对氨基水杨酸异烟肼对耐INH及PAS结核菌株的耐药实验观察

目的 了解对氨基水杨酸异烟肼 (PSNZ)对耐异烟肼 (INH)及对氨基水杨酸钠 (PAS)的结核菌株耐药情况。方法 用改良罗氏培养基观察 36株同时耐INH和PAS及 1 49株对INH和PAS敏感的结核菌株对PSNZ药敏结果。结果 36株耐INH和PAS的结核菌株在 1 μg/ml浓度下有 44.4%的菌株对PSNZ有效 ,1 49株对INH和PAS均敏感的结核菌株在 1 μg/ml浓度下有 96%的结核菌株对PSNZ敏感。结论 PSNZ对耐INH和 /或PAS的结核菌株仍显示一定程度的敏感 ,是一种独立的抗结核药物 ,可作为治疗耐多药结核病的有效药物之一。

RNA干扰INHα基因对绵羊颗粒细胞周期及凋亡相关基因表达的影响

旨在研究RNA干扰INHα基因对绵羊颗粒细胞周期及凋亡相关基因表达的影响,明确抑制素对绵羊颗粒细胞的局部调节作用,为今后提高动物的繁殖力奠定基础。选用1.0~1.5岁的小尾寒羊,从卵泡(3~7mm)中分离培养颗粒细胞,将siINHα和siNC(阴性对照)转染颗粒细胞,以未转染的细胞为空白对照(Control),利用脂质体介导法进行转染,荧光定量RT-PCR检测INHα基因的沉默效率、细胞周期和凋亡相关基因的变化,流式细胞仪检测细胞周期的分布变化。结果表明,siRNA转染绵羊颗粒细胞48h后,INHα基因的沉默效率达85%以上。与阴性对照相比,细胞周期相关基因Cyclin D1和CyclinB1mRNA的表达水平分别降低了0.2倍和0.7倍(P<0.05),而p21的mRNA表达水平升高了0.9倍(P<0.05);细胞凋亡通路中的促凋亡因子Bax、p53和Caspase3的mRNA表达量分别升高了1.8倍、3.6倍和0.4倍(P<0.05),而抗凋亡因子Bcl-2mRNA表达量不受影响,阴性对照与空白对照差异不显著(P>0.05)。与阴性对照相比,细胞周期的分布显著改变,干扰组G1细胞比例显著升高(P<0.05),S期细胞比例显著降低(P<0.05),而阴性对照与空白对照间无显著差异(P>0.05)。综上表明,INHα作为绵羊颗粒细胞中关键的调控因子,通过调控绵羊颗粒细胞的生长和凋亡参与调控绵羊卵泡排卵的过程。

显微镜下精索静脉结扎术联合麒麟丸对精索静脉曲张不育患者术后精液质量及血清INH B水平变化的影响

目的探讨显微镜下精索静脉结扎术联合麒麟丸对精索静脉曲张不育患者术后精液质量及血清抑制素B(INH B)水平变化的影响。方法选取2015年2月至2016年9月济南军区总医院收治的精索静脉曲张不育患者72例作为研究对象,随机数字表法分组,各36例。对照组采取显微镜下精索静脉结扎术,研究组采取显微镜下精索静脉结扎术+麒麟丸(共服用3个月)。统计两组临床疗效、精液质量(精液量、a+b级精子活力、精子密度、畸形精子所占比)、血清激素[INH B、睾酮(T)、黄体生成素(LH)、促卵泡激素(FSH)]水平,6个月～9个月后随访,统计两组配偶妊娠率。结果研究组总有效率(91.67%)较对照组(69.44%)高,差异具有统计学意义(P<0.05);治疗后两组精液量、a+b级精子活力、精子密度较治疗前增高,畸形精子所占比较治疗前降低,且研究组精液量、a+b级精子活力、精子密度较对照组高,畸形精子所占比较对照组低,差异具有统计学意义(P<0.05);治疗后两组血清INH B、T水平较治疗前增高,血清LH、FSH水平较治疗前降低,且研究组血清INH B、T水平较对照组高,血清LH、FSH水平较对照组低,差异具有统计学意义(P<0.05);治疗后6个月、9个月研究组配偶妊娠率(72.22%、77.78%)高于对照组(47.22%、55.56%),差异具有统计学意义(P<0.05)。结论联合采取显微镜下精索静脉结扎术及麒麟丸治疗精索静脉曲张不育,可以有效改善患者精液质量及血清INH B等激素水平,提高治疗效果及配偶妊娠率。

