疏肝健脾方药对NASH大鼠Kupffer细胞NF-κB p65和IKKβ mRNA及蛋白表达的影响

目的:探讨疏肝健脾方药对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠Kupffer细胞核因子κB(NF-κB)p65和IκB激酶β(IKKβ)mRNA及蛋白表达的影响。方法:采用高脂饲料喂养复制大鼠NASH模型,在施以造模因素的同时分别灌服疏肝方(柴胡疏肝散)、健脾方(参苓白术散)和综合方(柴胡疏肝散和参苓白术散的合方)的高、低剂量进行干预,16周后分离Kupffer细胞,Typan blue染色和流式细胞术(FCM)分别对Kupffer细胞进行活性和纯度鉴定;实时定量PCR法检测Kupffer细胞IKKβ和NF-κB p65 mRNA的表达水平;Western blotting法检测Kupffer细胞IKKβ、p-IKKβ和NF-κB p65蛋白水平。结果:每只大鼠获得纯化的Kupffer细胞(1.5～2.0)×107,Typan blue染色显示这些细胞活力均在95%以上,FCM检测纯度均在90%以上;与正常组比较,模型组Kupffer细胞IKKβmR-NA及蛋白的表达水平均明显升高(P<0 01);与模型组比较,高剂量综合方、健脾方和疏肝方组IKKβmRNA的表达水平下调明显(P<0.01或P<0.05);IKKβ及磷酸化蛋白的表达水平以高剂量健脾方组下降最为显著(P<0.01或P<0.05);与正常组比较,模型组Kupffer细胞NF-κB p65 mRNA及蛋白的表达水平均明显升高(P<0.01),与模型组比较,NF-κB p65 mRNA的表达水平以综合方组及高剂量健脾方组下调明显(P<0.05),NF-κBp65蛋白的表达水平以高剂量健脾方组下降最为显著(P<0.01)。结论:Kupffer细胞IKKβ、NF-κB p65 mRNA及IKKβ、p-IKKβ、NF-κB p65蛋白的高表达可能参与NASH的发病,抑制这些信号分子的表达可能是疏肝健脾方药抗NASH的重要机制之一。

IκB激酶β在非酒精性脂肪性肝炎发病机制中的作用

目的:探讨IκB激酶β(inhibit kappa B kinase beta,IKKβ)在非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)大鼠肝组织中的表达及意义.方法:健康♂Wistar大鼠40只,随机分为正常对照组(n=20)和高脂模型组(n=20),分别给予标准饲料喂养和高脂饲料喂养.16 wk末空腹处死全部大鼠,收集血清和肝组织标本.检测血清中ALT、AST及ELISA法检测血清TNF-α水平;光镜下观察肝组织病理变化;RT-PCR和EMSA法分别检测肝组织IKKβmRNA表达和核因子-κB(NF-κB)活性改变.结果:模型组大鼠血清ALT、AST、TNF-α水平、肝组织IKKβmRNA表达及NF-κB活性均较正常对照组明显增强(96.63±14.2 U/L vs 39.50±12.2 U/L,156.13±14.7 U/L vs 71.25±14.4 U/L.48.23±3.4 U/L vs 6.74±1.3 U/L,0.85±0.03 vs 0.22±0.02.10.12±1.34 vs 1.58±1.23,P<0.01);病理则表现不同程度的脂肪变性、炎症、坏死及窦周纤维化与对照组相比有显著差异(25.63±7.21 vs 1.24±3.24,3.21±0.52 vs 0.49±0_36.6.26±1.86 vs 3.02±1.17,P<0.01).相关分析显示:肝组织IKKβmRNA的表达与NF-κB活性(r=0.930)、脂肪变性(r=0.681)和炎症坏死程度(r=0.864)以及血清TNF-α水平(r=0.762)正相关(P<0.05).结论:IKKβmRNA表达增加在NASH发病机制中发挥重要作用,其通过介导NF-κB活化,引起TNF-α的大量生成、释放,诱导加重NASH的发生发展.

