型流感病毒的流行基本呈现隔年出现高峰的流行趋势。在2个谱系同时流行的4个流行季中,分别以B/V或B/Y系乙型流感病毒为主要流行株。

浙江省乙型流感病毒HA_1基因分析

目的：了解浙江省近几年乙型流感病毒的基因变异情况和WHO推荐流感疫苗株对浙江省人体的保护情况。方法：采集浙江省类流感样本进行流感病毒的分离和鉴定，并对分离到的乙型流感病毒进行核酸的提取，采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增病毒基因后进行病毒血凝素HA1基因核苷酸序列测定，用DNAMAN和BioEdit生物软件对测序结果进行分析处理，并与WHO推荐疫苗株基因进行比对。结果：分离到Yamagata系和Victoria系两个进化系的乙型流感病毒，两系毒株均未发现核苷酸的丢失和插入，糖基化位点没有太大改变。毒株之间核苷酸的同源性为95.25%，氨基酸的同源性为95.28%。Yamagata系毒株HA1区域核苷酸序列长度为1038 bp，推导的氨基酸序列长度为346个，氨基酸变异替换数在6-8之间；Victoria系毒株HA1区域的核苷酸序列长度为1041 bp，推导的氨基酸序列长度为347个，氨基酸变异替换数在2-8之间，相比Yamagata系毒株在163位上都多1个天冬酰胺（N）。基因进化树上可见明显的Yamagata系和Victoria系两个分支。结论：浙江省人群交替流行着Yamagata系和Victoria系两个抗原性不同的进化系的乙型流感病毒，病毒的基因发生了变异，抗原已发生漂移。2001、2006两年WHO推荐乙型流感疫苗株与我省当年流行株为不同谱系毒株，预防保护效果不够理想，其余年份为同一谱系毒株，预防保护效果较好。

新余市2013年-2014年B型Yamagata系流感病毒HA1基因特性分析

目的了解2013年-2014年新余市Yamagata系乙型流感病毒的序列特性和变异特点,分析WHO推荐流感疫苗株对人体的保护情况。方法选取新余市2013年-2014年通过狗肾传代细胞（MDCK）培养分离到的Yamagata系乙型流感毒株9株,提取病毒RNA,反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）扩增HA1基因片段,对序列进行处理和特性分析。结果 2013年-2014年的乙型流感病毒均为B型Yamagata系。9株流感毒株HA1区与疫苗推荐株B/Wisconsin/01/2010的核苷酸同源性为97.8%～99.4%,氨基酸替换数为3个～4个,其中8株均在3个相同的氨基酸位点发生变异;与代表株B/Yamagata/16/1988的核苷酸同源性为94.4%～96.2%。B/Jiangxi Yushui/1221/2014与疫苗株B/Massachusetts/02/2012的核苷酸同源性为99.3%,氨基酸替换数为3个。结论新余市2013年-2014年B型Yamagata系流感病毒都发生了抗原性变化,WHO推荐的2011年-2012年疫苗对88.89%的B型Yamagata系流感仍有预防效果,当年度的疫苗株能很好地预防另外11.11%流感的流行。

2021-2022年浙江省衢州市B/Victoria系流行性感冒病毒抗原性及基因特性分析

目的了解浙江省衢州市2021—2022年B/Victoria系流行性感冒(流感)病毒抗原性及基因进化特征,为流感防控提供科学依据。方法选取衢州市2021—2022年分离到的14株B/Victoria系流感毒株进行全基因组测序,利用生物信息学软件对其血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)基因进行分子进化特征分析。采用红细胞凝集抑制实验进行抗原性分析。结果10株分离株为同期疫苗株B/Washington/02/2019的类似株,后期分离的4株毒株为疫苗株B/Washington/02/2019的低反应株。同源性分析显示,分离株与下一年度(2022—2023年)疫苗株B/Austria/1359417/2021的匹配性总体高于同期疫苗株B/Washington/02/2019。基因进化分析发现,14株分离株从V1A.3a.1逐渐进化为V1A.3a.2分支,与同期疫苗株B/Washington/02/2019的遗传距离随时间逐渐加大,而与下一年度疫苗株B/Austria/1359417/2021关系渐近且最终聚集在V1A.3a.2分支上。相较于同期疫苗株B/Washington/02/2019,HA氨基酸序列共有14个变异位点,涉及3个抗原表位和1个糖基化位点(197NET);NA蛋白发生了多个氨基酸位点改变,但未发现相关耐药位点变异。结论2021—2022年衢州市B/Victoria系流感病毒处在持续进化之中,与同期疫苗株B/Washington/02/2019的匹配性降低,应继续加强对B/Victoria系流感病毒的监测研究,及时为流感疫苗株的筛选提供科学依据。

