次苷酸查尔酮对LPS诱导的RAW264.7细胞iNOS和COX-2表达的影响

补骨脂为豆科植物补骨脂(Psoraleacorylifolia L.)果实,具有温肾助阳、温脾止泻的功效[1],临床上被用于治疗皮肤病、肾炎、骨折等[2-3]。次苷酸查尔酮(corylifol A,CYA)是中药补骨脂的活性成分之一,是一种异黄酮类化合物,具有抗炎、抗菌、抗氧化、抗骨质疏松的特性[4-5]。有研究表明,CYA能明显抑制破骨细胞的分化,且能明显降低LPS诱导的巨噬细胞一氧化氮(NO)的生成[6-7]。

ILC2和MDSC及其相关细胞因子IL-13和iNOS在宫颈癌中的表达及其列线图模型的构建和评价

目的:研究2型固有淋巴样细胞(ILC2)和髓源性抑制细胞(MDSC)及其相关细胞因子IL-13和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在宫颈癌(CC)中的表达,并基于其构建CC发病风险的列线图预测模型。方法:采集2022年5月至2024年1月在新疆医科大学第一附属医院手术切除的40例CC组织及100例外周血作为CC组,选取同期收治的30例子宫肌瘤经CC筛查为阴性的宫颈组织和100例正常健康个体外周血作为对照组。用多重免疫荧光技术(mIF)及免疫组化染色(IHC)法检测两组组织中ILC2和MDSC细胞浸润及其相关细胞因IL-13和iNOS的表达;使用流式细胞术和ELISA技术分别检测两组外周血中ILC2和MDSC及IL-13和iNOS的表达差异;通过Person相关性分析评估其相关性;使用单因素和多因素Logistic分析来确定ILC2和MDSC及IL-13和iNOS是否为CC发病的独立危险因素,再利用R软件建立免疫预测模型,使用ROC曲线下面积(AUC值)、Hosmer-Lemeshow检验、校准曲线、临床决策曲线和临床影响曲线来分别评估模型。结果:CC组中ILC2及MDSC及其相关细胞因子IL-13和iNOS均高于对照组(均P<0.05),且其均呈正相关(均P<0.05);经过单因素及多因素Logistic回归分析显示,ILC2、MDSC及IL-13、iNOS均是CC发病的独立危险因素(均P<0.05);基于这些危险因素的CC发病列线图,经过验证提示,该列线图模型具有一定的临床实用价值。结论:ILC2和MDSC及其相关的细胞因子IL-13和iNOS在CC组织及外周血中均呈高表达,基于这些危险因素构建的预测模型具有良好的预测能力和一定的实用性,为CC的早期诊断和治疗提供了一种简便有效的辅助工具。

PS-MPs和DEHP联合暴露通过NO/iNOS/NF-κB通路诱导小鼠结肠上皮细胞自噬的作用机制研究

【目的】探究聚苯乙烯微塑料(PS-MPs)和邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)联合暴露通过NO/iNOS/NF-κB通路诱导小鼠结肠上皮细胞(MCEC)自噬的作用机制。【方法】依据CCK-8法测定的PS-MPs和DEHP对MCEC的半数抑制浓度(IC 50),将MCEC分为5组:对照组、PS-MPs组、DEHP组、联合组和抑制组,各组MCEC分别用培养基及含有200μg/L PS-MPs、100μmol/L DEHP、200μg/L PS-MPs+100μmol/L DEHP、200μg/L PS-MPs+100μmol/L DEHP+5 nmol/L硼替佐米(PS-341)的培养基处理24 h后,采用生化试剂盒检测NO含量及iNOS活性,通过MDC法检测自噬小体,利用免疫荧光染色、实时荧光定量PCR和Western blotting检测自噬,以及NO/iNOS/NF-κB通路相关基因的mRNA和蛋白表达水平。【结果】PS-MPs和DEHP均可抑制MCEC的活力,且IC 50分别为2315μg/L和1477μmol/L。与对照组相比,PS-MPs、DEHP、联合组细胞中NO含量、iNOS活性及NO/iNOS/NF-κB通路相关基因的mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.05),MDC法与免疫荧光染色的荧光强度均显著增强(P<0.05),MCEC的自噬相关基因(Beclin1、ATG5、LC3-B)的mRNA和蛋白表达水平显著上调(P<0.05);PS-341可显著缓解PS-MPs和DEHP对MCEC暴露引起的上述检测指标的变化。【结论】联合暴露于PS-MPs和DEHP可激活iNOS,使NO含量激增,上调NO/iNOS/NF-κB通路,从而诱导小鼠结肠上皮细胞自噬。