GSK-3β抑制剂对糖尿病肾病大鼠肾组织病理、NF-κB及TGF-β1的影响

目的探讨糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)抑制剂对糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织病理、核因子-κB(NF-κB)及转化生长因子-β1(TGF-β1)的影响。方法将36只SD大鼠分为Tz组(DN模型)、Ty组(GSK-3β抑制剂干预)和Wt组(正常大鼠)各12只,观察比较3组大鼠24 h尿蛋白水平。采用苏木精-伊红(HE)染色观察肾组织结构改变情况,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测NF-κB mRNA表达水平,免疫组织化学(免疫组化)检测TGF-β1阳性表达情况,Western blot法检测NF-κB、TGF-β1蛋白的表达情况。结果Tz组及Ty组大鼠24 h尿蛋白水平均高于Wt组,Ty组大鼠24 h尿蛋白水平低于Tz组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Wt组大鼠肾组织内细胞结构、形态较完整,未观察到增生、肥大的细胞;Tz组大鼠肾小球、系膜基质生长异常,毛细血管管腔、肾小管管腔凹陷、阻塞,伴有间质水肿;Ty组大鼠肾小球和肾小管病变程度较Tz组有明显好转。Tz组、Ty组NF-κB、TGF-β1 mRNA水平高于Wt组,Ty组NF-κB、TGF-β1 mRNA水平低于Tz组,差异均有统计学意义(P<0.05)。免疫组化检测结果显示,Tz组TGF-β1阳性表达最高,Wt组TGF-β1阳性表达最低,Ty组TGF-β1阳性表达较Tz组明显降低,但高于Wt组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Tz组及Ty组NF-κB、TGF-β1蛋白表达水平高于Wt组,Ty组NF-κB、TGF-β1蛋白表达水平低于Tz组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论GSK-3β抑制剂能减缓糖尿病肾病大鼠肾损伤程度,降低肾组织中NF-κB和TGF-β1的表达。

白介素-1受体相关激酶-2反义寡核苷酸对白介素-1和肿瘤坏死因子激活核因子-κB的不同影响

目的 研究白介素 1受体相关激酶 2 (IRAK 2 )在白介素 1(IL 1)与肿瘤坏死因子 (TNF)激活核因子 κB(NF κB)过程中的作用。方法 IRAK 2反义寡核苷酸转染人胚肾细胞 (2 93细胞 ) ,阻断IRAK 2的表达 ,用IL 1及肿瘤坏死因子刺激细胞后 ,用夹心ELISA方法检测NF κB活性。结果 以IRAK 2反义寡核苷酸预处理可明显减弱IL 1诱导的NF κB活性 ,此效应强度存在时间和浓度依赖性 ,但I RAK 2反义寡核苷酸对肿瘤坏死因子诱导的NF κB活性无影响。结论 IRAK 2反义寡核苷酸对IL 1和TNF激活NF κB有不同影响。IRAK 2在IL 1诱导的NF

IκB激酶β在脊髓损伤后炎症反应机制中作用的研究进展

IκB激酶β(IKKβ)是核因子κB(NF-κB)信号通路中的关键激酶。在脊髓损伤后,IKKβ被活化,NF-κB信号通路异常激活,产生大量炎症因子,对脊髓损伤后的恢复产生不利影响。本文主要对IKKβ的结构功能及其在脊髓损伤后炎症反应中的应用进行综述,试图寻找一种治疗脊髓损伤的新靶点。