马铃薯转化酶抑制子St-inh cDNA克隆及在大肠杆菌中的表达和功能测定

用RT-PCR结合5’RACE方法从马铃薯(Solanum tuberosum L.)栽培种JH块茎中克隆了转化酶抑制子St-inh 全长cDNA。序列分析表明,St-inh 基因编码区全长663bp,编码221个氨基酸。将含St-inh 基因cDNA 的DNA 片段克隆到pET28a(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3)后成功实现了表达。基因表达产物与马铃薯栽培品种(系)E1、JH 试管块茎以及番茄果实的转化酶提取物共孵育结果显示,转化酶活性分别下降了34.3%、21%和33.8%,说明St-inh 的翻译产物具有转化酶抑制子功能。BLAST 基因序列分析表明,St-inh 与Kunitz-type C 类基因序列同源性达95%以上,T-COF-FEE 氨基酸序列对比分析显示,该基因编码的蛋白质具有典型的Kunitz-type 结构域[L,I,V,M]-X-D-X-[E,D,N,T,Y]-[D,G]-[R,K,H,D,E,N,Q]-X-[L,I,V,M]-X(5)-Y-X-[L,I,V,M],因此,Sit-inh 基因可能为Kunitz-type 家族成员。

云南省异烟肼耐药结核分枝杆菌katG和inhA基因突变特征

目的分析云南省异烟肼耐药结核分枝杆菌katG和inhA基因突变特征。方法采用PCR方法对云南省异烟肼耐药结核分枝杆菌进行katG和inhA基因扩增,并将扩增产物进行基因测序后比对分析。结果88株异烟肼耐药菌株中,耐药基因与表型药敏结果的符合率为82.95%(73/88),katG和inhA基因突变率分别为75.00%(66/88)和9.09%(8/88)。最为常见的基因突变位点为katG315(67.05%)和inhA-15(7.95%),katG315位点基因突变主要表现为Ser315Thr(59.09%,52/88)。耐多药与单耐异烟肼菌株中katG基因突变比例,差异有统计学意义(χ^(2)=4.190,P=0.041),而inhA基因及katG315、inhA-15位点基因突变比例,差异无统计学意义(P>0.05)。结论云南省异烟肼耐药以katG315和inhA-15基因突变为主,MDR菌株中katG基因突变率高于异烟肼单耐,目前基于基因突变的分子检测技术是检测异烟肼耐药的有效手段。

变应性鼻炎大鼠鼻黏膜中补体调节蛋白C_1-INH和CD46的表达

目的:检测补体调节蛋白C1-INH和CD46在变应性鼻炎大鼠鼻黏膜中的表达水平,探讨其参与变应性鼻炎病理过程的可能机制。方法:9只SD大鼠以0.1%卵清蛋白辅以氢氧化铝佐剂进行基础致敏,继之鼻部激发建立大鼠变应性鼻炎模型(AR组),另9只以生理盐水代替0.1%卵清蛋白作为对照组(N组)。取大鼠呼吸区鼻黏膜,采用Western印迹法检测组织中补体调节蛋白C1-INH和CD46的表达含量,进行对比。结果:Western印迹结果显示两组大鼠C1-INH和CD46均阳性表达,而AR组大鼠鼻黏膜中C1-INH表达低于N组(P<0.05),CD46表达则高于N组,差异显著(P<0.01)。结论:补体调节蛋白CD46和C1-INH可能参与了变应性鼻炎的病理过程,其调控作用可能与补体激活的经典途径有关。

遗传性血管性水肿患者C1 INH和C4测定结果

目的评估速率散射比浊法测定C1INH和C4的临床应用价值。方法应用速率散射比浊法测定60份(HAE23例,正常人37例)血清样本,并与免疫单扩散法比较。结果HAE患者的C1INH和C4水平与正常对照组比较有统计学显著性差异(P<0.01),两种方法测定结果的相关性良好(P<0.01)。速率散射比浊法批内变异系数小于4.6%,批间变异系数小于4.9%。结论速率散射比浊法测定血清C1INH和C4含量结果可靠,操作简便,适合于临床应用。