中华鳖诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因的表达分析

一氧化氮(NO)参与生物体内多种重要的生理病理活动,可增强机体的免疫功能,而诱导型一氧化氮合酶(iNOS)是一氧化氮合成过程中的关键限速酶。为了探明iNOS在中华鳖(Pelodiscus sinensis)先天免疫中的作用,研究了iNOS基因在中华鳖组织的分布及外源刺激物对其基因和蛋白表达的影响。荧光定量PCR结果显示,iNOS基因在中华鳖的心脏、肝脏、肾脏、脾脏、肌肉、小肠和大肠中均有表达,其中在大肠中表达量最高,其次是小肠、肾脏和脾脏。在受脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)刺激后,肝、脾、肾、肌肉和小肠iNOS mRNA的表达显著升高。免疫组化实验结果显示LPS刺激后12 h、24 h iNOS蛋白在小肠、脾脏表达水平显著高于生理盐水对照组。研究结果表明iNOS可能参与了中华鳖的机体免疫反应。

染色质重塑复合体INO80调控基因表达的机制研究

真核生物基因组DNA与组蛋白形成核小体,但真核基因组仍可结合转录、复制和修复过程的一系列酶,该过程主要受ATP依赖的核小体重塑复合物的调节.核小体重塑复合物INO80具有独特的结构特征,可促进复制叉停滞后重启,并在复制叉与转录物碰撞后帮助转录的基因清除RNA聚合酶Ⅱ.此外,INO80复合物还参与DNA损伤修复并抑制与编码序列方向相反的不适当转录.这些不同功能的基础是可促进核小体滑动并进行组蛋白变异体交换的核心ATPase亚基.本文主要概述染色质重塑复合物INO80的组成及其介导的基因表达调控机制研究的最新进展,为进一步研究INO80的生物学功能以及其在发育和疾病中的作用提供基础.

黄芪甲苷通过HIF-1α/iNOS通路对下肢深静脉血栓大鼠血管内皮功能的影响及机制研究

目的研究黄芪甲苷对下肢深静脉血栓大鼠血管内皮功能的保护作用,并探讨其潜在作用机制。方法线栓法构建大鼠下肢深静脉血栓模型。将60只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、黄芪甲苷低、中、高剂量治疗组[20、40、80 mg/(kg·d)]和HIF-1α选择性激动剂组[20 mg/(kg·d)]。采用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测IL-6、IL-1β、TNF-α、血栓素A2(thromboxane A2,TXA2)与前列环素(prostaglin 2,PGI2)水平;HE染色法观察大鼠下腔血脉血栓状态;TUNEL染色检测血管内皮细胞凋亡情况;Western Blot检测HIF-1α、iNOS、caspase 9、caspase 3蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组IL-6、IL-1β、TNF-α、TXA2水平显著升高,PGI2水平显著降低;HE染色结果可见红色和混合血栓,血管壁伴炎性细胞浸润;血管内皮细胞凋亡数显著增加;HIF-1α、iNOS蛋白表达明显下调;caspase 9、caspase 3蛋白表达明显上调。与模型组相比,黄芪甲苷低、中、高剂量治疗组和HIF-1α选择性激动剂组IL-6、IL-1β、TNF-α、TXA2水平显著降低,PGI2水平显著升高;HE染色结果可见无血管内皮细胞掉落,仅有极少量炎性细胞浸润;血管内皮细胞凋亡数显著减少;HIF-1α、iNOS蛋白表达明显上调;caspase 9、caspase 3蛋白表达明显下调。结论黄芪甲苷对下肢深静脉血栓大鼠血管内皮功能具有明显的保护作用,其机制可能与调控HIF-1α/iNOS信号通路有关。