Yamagata系乙型流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体制备及双抗体夹心ELISA检测方法的建立

目的制备Yamagata系乙型流感病毒血凝素蛋白(hemagglutinin,HA)的特异性单克隆抗体,建立检测Yamagata系乙型流感病毒的双抗体夹心ELISA方法。方法用Yamagata系乙型流感病毒(B/Phuket/3073/2013)抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞进行融合,通过4次有限稀释获得阳性杂交瘤细胞并建株。将单克隆抗体1F7和2H6分别作为捕获抗体和检测抗体,建立一种检测Yamagata系乙型流感病毒的双抗体夹心ELISA法。结果该方法中捕获抗体1F7在96孔板的包被量为40 ng/孔,检测抗体2H6工作浓度为100 ng/孔;该方法仅能与Yamagata系乙型流感病毒发生反应,具有较强特异性。灵敏度分析显示,该方法对病毒尿囊液和病毒纯化HA蛋白最低检测值分别为2-1 HAU/100μL和1.22 ng/mL,具有较高灵敏度。重复性试验表明,该方法批内和批间重复性变异系数均小于5%。结论本研究建立的ELISA方法特异性强、灵敏度高、重复性好,为Yamagata系乙型流感病毒快速诊断及定量检测提供技术支持。

2017年深圳市学校乙型/Yamagata系流感传播动力学研究及防控措施评价

目的探讨2017年深圳市乙型Yamagata系(B/Y)流感在学校暴发疫情中的传播能力,评价疫苗接种和隔离措施的防控效果。方法运用SEIAR动力学模型对暴发现场调查数据进行模拟,计算疫情的基本再生数(R0)评价B/Y的传播能力;设计SEIARV疫苗接种模型和SEIARQ隔离模型,计算累计罹患率(TAR)和暴发持续时间(DO),评价疫苗接种与隔离措施的防控效果。结果 2017年深圳市B/Y流感暴发疫情的R0为5.97(95%CI:3.66~8.28);无干预措施下模拟疫情将持续52 d,TAR为99.57%。模拟单独采取在疫情发生前接种流感灭活疫苗(IIV),当接种比例为30%、50%和70%时,接种三价流感灭活疫苗(IIV3)或四价流感灭活疫苗(IIV4)的TAR分别为80.51%/76.81%、65.07%/58.48%和44.06%/33.77%;模拟单独采取疫情发生后应急接种,当接种比例为30%、50%和70%时,接种IIV3/IIV4的TAR分别为85.94%/82.46%、73.55%/67.03%和57.90%/47.54%;当接种比例≥50%,如采取疫情发生前疫苗接种+隔离的联合干预措施,TAR均<1%;如采取疫情发生后应急接种+隔离,TAR均<5%。结论 2017-2018年流感季B/Y在学校暴发疫情中传播能力较强;无论接种IIV3或IIV4,高覆盖率的疫苗接种结合隔离措施是有效的流感防控措施。

B型流感病毒系间重配进化方式对其生长特性的影响

研究系间重配进化方式对B型流感病毒生长特性的影响。挑选2013-2015年中国分离的B型流感病毒野生型及系间重配代表毒株并传代扩增。以相同量的病毒感染细胞,检测不同时间点的TCID50值,测定生长曲线;进一步对病毒神经氨酸酶动力学常数（Km值）进行检测,分析神经氨酸酶活性。病毒生长曲线显示2013年和2014年病毒在感染后48h达滴度高峰,维持至72h后滴度逐渐下降;2015年病毒滴度则在24h达到高峰。2013年系间重配株B/福建同安/1565/2013与野生型病毒相当,而2013-2015年的其他系间重配病毒的生长曲线的峰值均不及同期的野生型病毒。通过神经氨酸酶活性实验得到病毒的Km值,显示系间重配病毒中B/福建同安/1565/2013NA蛋白的亲和力最高。2014年和2015年系间重配病毒的NA亲和力低于同期的野生型病毒。2014-2015年病毒检测结果显示,神经氨酸酶亲和力较强则生长特性较好,2013年病毒的神经氨酸酶活性与生长特性表现不一致。表面蛋白基因交换造成的系间重配毒株其神经氨酸酶活性与生长特性表现并不一致,提示2013-2015年,病毒的内部蛋白影响了病毒的生长特性,有待进一步研究。