穿心莲内酯抑制IKK/IκBα/NF-κB信号通路改善抑郁症大鼠的抑郁样行为

目的探讨穿心莲内酯(Andro)通过抑制核转录因子-κB抑制蛋白激酶(IKK)/核因子κB抑制蛋白(IκBα)/核因子-κB(NF-κB)信号通路改善抑郁症(MDD)大鼠的抑郁样行为。方法随机取12只SD大鼠作为空白对照组(NC组),其余大鼠采用慢性不可预知轻度应激(CUMS)结合孤养模式造模,将造模成功大鼠随机平分为模型组(Mod组)、Andro组(25 mg·kg^(-1)·d^(-1))、Res组(30 mg·kg^(-1)·d^(-1)IKK/IκBα/NF-κB信号通路激活剂Res)、Andro+Res组(25 mg·kg^(-1)·d^(-1)Andro+30mg·kg^(-1)·d^(-1)Res),每组12只大鼠,Mod组和NC组灌胃等量0.9%氯化钠溶液。旷场实验、糖水偏好实验、强迫游泳实验、平衡木实验评估大鼠行为;ELISA法检测血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平;免疫荧光染色检测小胶质细胞、星形胶质细胞活性;Western blot检测NLRP3、cleaved-Caspase-1以及IKK/IκBα/NF-κB信号通路蛋白水平。结果与NC组相比,Mod组站立次数、饮用蔗糖量显著减少(P<0.05),游泳不动时间、通过平衡木时间、IL-1β、IL-6、TNF-α含量、Iba-1、GFAP阳性细胞数量、NLRP3、cleaved-Caspase-1、p-IKK/IKK、IκBα、p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白水平显著增加(P<0.05);与Mod组相比,Andro组大鼠游泳不动时间、通过平衡木时间、IL-1β、IL-6、TNF-α含量、Iba-1、GFAP阳性细胞数量、NLRP3、cleaved-Caspase-1、p-IKK/IKK、IκBα、p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白水平显著降低(P<0.05),站立次数、饮用蔗糖量显著增加(P<0.05),而Res组以上指标趋势相反(P<0.05);Res逆转了Andro对MDD大鼠抑郁样行为的改善。结论Andro可能通过下调IKK/IκBα/NF-κB通路对MDD大鼠的抑郁样行为起到一定的改善作用。

清热凉血方药抑制c-Jun氨基末端激酶2丝裂原活化蛋白激酶信号通路并下调角质形成细胞人β防御素-2的研究

目的:通过研究清热凉血中药对人永生化表皮细胞(Ha Ca T细胞)人β防御素(HBD)-2的表达及信号通路的调控作用,探讨其治疗银屑病的可能机制。方法:用白细胞介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α的混合物刺激Ha Ca T细胞建立信号通路活化及HBD-2高表达的Ha Ca T细胞模型;分别用清热凉血中药、维A酸和生理盐水进行干预,用实时荧光定量核酸扩增法(q PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)测定清热凉血中药对细胞模型中HBD-2表达水平的影响;用免疫印迹法(westen blot)检测清热凉血中药对细胞模型中HBD-2及丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)和核转录因子kappa B(NF-κB)信号通路的影响。结果:(1)中药血清高剂量组和维A酸血清组均可明显下调Ha Ca T细胞模型中HBD-2m RNA的表达,抑制率分别为66.8%和73.5%,与细胞模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01),中药血清高剂量组和维A酸血清组比较差异无统计学意义(P>0.05);(2)中药血清高剂量组与维A酸血清组均可抑制细胞培养上清中HBD-2的分泌,与细胞模型组比较,抑制率分别为35.6%和61.6%;(3)100 mg/L的IL-1β和TNF-α混合物作用18 h后可使Ha Ca T细胞中的cJun氨基末端激酶(JNK)2 MAPK信号通路活化;清热凉血中药血清可以明显下调磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)2蛋白的相对含量,抑制JNK2 MAPK信号通路的活化。结论:清热凉血方药可明显下调HBD-2高表达的Ha Ca T细胞模型及培养上清中HBD-2的表达。清热凉血方药可以抑制JNK2 MAPK信号通路,并阻断IL-1β和TNF-α对HBD-2的激活。

信号通路调控子宫内膜异位症的研究进展

子宫内膜异位症(EMs)是育龄妇女中的常见病、疑难病,发病机制错综复杂,极具侵袭性,易转移和复发,治疗效果不甚满意,而针对其发生发展机制的研究,寻找有效治疗方法是目前妇科领域研究的焦点。近年来研究发现,异位内膜细胞的上皮间质转化、黏附侵袭和血管生成过程是EMs发生发展中的重要机制,在此过程中有多条信号通路的调控,如转化生长因子β(TGF-β)/Smad、Notch、核因子κB(NF-κB)、Wnt/β连环蛋白(β-catenin)、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)。阐述EMs发病过程中涉及的相关信号通路研究,为临床防治EMs提供新的思路。