HGF对脑缺血/再灌注大鼠脑iNOS,NO及IL-1β的影响

目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)对脑缺血/再灌注(I/R)大鼠脑诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、NO及白细胞介素-1β(IL-1β)的影响。方法:SD大鼠随机分为以下5组:假手术组(Sham组);I/R组;HGF1,HGF2,HGF3组,即I/R大鼠分别注射15,30,60μg/kg HGF。线栓法建立局灶性脑I/R模型,脑缺血1.5 h再灌注24 h后,测定缺血区脑组织iNOS活性及NO含量,检测iNOS及IL-1βmRNA水平的变化,测定iNOS蛋白表达水平及IL-1β含量。另取体外培养的大鼠大脑皮层神经元行I/R处理,检测iNOS和IL-1β蛋白表达水平及NO含量。结果:大鼠缺血区脑组织iNOS活性升高、NO含量增加,iNOS和IL-1βmRNA表达上调,iNOS蛋白表达增多,IL-1β含量增加。注射不同剂量HGF均能降低缺血区脑组织iNOS活性及NO含量,下调iNOS和IL-1βmRNA的表达,抑制iNOS蛋白的表达,降低IL-1β含量。此外,HGF可明显下调体外I/R神经元IL-1β和iNOS蛋白的表达,降低NO含量。结论:抑制IL-1β的表达,减少iNOS的表达,降低NO含量可能是HGF减轻脑缺血损伤的机制之一。

复方蜥蜴散对慢性萎缩性胃炎模型大鼠血清NO及iNOS水平影响的实验研究

目的:观察复方蜥蜴散对慢性萎缩性胃炎(Chronic atrophic gastritis,CAG)模型大鼠血清NO及iNOS水平的影响,探讨其治疗CAG的作用机制。方法:采取55℃热盐水、2%水杨酸、20mmol/L脱氧胆酸钠三个致萎缩因素配合饥饱失常造成CAG模型。将实验动物分为正常对照组,模型对照组,维酶素组,复方蜥蜴散高、中、低剂量组。检测大鼠血液中NO和iNOS水平及观察胃黏膜组织学方面的改变。结果:模型组大鼠NO和iNOS水平明显高于正常组(P<0.01),病理组织学上也有较大改变,而经复方蜥蜴散治疗1个月后,NO和iNOS水平恢复正常,胃黏膜病理组织学改善明显。结论:复方蜥蜴散可以逆转萎缩胃黏膜的病理改变,发挥保护胃黏膜的作用。

大黄酚对糖尿病脑病大鼠海马中BDNF、iNOS和氧化应激的影响

目的探讨大黄酚对糖尿病脑病的神经保护作用及其分子机制。方法应用水迷宫实验检测大黄酚对糖尿病大鼠模型学习记忆的影响;应用试剂盒法检测不同实验组海马中胆碱酯酶(AChE),胆碱乙酰基转移酶(ChAT),脑源性神经营养因子(BDNF),诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和氧化应激相关指标(CAT、SOD、GSH)的活性。结果大黄酚改善了糖尿病大鼠模型的学习记忆能力,增强了糖尿病大鼠模型组海马中AChE和BDNF的活性,抑制了模型组海马中ChAT、iNOS、CAT、SOD和GSH的活性。结论大黄酚可能通过增强BDNF的活性,下调iNOS的功能及抗氧化途径从而对糖尿病脑病产生保护作用,其可能成为临床上治疗糖尿病脑病的新型药物。