2012年邯郸市乙型Yamagata系流感病毒HA1基因变异分析

目的研究邯郸市2012年流感监测中分离的Yamagata系乙型流感毒株HA1的抗原性和基因特性，阐明HA1基因的变异与流感流行的关系。方法用MDCK细胞分离培养流感病毒，提取病毒核酸，采用RT—PCR方法特异性扩增病毒HA1基因，进行核苷酸序列测定，用DNAStar中Megalign软件进行分析。结果2012年分离的Yamagata系乙型流感病毒与2008-2009年代表株B／Florida／4／2。06相比亲缘关系较远，核苷酸同源性为96．2％～96．8％，氨基酸同源性为96．5％～97．4％，HA1区9个位点氨基酸发生替换，其中6个参与抗原表位构成；与WHO推荐的2012～2013年疫苗株B／Wisconsin／01／2010相比亲缘关系近，核苷酸同源性为98．8％～99．4％，氨基酸同源性为97．4％～98．5％，有5个位点发生氨基酸替换，其中3个参与抗原表位的构成；与国家流感中心提供的标准抗血清的血凝抑制滴度≥1：640。结论邯郸市2012年分离的Yamagata系乙型流感病毒血凝素蛋白HA1与B／Florida／4／2006相比已形成新的变种，与B／Wisconsin／01／2010相比也发生了新的变异，但尚不能确定是否形成Yamagata系有代表性的新变种。

2011年-2016年唐山地区B型流感病毒血凝素基因特性分析

目的分析2011年-2016年唐山地区B型流感血凝素基因特征。方法对唐山市哨点医院流感样病例咽拭子标本进行核酸检测,阳性标本采用MDCK细胞分离培养,选取10株B型流感病毒进行HA1基因测序,分析其核苷酸序列特征及氨基酸变异情况。结果进化分析显示,唐山地区B型流感病毒分为B/Victoria系和B/Yamagata系,其中4株B/Vic系毒株为1B分支(2011年-2012年)和1A分支(2015年-2016年),6株B/Yam系毒株均属于3分支。与疫苗株B/Brisbane/60/2008相比,B/Vic系毒株氨基酸替换发生在N129S和I146V(1B分支)、I117V和N129D(1A分支)。与疫苗株B/Wisconsin/1/2010(B/Yam 3分支)相比,B/Yam毒株共有7个位点发生氨基酸替换;与疫苗株B/Massachusetts/2/2012(B/Yam 2分支)相比,有14个位点发生氨基酸替换,其中N116K、S150I、N165Y和D196N位于抗原表位上。结论 2011年-2016年唐山地区B型流感毒株发生明显变异,连续分子学监测对该地区的疫苗接种政策有重要意义。

2017-2018年流感流行季河北省乙型Yamagata流感病毒耐药性及耐药位点分析

目的分析河北省2017-2018年流感监测年度乙型Yamagata流感病毒对神经氨酸酶抑制剂(neuraminidase inhibitor,NAI)的耐药情况,为流感的临床治疗及预防控制提供依据。方法选取28株乙型Yamagata流感病毒,检测病毒对奥司他韦和扎那米韦的药物敏感性。选取14株乙型Yamagata流感病毒,提取核酸后对神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因进行PCR扩增,测序后对耐药位点进行分析。结果选取的28株乙型Yamagata流感病毒全部对奥司他韦和扎那米韦敏感,对奥司他韦的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))平均为13.93 nM(4.54~32.07 nM),对扎那米韦的IC_(50)平均数为1.38 nM(0.14~5.61 nM)。NA基因的全部耐药位点未发现耐药突变。结论河北省2017-2018年流行的乙型Yamagata流感病毒对NAI类药物敏感。