育龄女性卵泡早期INHb、FS、ACTa血清水平与年龄的相关性

目的:探讨育龄女性内分泌激素抑制素(INHb)、卵泡抑素(FS)、激活素(ACTa)随年龄而发生的变化趋势。方法:采用双抗体夹心酶联免疫吸附技术(Sandwich ELISA),检测97名无内分泌疾病的育龄妇女月经周期d 3血清中INHb、FS、ACTa水平,并分析其与年龄的相关性。结果:INHb随年龄增长而降低(r =-0.567,P<0.01),FS随年龄增长而升高(r =0.398,P<0.05),ACTa不随年龄而变化(r =0.179,P>0.05),但ACTa/FS随年龄增长而降低(r =-0.502,P<0.05)。结论:INH-FS-ACT系统随年龄增长而有一定的变化趋势,并可预示卵巢功能的减退。

结核杆菌inhA基因突变与肺痨康抗耐异烟肼肺结核的关系研究

目的:用全基因组重测序的方法研究药物干预后inh A基因的突变情况,探讨肺痨康抗耐异烟肼结核杆菌的分子机制与inh A基因突变的关系。方法:利用全基因组重测序技术对治疗后模型小鼠肺组织中结核杆菌基因组DNA进行重测序,以标准菌株(H37RV)为参考序列,定位inh A基因突变,筛选对比分析。结果:inh A基因突变相关的可能的突变碱基位点有三个,分别为C、C、A突变成T、A、C,标准菌株该位置碱基未见突变,其他实验组结核杆菌该位置碱基均有突变,且突变位置、基因组编码序列、基因均与模型组一致,另外在实验中发现多个单核苷酸多态性位点(SNPs)。结论:肺痨康抗耐异烟肼肺结核的分子机制与inh A基因回复突变关系不大,实验发现的SNPs需要进一步筛选研究。

山羊INHβB cDNA的克隆及序列分析

为了探索INHβB对山羊繁殖力影响的遗传基础,文章采用RT-PCR技术克隆出山羊INHβB cDNA序列、并使用分子生物学软件进行了序列分析。结果发现:山羊INHβB cDNA序列为1 499 bp,与GenBank中牛和绵羊相同区片段的同源性达96%以上,其CDS区为1 227bp,编码408个氨基酸、包含20个氨基酸信号肽、380个氨基酸成熟肽;在山羊INHβB cDNA序列中没有发现引起氨基酸变异的位点。

免疫比浊法测定人血清C_1^--INH的实验探讨

应用国产C1-INH抗血清及标准参考血清,自配试剂,建立了人血清C1-INH免疫比浊法,并对其方法学性能作了初步评价。本法简便、快速、灵敏,适合临床常规应用。测定范围为0.05—0.35g/L,最低检测限为0.025g/L,平均回收率为102.5％,批内CV为4.03-5.36％,批间CV为5.97％,本法与ELISA法和SIRD法比较呈现高度相关(r=0.713—0.921,P<0.01)。58例健康男女献血员(年龄18—46岁)参考值为0.271±0.032(X±S)g/L,和文献值相近。

助孕胶囊对PCO模型大鼠血清INH-ACT-FS系统的影响

目的:观察助孕胶囊对PCO模型大鼠血清性激素水平及INH-ACT-FS系统的影响,探讨其对PCOS的治疗作用并分析其可能的作用机制。方法:采用胰岛素联合HCG造模法制备PCO模型大鼠。随机分为对照组、模型组、助孕胶囊组、二甲双胍组。运用放射免疫法测定血清性激素、胰岛素(INS)水平;双抗体夹心酶联免疫吸附法测定血清抑制素(INHB)、激活素(ACTA)及卵泡抑素(FS)的水平。结果:助孕胶囊可明显下调PCO大鼠血清睾酮(T)、促黄体生成素(LH)、INS水平;并能上调血清ACT水平,降低血清INH、FS水平;且INS与ACTA呈负相关,与INHB呈正相关。结论:INH-ACT-FS系统在多囊卵巢的发生、发展中起重要作用;高胰岛素血症与INH-ACT-FS系统有关;助孕胶囊能够通过调整H-P-O轴及影响卵巢局部细胞因子INH、ACT、FS的表达,从而调节生殖内分泌,促进卵泡的发育、成熟及排卵。