温肺降浊方对血管性痴呆大鼠认知功能及VEGF和iNOS表达的影响

目的观察温肺降浊方对血管性痴呆(VD)大鼠的认知功能的改变及其对脑内相关血氧动力改变诱导的血管内皮生长因子(VEGF)以及一氧化氮合酶(iNOS)基因表达,以评价温肺降浊方的脑保护作用。方法实验大鼠随机分为:空白对照组、假手术组、模型组、尼莫地平组、温肺降浊方组,采用双侧颈总动脉永久结扎法制备VD动物模型,以Morris水迷宫试验和穿梭箱实验检测来评价大鼠的认知功能,采用免疫组化法测定大鼠VEGF和iNOS的表达。结果模型组的潜伏期最短,错误次数最多(P<0.01)。温肺降浊方组的潜伏期大于尼莫地平组(P<0.01)。温肺降浊方组及尼莫地平组潜伏期大于模型组(P<0.01)。同时,假手术组与空白对照组大鼠跨越平台次数、目标象限次数无差异(P>0.01);模型组跨越平台次数、目标象限次数均低于假手术组(P<0.01);温肺降浊方组及尼莫地平组越平台次数、目标象限次数高于模型组(P<0.01);温肺降浊方组与尼莫地平组指标比较,差异有统计学意义(P<0.05)。温肺降浊组、尼莫地平组VEGF阳性细胞多于模型组(P<0.01),温肺降浊方组阳性细胞数多于尼莫地平组(P<0.05)。各组大鼠海马区iNOS阳性细胞数分布状况:假手术组及空白对照组iNOS阳性细胞数低于模型组,温肺降浊方组和尼莫地平组iNOS阳性细胞数低于模型组,温肺降浊方组iNOS阳性细胞数与尼莫地平组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论温肺降浊方能抑制血管性痴呆大鼠iNOS表达,上调VEGF的表达,改善认知功能。

结肠康对恶唑酮诱导小鼠溃疡性结肠炎MPO、NO、iNOS的影响

目的观察中药复方结肠康(黄芪、白术、茯苓、延胡索、黄连、三七等)对恶唑酮诱导小鼠溃疡性结肠炎中髓过氧化物酶(MPO)活性、一氧化氮(NO)水平、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达的影响,并探讨其治疗溃疡性结肠炎的作用机制。方法小鼠颈背部3%恶唑酮致敏2 d,第6天用1.5%恶唑酮灌肠,灌肠当日开始灌胃不同剂量结肠康。灌胃3 d后,处死小鼠,测定结肠组织MPO活性和NO水平,免疫组织化学检测iNOS蛋白表达。柳氮磺胺吡啶作为阳性对照药。结果与空白对照组相比,模型组MPO活性显著增加(P<0.01),NO水平、iNOS表达显著增加(P<0.01);结肠康(6.4、12.8、25.6 g/kg)组和柳氮磺胺吡啶(0.2 g/kg)组均能显著降低MPO活性、NO水平和iNOS蛋白表达(P<0.01);阳性对照药柳氮磺胺吡啶也有相似作用。结论中药复方结肠康对恶唑酮诱导小鼠溃疡性结肠炎MPO活性、NO水平、iNOS表达有一定的影响,对溃疡性结肠炎具有一定的治疗作用。

芦荟大黄素对LPS诱导的RAW264.7细胞NO生成及iNOS表达的影响

目的观察芦荟大黄素(aloe-emodin)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞一氧化氮(NO)生成及诱生型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达的作用。方法采用LPS诱导的RAW264.7细胞株建立细胞炎症反应模型。采用Griess试剂法测定NO释放量;采用硝普钠释放NO法测定NO自由基含量的变化;采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析iNOS mRNA表达改变。结果芦荟大黄素在0.69～2.50mg·L-1剂量范围内可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO的释放,并呈剂量和时间依赖关系;芦荟大黄素在0.63～5.00mg·L-1剂量范围内可下调LPS诱导的RAW264.7细胞iNOS mRNA含量;而此范围内芦荟大黄素无直接清除NO自由基作用,不影响iNOS活性。结论芦荟大黄素可明显降低LPS诱导的RAW264.7细胞NO释放,呈时间和剂量依赖关系,此作用并非通过捕捉NO或抑制iNOS活性来实现,而是通过抑制iNOS mRNA表达发挥作用的。

白藜芦醇对大鼠重症急性胰腺炎胰腺组织COX-2和iNOS表达的影响

目的探讨白藜芦醇(resveratrol,RES)改善重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)大鼠胰腺微循环的作用机制。方法SD大鼠随机分为3组:假手术(shamoperation,SO)组、重症急性胰腺炎(SAP)模型组、白藜芦醇治疗(RES)组。以40g/L牛黄胆酸钠0.1mL/100g胆胰管逆行注射建立SAP模型。RES组术后立即经阴茎背静脉注射RES(20mg/kg)。分别于术后3、6、12h取材,进行胰腺组织学评分;检测胰腺组织环氧化酶2(cyclcoxygenase-2,COX-2)、诱生型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,i NOS)的表达和一氧化氮(nitrogen monoxide,NO)含量。结果RES组胰腺损伤较SAP组明显减轻(P<0.05)。SAP组COX-2、i NOS的表达和NO含量在各时间点均显著高于假手术组(P<0.05);RES组COX-2的表达在6、12h较SAP组明显下降,i NOS和NO在各时间点均较SAP组明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论白藜芦醇可能通过下调COX-2和i NOS的表达改善胰腺微循环。