2018-2020年上海市B/Victoria系流感病毒的流行特征及基因特性分析

目的分析2018—2020年上海市分离的B/Victoria系流感毒株与疫苗株的匹配性及基因变异情况。方法利用血凝抑制实验,对142株B/Victoria系流感毒株进行了抗原性分析,并选取了63株开展了血凝素(HA)及神经氨酸酶(NA)基因序列分析。结果2018—2020年上海市流行的B/Victoria系流感毒株主要属于V1A.3分支,少数属于V1A.1分支及未缺失的V1A分支;抗原性分析显示,26.76%的流行株是疫苗株B/Colorado/06/2017鸡胚株的低反应株,与疫苗株相比,V1A.3分支流行株在HA蛋白的120环、150环、160环及190螺旋等关键的抗原决定簇及受体结合关键部位发生了5个氨基酸位点改变。结论2018—2020监测年度B/Victoria系流行株与世界卫生组织推荐的疫苗株组分B/Colorado/06/2017匹配性不佳,仍需密切监测流行株的谱系及变异情况,为疫苗株的筛选提供可靠的数据。

B型流感病毒B/Guangxi-Jiangzhou/1352/2018毒株的遗传进化及其对小鼠的致病性分析

B型流感病毒(influenza B virus,IBV)比A型流感病毒(influenza A virus,IAV)更易引发并发症,在一定季节内造成的疾病负担甚至超过IAV,但目前人们对IBV的关注较少。为了分析IBV临床毒株B/Guangxi-Jiangzhou/1352/2018的遗传进化特点,本研究构建了系统进化树,并以世界卫生组织推荐的疫苗株为参考,对其血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)进行了氨基酸序列同源性及突变位点分析。分析结果发现B/Guangxi-Jiangzhou/1352/2018毒株无谱系间重配现象,与同年疫苗株B/Colorado/06/2017匹配性较差。另外,测定了B/Guangxi-Jiangzhou/1352/2018毒株感染小鼠的半数致死量(median lethal dose,LD_(50))及其对小鼠的致病性。结果表明,B/Guangxi-Jiangzhou/1352/2018毒株感染小鼠的LD_(50)为10^(5.9) TCID_(50)(median tissue culture infective dose),小鼠肺脏中病毒滴度在感染后1 d达到高峰,炎性细胞因子的mRNA水平在感染后12 h达到高峰,且感染后肺脏中的肺泡损伤严重,有大量炎性细胞浸润。本研究证明了IBV临床毒株B/Guangxi-Jiangzhou/1352/2018可以感染小鼠并诱发典型的肺脏炎症,为研究IBV致病及传播机制奠定了基础,为评价新型流感疫苗、抗病毒和抗炎症药物提供了理想的动物模型。

江苏省2019—2022年乙型流感病毒Victoria系HA基因特征分析

目的分析江苏省2019—2022年乙型流感病毒Victoria系流行特征,了解其基因变异情况,监测江苏省流感活动水平和流行趋势。方法通过"中国流感监测信息系统"收集的江苏省2019—2022年流感样病例监测数据,选取16株乙型流感病毒Victoria系毒株进行全基因组测序,利用MEGA 7软件构建进化树并进行HA基因序列特征分析。结果江苏省2019—2022年监测到的流感病毒中乙型流感病毒Victoria系占绝对优势。16株标本株中2019—2020年度的毒株在V1A.3早期分支,而2021—2022年度的毒株则聚类在3a.2亚型分支。与疫苗株相比,2019—2020及2020—2021年度的毒株发生了1个氨基酸位点的改变并增加了1个糖基化位点,而2021—2022年度的毒株则存在多个位点变异,其中H122Q、A127T、R133G、P144L、N150K、S194D及K200R位于抗原决定簇上。结论江苏省乙型流感病毒Victoria系在多处基因位点发生了变异,提示对该亚型变异的持续监测至关重要,可为疫苗的更新提供重要依据。