补肾解郁清心方结合针刺对围绝经期抑郁症患者ACT-INH-FS通路的影响

目的探讨补肾解郁清心方结合针刺治疗围绝经期抑郁症患者疗效及对激活素(ACT)-抑制素(INH)-卵泡抑素(FS)(ACT-INH-FS)通路的影响。方法将60例围绝经期抑郁症患者随机分成中药组和针药组各30例,中药组给予补肾解郁清心方口服,针药组给予补肾解郁清心方口服+针刺治疗,2组疗程均为12周。分别在治疗前及治疗12周末对2组患者进行HAMD评分和改良Kupperman量表评分,并检测血清性激素[卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E_2)及黄体生成素(LH)]、ACT、INH、FS水平。结果 2组治疗后HAMD评分、改良Kupperman量表评分均明显降低(P均<0.05),且针药组均明显低于中药组(P均<0.05)。2组治疗后FSH、LH、FS、ACTA水平均明显降低(P均<0.05),针药组治疗后E_2、INHB水平均明显升高(P均<0.05),针药组治疗后FSH、LH、E_2、FS、ACTA、INHB改善情况均明显优于中药组(P均<0.05)。针药组有效率明显高于中药组(P<0.05)。结论补肾解郁清心方单用和补肾解郁清心方联合针刺治疗均能缓解患者围绝经期抑郁症状,降低血清FSH、LH、FS、ACTA水平,但针药联合治疗疗效更好,且能提高血清E_2、INHB水平,对ACT-INH-FS通路影响更明显,可以更好地发挥抗抑郁作用。

抗人C_1~—-INH单克隆抗体的制备及其在分离人血清中C_1~—-INH的应用

本文以C_1~—抑制物免疫的BALB/c小鼠脾细胞,与SP 2/0骨髓瘤细胞在50％PEG的作用下融合,获得三株分泌抗人C_1~—抑制物单克隆抗体的杂交瘤细胞系(A8、F7、G10)。用ELISA测定杂交瘤细胞培养上清及其所诱生的小鼠腹水,特异性抗体效价分别为10^(-2)～10^(-3)及10^(-4)～10^(-6)。抗原阻断试验及取代试验结果表明,这些单抗是C1~—抑制物特异的。杂交瘤细胞液氮冻存半年以上,复苏后仍稳定分泌特异性抗体。经鉴定三株单抗均属IgG1。以F7制成亲和层析柱,分离纯化血清中的C_1~—抑制物,经SDS-PAGE及免疫印迹试验证明,有较高的纯度和良好的活性。本文为今后开展C_1~—抑制物的基础理论及临床应用研究,提供了方便条件。

哈萨克羊INHβA基因克隆及生物信息学分析

试验旨在克隆哈萨克羊抑制素βA(inhibin beta A,INHβA)基因序列,并探究其序列特征及编码蛋白的结构和功能。根据GenBank中绵羊INHβA基因序列(登录号:NM_001009458.1)设计1对特异性引物,通过RT-PCR方法对哈萨克羊INHβA基因进行扩增,将获得的INHβA基因片段插入到pMD19-T载体中进行克隆测序,并结合生物信息学方法预测和分析其核苷酸序列、氨基酸序列、蛋白跨膜、蛋白修饰位点及二级结构、三级结构模型等。结果显示,哈萨克羊INHβA基因长1 278 bp,编码425个氨基酸。哈萨克羊INHβA基因与绵羊、牛、野猪、小鼠、人、大鼠、猫、兔、马的同源性分别为98.6%、97.7%、90.4%、87.9%、91.1%、88.2%、91.8%、89.8%和91.8%,表明INHβA基因在不同物种之间具有较高的保守性。INHβA蛋白分子式为C_(2072)H_(3325)N_(603)O_(628)S_(26),分子质量为47.57 ku,理论等电点(pI)为7.87,不稳定系数为66.16,脂溶指数为78.47,亲水值为-0.507。INHβA是一种碱性不稳定的亲水性脂溶性蛋白,没有跨膜结构,含有信号肽。二级结构预测显示,INHβA蛋白α-螺旋、β-转角、无规则卷曲、延伸链分别占22.59%、4.47%、54.12%和18.82%。三级结构预测显示,INHβA蛋白以α-螺旋为主,是含有8种蛋白修饰位点的β-桶状蛋白。本试验结果为深入研究哈萨克羊INHβA蛋白功能及探讨INHβA基因对提高哈萨克羊繁殖力的影响提供参考数据。