NO和iNOS在内毒素诱导的大鼠急性肺损伤的作用及大黄对其影响

目的 主要探讨一氧化氮（ＮＯ） 和诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）在内毒素（ＬＰＳ） 诱导的大鼠急性肺损伤（ＡＬＩ）的作用机制及大黄对其影响。方法 在雄性Ｗｉｓｔａｒ 大鼠利用舌下静脉注射ＬＰＳ复制ＡＬＩ动物模型，动物分为４ 组：ＬＰＳ组、对照组、大黄治疗组、地塞米松组。观察大体标本，组织病理以及生物学标志：肺湿／干重比、肺泡灌洗液中性粒细胞比、蛋白含量、肺血管通透性和肺泡通透性指数。同时测定血浆ＮＯ和肺组织匀浆ｉＮＯＳ活性。结果 ＬＰＳ组与对照组相比，肺组织病理显示肺间质及肺泡明显损伤和细胞浸润。其生物学标志均显著升高（Ｐ＜０－０１），ＮＯ 和ｉＮＯＳ也显著升高（ Ｐ＜０－０１） ，地塞米松和大黄干预治疗组则表现组织病理明显减轻。上述肺损伤生物标记物及ＮＯ、ｉＮＯＳ也相应下降（ Ｐ＜ ０－０５） 。结论 在ＬＰＳ诱导的ＡＬＩ大鼠动物模型中证明ＮＯ和ｉＮＯＳ在ＡＬＩ的发病过程中起到较为关键性的作用，用地塞米松、大黄进行干预治疗，可使损伤减轻相应地也使ＮＯ、ｉＮＯＳ浓度下降，表明这２ 种药物对ＬＰＳ诱导的ＡＬＩ具有保护作用，其机制可能是通过抑制ＮＯ和ｉＮＯＳ活性实现。

重症急性胰腺炎大鼠肺脏iNOS mRNA表达及丹参的干预效应

目的探讨重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)大鼠肺脏诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的表达及其与肺组织损伤的关系和丹参的治疗效应。方法45只W istar大鼠随机分为3组。SAP模型组、丹参组均以5%牛磺胆酸钠经胰管内逆行注射(1 m l/kg)复制SAP模型,丹参组则在制模后立即肌肉注射丹参(2 m l.kg-1.d-1),每6 h 1次,共给药4次。对照组仅行假手术。各组动物在术后24 h测血一氧化氮(NO)、淀粉酶(AMY)和腹水量。使用原位杂交和图像分析检测肺iNOS mRNA的表达强度,并观察其病理变化。结果AP模型组血中NO、AMY、腹水量和肺脏iNOS mRNA表达显著高于丹参组和对照组(P<0.05,P<0.01);丹参组病理改变较模型组减轻。结论SAP时肺组织iNOS mRNA高表达导致NO过度生成并与肺脏损伤有关;丹参能抑制肺组织iNOS mRNA的过度表达,从而对肺组织起保护作用。

舌鳞癌组织iNOSmRNA表达及其意义

背景及目的:近年的研究发现一氧化氮在肿瘤的发生、发展中起着重要的作用,在头颈肿瘤中检测出高水平的诱导型一氧化氮合酶(induciblenitricoxidesynthase,iNOS)表达,并与肿瘤的进展正相关,未见有关口腔癌中iNOSmRNA与其生物学行为相关的报道。本文拟研究舌鳞癌组织中iNOSmRNA表达与其侵袭性生长、颈淋巴结转移、预后的相关性。方法:原位杂交检测常规石蜡包埋的68例舌鳞癌活检组织中iNOSmRNA的表达;对所研究的舌鳞癌病例进行随访,获取有关预后资料;用原位杂交技术来分析iNOSmRNA与舌鳞癌侵袭性生长、颈淋巴结转移、预后的相关性。结果:①舌鳞癌浸润肌层组与无肌层浸润组iNOSmRNA阳性率分别为86.1%、48.0%,两组间差异有显著性(P<0.05),相关系数为0.3。②iNOSmRNA在舌鳞癌有颈淋巴结转移组阳性率为85.7%,无颈淋巴结转移组阳性率为62.5%,两组间差异有显著性(P<0.05),相关系数为0.3。③舌鳞癌iNOSmRNA表达阳性组3年生存率显著低于iNOSmRNA表达阴性组(P<0.05)。结论:①iNOSmRNA阳性表达与舌鳞癌的侵袭性生长、颈淋巴结转移正相关。②舌鳞癌组织中iNOSmRNA表达阳性的病例较iNOSmRNA表达阴性的病例预后差。

