云南边境禽流感H5N1亚型病毒血凝素基因分子结构特征分析

目的分析2003-2008年云南边境禽流感H5N1亚型病毒血凝素(HA)基因分子结构特征。方法对2003-2008年在云南边境采集境外禽类样品420份,做H5/N1亚型特异性RT-PCR及多重RT-PCR检测,对阳性样品中H5N1病毒HA基因进行RT-PCR扩增,克隆至pMD18-T载体测序,并与国内外已知参考毒株序列进行比对及系统发育分析。结果21份代表性病毒样品HA裂解位点序列存在4种不同排列方式,均具有高致病性禽流感病毒分子结构特征;HA受体结合位点、糖基化位点及表位关键性氨基酸位点存在变异;系统发育分析表明可划分为5个不同进化分枝(1、2.4、2.3.2、2.3.4、7)。结论2003-2008年云南边境外H5N1病毒间具有遗传差异,进化分枝2.3.4毒株为当地流行的优势毒株,不同进化分枝或同一进化分枝不同毒株HA基因存在变异。

禽流感H5N1亚型病毒感染BALB／c小鼠的免疫应答

目的研究禽流感H5N1病毒感染BALB／c小鼠后对宿主细胞免疫功能和细胞因子水平变化的影响，探讨禽流感H5N1病毒感染哺乳动物的免疫发病机制。方法选用鹅源禽流感H5N1病毒感染BALB／c小鼠，采用流式细胞仪检测血液和脾脏T淋巴细胞及其亚群的变化，采用ELISA检测血液中细胞因子（IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-18、IL-10、IL-2）及禽流感H5N1病毒特异性抗体的变化。结果禽流感H5N1病毒感染可引起对宿主短暂的、可恢复的细胞免疫功能损伤：血液CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞数量于染毒后第2～4天下降（第4天为最低值），脾脏T淋巴细胞数量于染毒后第5～8天下降（第6天为最低值），然后均逐渐恢复到正常水平。染毒后血液细胞因子变化表现为：血清IFN-γ、TNF-α水平下降，IL4、IL-18、IL-10水平上升，IL-2水平无明显变化。从感染第7天开始检测H5N1禽流感特异性抗体为阳性，抗体水平逐渐升高至实验结束的感染第14天。结论H5N1禽流感病毒感染可引起宿主T细胞免疫功能低下是其主要的免疫病理改变之一，细胞因子表达失平衡或过多的表达都可能对宿主产生免疫病理损伤。