抑制素βA(INHβA)在胃癌中过表达的临床病理意义

目的探讨抑制素βA(inhibinβA,INHβA)在胃癌中过表达的临床意义。方法采用免疫组化检测146例胃癌组织芯片中INHβA的表达,采用免疫组化和荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测HER2蛋白过表达和基因扩增,并结合患者的随访资料进行预后分析。结果61.6%(90/146)的胃癌呈INHβA过表达,显著高于正常胃黏膜(P<0.01)。胃癌中INHβA表达在不同肿瘤大小(P<0.05)、分化程度(P<0.01)、临床分期(P<0.05)以及有无淋巴结转移(P<0.01)之间差异有统计学意义。19.2%(28/146)和16.4%(24/146)的病例分别呈HER2蛋白表达和基因扩增,HER2蛋白表达/基因扩增在不同肿瘤部位、组织学类型之间表达差异有统计学意义(P<0.01)。INHβA过表达与HER2蛋白表达及基因扩增均显著负相关(分别r=-0.224,P<0.01;r=-0.175,P<0.05)。生存分析显示,INHβA+患者5年生存率显著低于INHβA-患者(P<0.05)。根据INHβA和HER2的表达可以将胃癌分为INHβA/HER2双表达组(INHβA+/HER2+)、单表达组(INHβA-/HER2+和INHβA+/HER2-)和双阴性组(HER2-/INHβA-),生存分析显示INHβA/HER2双表达的患者预后最差(P<0.01)。结论INHβA过表达可以作为判断胃癌预后不良的一项重要指标,INHβA和HER2不同表达模式为胃癌的个体化治疗提供了新的思路。

大足黑山羊与萨能奶山羊在发情周期内INH B、ACT A和FSH浓度变化

为了研究发情周期内血浆INH B（Inhibin B）、ACT A（Activin A）和FSH（Follicle stimulating hormone）浓度与山羊繁殖力之间的关系,以高繁殖力的大足黑山羊和低繁殖力的萨能奶山羊为研究对象,采用酶联免疫法（ELISA）测定血浆中INH B、ACT A和FSH浓度,比较两个山羊品种在一个发情周期内血浆中INH B、ACT A和FSH的分泌变化规律。研究结果显示：大足黑山羊和萨能奶山羊血浆中FSH的分泌与ACT A呈正相关,与INH B呈负相关,大足黑山羊在整个发情周期内血浆中的FSH平均浓度高于萨能奶山羊,INH B和ACT A平均浓度均低于萨能奶山羊。从发情症状明显至排卵前这段时间内,大足黑山羊血浆中FSH平均浓度显著高于萨能奶山羊（P〈0.05）。结果表明,发情周期内INH B、ACT A与FSH的差异可能是导致大足黑山羊和萨能奶山羊繁殖力差异的根本原因之一。推测ACT A主要作用可能是延长卵泡期,对于山羊排卵个数的影响不起主导作用。INH B可以抑制FSH的水平,从而间接的影响排卵数。

免疫INHα亚基对浙东白鹅产蛋性能和等级卵泡发育的影响

为了揭示抑制素对鹅产蛋性能和等级卵泡发育的影响,研究选取60只同批次即将开产的浙东白鹅(165日龄),平均分为2组,每组30只,试验组每只鹅免疫INHα亚基重组蛋白1 mg,对照组每只鹅免疫牛血清白蛋白1 mg。首先观察了第一个产蛋-就巢周期内产蛋和就巢情况以及血浆孕酮浓度变化,其次在第二个产蛋-就巢周期内检测了卵巢不同等级卵泡数量和等级卵泡颗粒层孕酮合成(FSHR、LHR、StAR、CYP11A1和3β-HSD)、卵黄沉积(OCLN)和细胞凋亡(FoxO3、Bax、Bcl-2和Caspase3)等相关基因的表达量变化。结果显示:免疫INHα亚基降低浙东白鹅的产蛋量和血浆孕酮水平,延迟就巢发生,增加等级前卵泡数量,下调等级卵泡颗粒层中LHR mRNA表达量,上调OCLN和FoxO3 mRNA表达量。结果表明INHα亚基在促进鹅等级卵泡颗粒层孕酮合成、卵黄沉积和细胞增殖方面发挥着重要作用,也表明免疫INHα亚基不利于家禽卵巢等级卵泡发育。