Aβ_(1~42)诱导K_(ATP)亚基SUR1/Kir6.2蛋白表达的信号转导通路研究

目的分析探讨β-淀粉样蛋白_(1~42)(Aβ_(1~42))诱导ATP敏感性钾离子通道(K_(ATP))亚基SUR1/Kir6.2蛋白表达上调的潜在信号转导机制。方法采用免疫细胞化学法鉴定原代培养的大鼠皮质和海马神经元,实验组分别加入0.50μmol/L核因子-κB(NF-κB)抑制剂SN50、2μmol/L p38丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)抑制剂SB203580或者2μmol/L蛋白激酶C(PKC)抑制剂CTC,于30 min后分别加入2μmol/L Aβ_(1~42),培养72 h后采用Western blotting法检测K_(ATP)亚基SUR1/Kir6.2蛋白的相对表达量。结果(1)NF-κB抑制剂SN50:SN50+Aβ_(1~42)组SUR1/Kir6.2蛋白表达量低于对照组(t=6.237,P=0.010;t=7.136,P=0.004)和Aβ_(1~42)组(t=12.620,P=0.000;t=18.580,P=0.000),SN50组SUR1/Kir6.2蛋白相对表达量低于对照组(t=12.240,P=0.000;t=4.906,P=0.034)、Aβ_(1~42)组(t=18.620,P=0.000;t=16.350,P=0.000)和SN50+Aβ_(1~42)组(t=6.002,P=0.012)。(2)p38 MAPK抑制剂SB203580:SB203580+Aβ_(1~42)组SUR1/Kir6.2蛋白相对表达量低于Aβ_(1~42)组(t=13.010,P=0.000;t=8.506,P=0.001),仅Kir6.2蛋白相对表达量高于对照组(t=7.537,P=0.003);SB203580组SUR1/Kir6.2蛋白相对表达量低于对照组(t=8.089,P=0.002;t=19.380,P=0.000)、Aβ_(1~42)组(t=18.870,P=0.000;t=35.430,P=0.000)和SB203580+Aβ_(1~42)组(t=5.869,P=0.014;t=26.920,P=0.000)。(3)PKC抑制剂CTC:CTC+Aβ_(1~42)组SUR1蛋白相对表达量高于对照组(t=4.756,P=0.040)、但低于Aβ_(1~42)组(t=15.170,P=0.000),CTC组SUR1蛋白相对表达量低于对照组(t=24.000,P=0.000)、Aβ_(1~42)组(t=43.930,P=0.000)和CTC+Aβ_(1~42)组(t=28.760,P=0.000);CTC+Aβ_(1~42)组Kir6.2蛋白相对表达量低于对照组(t=15.000,P=0.000)和Aβ_(1~42)组(t=24.140,P=0.000),CTC组Kir6.2蛋白相对表达量低于对照组(t=9.429,P=0.001)和Aβ_(1~42)组(t=18.570,P=0.000)、但高于CTC+Aβ_(1~42)组(t=5.571,P=0.018)。结论NF-κB、p38 MAPK和PKC信号转导通路参与Aβ_(1~42)上调大鼠皮质和海马神经元K_(ATP)亚基SUR1/Kir6.2蛋白的表达。