杭州地区不同谱系乙型流感病毒流行特征

目的 了解杭州地区乙型流感病毒2个不同谱系的流行情况及对不同年龄段人群造成的影响。方法 收集杭州地区2013年10月—2019年9月流感样病例12 611例,real-time RT-PCR检测乙型流感病毒。对乙型流感病毒的流行模式和患者的年龄分布进行统计学分析。结果 2013年以来,杭州地区每年都有乙型流感病毒的流行,每个流感季以单一谱系的乙型流感病毒流行为主。Yamagata季和Victoria季的出现没有明显的规律性。仅2017年—2018年流感季出现了乙型流感病毒疫苗株与流行株不匹配的情况,但患者中位数年龄和发病率都没有显著的改变。单一谱系乙型流感病毒显著流行的流感季5岁~9岁年龄段人群发病率最高(P<0.001),2种谱系共同流行的流感季10岁~14岁年龄段人群发病率最高(P<0.001)。Victoria季乙型流感患者的中位数年龄最低(8岁,P<0.001),而Yamagata季65岁以上老人的发病率高于其他季节(P<0.001)。结论 乙型流感病毒不同流行模式下患者的年龄分布不同。应该根据不同的流行模式和主要影响的人群制定不同的乙型流感病毒防控措施。

2021年—2022年宁夏Victoria系乙型流感病毒基因特性分析

目的了解2021年—2022年宁夏Victoria系乙型流感病毒基因变异情况,为宁夏流感防控提供参考依据。方法采集流感样病例标本进行核酸检测和病毒分离,对30株Victoria系乙型流感毒株的HA和NA片段进行基因测序,利用生物信息学软件分析进化变异特征。结果30株宁夏Victoria系乙型流感毒株HA和NA基因在进化上与疫苗株B/Washington/02/2019(2020—2022)亲缘关系较近,属于V1A.3分支。HA基因的核苷酸和氨基酸同源性分别为98.5%~99.0%和98.0%~98.6%;NA基因的核苷酸和氨基酸同源性分别为99.0%~99.4%和98.9%~99.6%。与疫苗株B/Washington/02/2019相比,多数毒株在HA区有H122Q、A127T、R133G、G141R、P144L、N150K、G184E、N197D、K203R和R279K突变,涉及3个抗原表位,并在受体结合位点140-loop、190-helix及240-loop处存在突变位点。所有毒株均未发生耐药位点变异。结论2021年—2022年宁夏Victoria系乙型流感病毒与本年度疫苗株亲缘关系较近,但其HA蛋白的重要氨基酸位点发生多处变异,可能导致流感病毒发生抗原性漂移,减弱疫苗的保护作用。

2021-2022监测年度枣庄市乙型流感病毒Victoria系全基因组测序分析

为了解山东省枣庄市2021-2022监测年度乙型流感病毒Victoria系的流行情况,分析病毒全基因组遗传特征,了解病毒进化变异特点,分析与疫苗株的相似程度,为流感的防控提供参考依据。从枣庄市流感监测网络实验室分离的流感毒株中随机选取10株B/Victoria系毒株,以WHO推荐的B/Victoria流感疫苗株B/Washington/02/2019(2020-2022北半球疫苗代表株)为参考进行全基因序列测定,利用生物信息学软件构建进化树,并分析分子进化特征。2021年4月-2022年3月,枣庄市流感病毒监测阳性率为17.03%(202/1186),均为B/Victoria系流感。将枣庄市分离的10株B/Victoria系毒株序列与北半球疫苗代表株B/Washington/02/2019相比血凝素(Hemagglutinin,HA)基因核苷酸同源性为99.5%~100%,HA基因氨基酸同源性为99.7%~100%;HA进化树分析中,该10株B/Victoria系毒株与疫苗代表株B/Washington/02/2019同属于1A分支;但发现已有5处抗原表位突变,均发生在120-loop区122位、133位,150-loop区144位、150位,190-loop区197位;神经氨酸酶(NA)未发现关键氨基酸位点变异。NA抑制剂耐药位点均未发生变异,奥司他韦等药物治疗流感敏感。枣庄市2021-2022监测年度流行的流感病毒均为乙型Victoria系,与疫苗推荐株相比HA发生了抗原漂移,提示B/Victoria系疫苗株与本地区流行株的匹配度有所降低。枣庄地区流行的乙型流感病毒对药物奥司他韦和扎那米韦依然敏感。今后继续开展流感病毒分子进化特征监测是重要的,有利于了解乙型流感流行风险,以及对流感疫苗和治疗药物效果的影响。