氯化镧对肿瘤坏死因子α诱导的核因子κB抑制因子激酶β活化的调控作用

目的分析氯化镧对TNF—α诱导的NF—KB抑制因子（IKB）激酶B（IKKβ）活化的调控作用。方法（1）体外培养Hela细胞，按照随机数字表法分为TNF-α对照组，以含20ng／mL TNF-α【的无血清RMPI1640培养液恒温培养30min；小剂量氯化镧＋TNF-α组、中等剂量氯化镧＋TNF-α组、大剂量氯化镧＋TNF-α组，3组细胞分别以含5、25、100txmol／L氯化镧的无血清RMPI1640培养液恒温培养4h后，加入含20ng／mLTNF-α的无血清RMPI1640培养液继续培养30min；氯化镧对照组，以含100Ixmol／L氯化镧的无血清RMPI1640培养液恒温培养30min；空白对照组，以无血清RMPI1640培养液恒温培养30rain，各组样本数均为3。收集各组细胞，免疫细胞荧光染色观察NF—KB／p65蛋白转位情况。（2）另取Hela细胞，同上分为5组，即TNF-α【对照组、小剂量氯化镧＋TNF．a组、中等剂量氯化镧＋TNF-α组、大剂量氯化镧＋TNF-α,组、空白对照组并行相同处理，各组样本数均为3，采用蛋白质印迹法检测胞核中NF—KB／p65蛋白表达以及胞质中IKBtx、IKKD与磷酸化IKKβ、IKKp（p-IKKβ、p-IKKp）蛋白表达；采用NF—KB／p65转录因子试剂盒检测胞核中NF—KB／p65蛋白与靶基因结合的活性，数据以吸光度值表示。对数据进行方差分析、LSD—t检验。结果（1）空白对照组胞质中NF—KB／p65表达较强；TNF-α对照组胞核中NF-KB／p65表达较强；氯化镧对照组胞质中NF—KB／p65较空白对照组减弱；3种剂量氯化镧＋TNF一“组间比较，胞核和胞质中的NF—KB／p65表达量随着氯化镧浓度的升高而减弱，总体表达明显弱于TNF-“对照组。（2）空白对照组胞核中也有一定量的NF．KB／p65蛋白表达，TNF-α对照组胞核中NF—KB／p65蛋白表达强于空白对照组；3种剂量氯化镧＋TNF-α组间比较，胞核中NF．KB／p65蛋白表达随着氯化镧浓度升高逐渐减弱。TNF-α对照组IKBCt表达水平较空白对照组明显下降，而p-IKKβ明显上升；3种剂量氯化镧＋TNF-α组间比较，随着氯化镧浓度的升高，IKBct表达水平逐步升高，而p-IKKβ水平逐渐降低。IKKβ的表达在各组无明显差异。空白对照组p-IKKβ几乎不表达，TNF-α对照组p-IKKβ水平明显升高；3种剂量氯化镧＋TNF-α组间比较，随着氯化镧浓度的升高，p-IKKβ水平逐渐下降。TNF-α对照组NF—KB／p65蛋白与靶基因结合的活性为0．394-0．03，明显高于空白对照组（0，t=-7．23，P〈0．01）；小剂量氯化镧＋TNF-α组、中等剂量氯化镧＋TNF-α．组、大剂量氯化镧＋TNF-α组NF—KB／p65蛋白与靶基因结合的活性分别为0．17-I-0．03、0．154-0．03和0，均显著低于TNF-α对照组（t值分别为一6．54、一5．92、一7．23，P值均小于0．01）。结论氯化镧能通过阻断Hela细胞中IKKβ磷酸化，进而阻断NF-KB信号通路的活化。

TIPE2在脓毒症小鼠急性肺损伤内源性保护机制中的作用:与TAK1/p38MAPK/NF-κB信号通路的关系

目的评价肿瘤坏死因子α诱导蛋白家族8-样蛋白2(TIPE2)在脓毒症小鼠急性肺损伤内源性保护机制中的作用及其与转化生长因子-β激活的蛋白激酶(TAK1)/p38-丝裂原活化的磷酸激酶(p38 MAPK)/NF-κB信号通路的关系。方法雄性野生型小鼠和TIPE2基因敲除小鼠各16只,6~8周龄,体重20~25 g,采用随机数字表法分别分为野生型假手术组(WT-sham组)、野生型ALI组(WT-ALI组)、TIPE2基因敲除型假手术组(KO-sham组)和TIPE2基因敲除急性肺损伤组(KO-ALI组),每组8只。采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症小鼠急性肺损伤模型。于术后24 h时处死小鼠并留取左侧颈总动脉血标本和肺组织标本。HE染色观察肺组织病理结果并进行肺损伤评分;采集左侧颈总动脉血进行血气分析并计算氧合指数(OI);检测每组小鼠肺泡灌洗液中性粒细胞(PMN)计数;采用Western blot法检测肺组织TIPE2、p-TAK1、p-p38 MAPK和p-NF-κB p65的表达;ELISA法检测血清IL-1β和IL-6的浓度。结果与WT-sham组比较,WT-ALI组和KO-ALI组小鼠肺损伤评分、PMN计数、肺组织p-TAK1、p-p38 MAPK和p-NF-κB p65表达水平和血清IL-1β和IL-6浓度升高,PaO_(2)、OI和肺组织TIPE2表达水平降低(P<0.05);与WT-ALI组比较,KO-ALI组小鼠肺损伤评分、PMN计数、肺组织p-TAK1、p-p38 MAPK和p-NF-κB p65表达水平和血清IL-1β和IL-6浓度升高,PaO_(2)、OI和肺组织TIPE2表达水平降低(P<0.05)。结论TIPE2参与了脓毒症小鼠急性肺损伤的内源性保护机制,与抑制TAK1/p38 MAPK/NF-κB信号通路激活有关。

白细胞介素-1β和核因子κB激酶亚基β的抑制剂高表达对中国肝癌分期Ⅰ~Ⅱ期肝细胞癌患者术后预后的影响

目的探讨肿瘤组织中白细胞介素-1β(IL-1β)和核因子κB激酶亚基β的抑制剂(IKKβ)的表达与肝细胞癌(HCC)患者术后预后的关系。方法采用免疫组织化学方法检测87例于2000年1月至2012年12月在青岛大学附属医院接受手术切除的HCC患者肿瘤组织中IL-1β和IKKβ的表达。使用统计学相关性分析及卡方检验的方法分析IL-1β和IKKβ表达与临床病理因素的相关性以及与预后的关系。结果 IL-1β和IKKβ表达量在HCC中呈正相关(r=0.229,P<0.05)。IKKβ的高表达以及IL-1β和IKKβ共同高表达的患者总体生存期更长[(86.507±7.749)个月比(54.471±6.275)个月、(92.272±8.409)个月比(58.723±6.710)个月],差异有统计学意义(χ^(2)=4.456、6.160,P<0.05);IL-1β、IKKβ的高表达以及IL-1β和IKKβ共同高表达的患者无瘤生存期更长[(36.886±3.862)个月比(14.792±4.491)个月、(39.790±4.707)个月比(21.473±3.617)个月、(44.942±5.155)个月比(20.957±3.284)个月],差异有统计学意义(χ^(2)=11.416、7.987、11.594,P<0.05)。此外,多变量Cox回归模型显示IL-1β和IKKβ的表达水平是总体生存期的独立风险因素[风险比(HR)=0.462,95%可信区间(CI):0.225~0.946,P<0.05],天冬氨酸氨基转移酶水平以及IL-1β和IKKβ共同表达水平是无瘤生存期的独立风险因素(HR=1.821,95%CI:1.060~3.129,P<0.05;HR=0.529,95%CI:0.282~0.991,P<0.05)。结论 IL-1β和IKKβ高表达有利于肝细胞癌患者预后。

β淀粉样蛋白25-35诱导的大鼠嗜铬细胞瘤细胞凋亡过程中核因子кB激活的调控

目的 探讨β淀粉样蛋白（amyloid-β,Aβ）25-35诱导的大鼠嗜铬细胞瘤细胞（PC12）凋亡过程中核因子кB（nuclear factor кB,NF-кB）的活化与蛋白激酶B（Akt）和糖原合成酶激酶3β（glycogen synthase kinase 3β,GSK-3β）之间的关系.方法 用Aβ（25-35）诱导PC12细胞凋亡,并分析在此过程中Akt、GSK-3β以及NF-кB的活性变化.在Aβ（25-35）诱导PC12细胞凋亡过程中,分别阻断Akt通路和GSK-3β通路,测定细胞活性以及Akt、GSK-3β、NF-кB的关系.结果 Aβ（25-35）诱导细胞凋亡过程中,细胞凋亡率与Aβ（25-35）的用量呈现剂量依赖关系,用0、5、10、20、40μmol/L Aβ（25-35）处理PC12细胞48 h后,细胞的凋亡率分别为（3.01±0.03）%、（3.08±0.03）%、（25.32±0.76）%、（42.88±0.60）%、（60.85±2.39）%.与对照组比较,Aβ（25-35）诱导细胞凋亡过程中NF-кB被激活,而Akt、GSK-3β的活性则均受到抑制.用渥曼青霉素（wortmannin）抑制Akt的活性可引起NF-кB活性的下降.GSK-3β活性上升.用GSK-3β的特异性抑制剂氯化锂（LiC1）抑制其活性,则NF-кB活性同样下降.而对Akt的活性无显著影响.结论 Akt和GSK-3β都是NF-кB的上游调节因子,他们共同调控Aβ（25-35）诱导的PC12细胞凋亡过程中NF-кB的活化.这些结果有助于更好地理解阿尔茨海默病的发病机制,并对其防治提供新的思路.

转化生长因子β激活激酶1抑制剂对糖尿病小鼠肾脏的保护作用及机制

目的探讨转化生长因子β激活激酶1（TGF-βactivated kinase-1，TAK1）抑制剂（5Z-7-oxozeaenol，OZ）对糖尿病db／db小鼠肾脏的保护作用及机制。方法健康雄性db／db小鼠随机分为db／db组（n=12）和db／db＋OZ组（n=12），另取WT小鼠（n=12）作为对照组。OZ2mg／kg隔日腹腔注射。第8、12周末测定血糖、体质量、肾质量及24h尿白蛋白排泄率；光镜、电镜观察。肾组织病理改变；免疫组化检测NF—kBp65、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）与TNF-α表达；Western印迹检测磷酸化（P）-TAK1、转化生长因子B活化激酶结合蛋白1（TAB1）、p-p38MAPK及白细胞介素1p（IL-1p）蛋白表达；实时定量PCR检测细胞间细胞黏附分子1（ICAM-1）与MCP-1mRNA表达。结果8～12周时db／db小鼠血糖、体质量、肾质量及24h尿白蛋白排泄率显著高于对照组（P〈0．01），而db／db＋OZ组上述指标低于db／db组（P〈0．05）。8～12周db／db小鼠病理形态学表现为肾小球体积增大、细胞外基质增多，TAKl抑制剂可显著改善肾组织病理改变。免疫组化显示8～12周时db／db小鼠肾组织NF—KBp65、MCP-1和TNF-α表达显著高于对照组（P〈0．05），而db／db＋OZ组上述指标显著低于db／db组（P〈0．05）。Western印迹结果显示8—12周时db／db组小鼠p-TAKl、TAB1、p-p38MAPK和IL-1β蛋白表达显著高于对照组（P〈0．05），而db／db＋OZ组上述指标低于db／db组（P〈0．05）。实时定量PCR结果显示，db／db小鼠ICAM-1、MCP-1mRNA表达显著高于对照组（P〈0．01），而db／db＋OZ组上述指标显著低于db／db组（P〈0．05）。结论TAK1抑制剂可能通过抑制MAPK及NF—KB信号通路来抑制炎性反应，从而减轻糖尿病肾脏损伤。

磷脂酰肌醇3激酶对TNF-α诱导的大鼠气道平滑肌细胞增殖、凋亡和转化生长因子β1表达的影响

目的探讨磷脂酰肌醇3激酶(PB-K)对TNF-α诱导的大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)增殖、凋亡和转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。方法以肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及PI3-K特异性抑制剂wortmannin作为工具药,分别将TNF-α、TNF-α+wortmannin接种ASMC,置37℃,5％CO_2培养箱中培养。逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测PB-K p85α、TGF-β1 mRNA表达,免疫细胞化学染色法检测PI3-K p85α、PCNA、Bcl-2蛋白表达及定位,Sandwich ELISA检测NF-κB活性,四甲基偶氮唑蓝(MTY)微量比色法测定ASMC增殖,Annexin V/PI双标记流式细胞仪分析法检测细胞凋亡,ELISA测定TGF-β1蛋白质含量。结果(1)培养的ASMC PB-K p85α的阳性定位在胞浆。TNF-α组ASMC PI3-K p85αmRNA及蛋白表达水平均显著高于对照组及TNF-α+wortmannin组(P＜0．01)；(2)TNF-α组ASMC NF-κB活性与对照组相比显著增高(P＜0．01),TNF-α+wortmannin组NF-κB活性与TNF-α组相比显著降低(P＜0．01)；(3)TNF-α组ASMC的增殖反应与对照组及TNF-α+wortmannin组相比显著增加(P＜0．01)；TNF-α组细胞凋亡率与对照组相比差异无统计学意义(P＞0．05),TNF-α+wortmannin组细胞凋亡率显著高于TNF-α组及对照组(P＜0．01)。(4)TNF-α组ASMC的PCNA、Bcl-2蛋白表达量均显著高于对照组及TNF-α+wortmannin组(P＜0．01)；(5)TNF-α组ASMC的TGF-β1的mRNA表达水平、培养液上清TGF-β1的蛋白质含量均显著高于对照组及TNF-α+wortmannin组(P＜0．01)。结论P13-K可能参与调控TNF-α诱导的大鼠气道平滑肌细胞的增殖、凋亡及TGF-β1的表达和分泌,NF-κB作为PI3-K的下游信号参与此过程。