薏苡仁多糖对糖尿病血管并发症大鼠NO及主动脉iNOS基因表达的影响

目的观察薏苡仁多糖对实验性糖尿病血管并发症大鼠主动脉iNOS mRNA表达调控的影响。方法采用链脲佐菌素(STZ)(75mg/kg)腹腔注射和高热量饲料喂养建立2型糖尿病并发动脉粥样硬化大鼠模型,应用RT-PCR半定量分析大鼠主动脉iNOS mRNA的表达变化。结果模型组大鼠主动脉iNOS mRNA表达量明显高于正常组的(P<0.01),经给药处理6个月后,与模型组比较,各给药组大鼠主动脉iNOS mRNA有不同程度的下调,薏苡仁多糖注射组、氨基胍组与模型对照组比较有显著性差异(P<0.01)。结论薏苡仁多糖防治糖尿病血管并发症的作用可能与其下调iNOS mRNA的表达有关。

小鼠皮肤切创愈合过程中iNOS和eNOS表达的免疫组织化学研究

目的观察小鼠皮肤切创愈合过程中,iNOS和eNOS在损伤区及损伤周边区内的表达及其变化规律。方法小鼠背部制作全层切创,应用免疫组织化学技术观察伤后切创组织中iNOS和eNOS的表达,并和无切创的小鼠作为对照。结果损伤区及损伤周边区细胞,伤后3h的损伤皮肤组织中可见少量的多型核细胞表达iNOS和eNOS,伤后6～24h,大部分浸润的中性粒细胞和单核细胞为iNOS和eNOS阳性。随着时间的延长,iNOS和eNOS阳性细胞以单核细胞和成纤维细胞为主。伤后3hiNOS的阳性细胞比率较低,6h～1d持续性增加并于1d达到最高峰,3～7d维持在一个相对稳定的水平直至伤后10d再次达高峰,10～14d开始下降。eNOS的阳性细胞率在伤后1～3h表达较低,6h～3d持续性增高,并在3d达到最高峰,在其后的5d内保持稳定表达,之后开始下降。而且损伤区及损伤周边区、特别是肉芽组织内的新生血管可见iNOS和eNOS不同强度的表达。结论小鼠皮肤切创愈合过程中,iNOS和eNOS在损伤周边区内多型核细胞、单核细胞和成纤维细胞中表达,其时序性变化可望用于皮肤损伤时间的推断。

豆蔻明对TLR4/MyD88/NF-κB/iNOS信号通路的调节作用

目的探讨豆蔻明(cardamonin,CDN)对RAW264.7小鼠巨噬细胞Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)/My D88/NF-κB/i NOS信号通路的调节作用。方法利用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)处理RAW264.7细胞建立炎性细胞模型并分组:正常对照组(Vehicle组)、模型组(LPS组)和药物处理组(LPS+CDN组);CCK-8方法检测细胞活力,Griess法检测细胞培养上清一氧化氮(nitric oxide,NO)含量,RT-PCR检测诱导型NO合成酶(inducible nitric oxide synthase,i NOS)、环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-ɑ、白介素(interleukin,IL)-1β和IL-6的mRNA表达,Western blot检测i NOS、TLR4、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,My D88)、核因子-κB(nuclear factorκB,NF-κB)phosphorylated(p)-p65、inhibitorκBα(IκBα)和p-IκBα的蛋白表达。结果1~50μmol·L^(-1)豆蔻明对RAW264.7细胞没有毒性,但可以剂量依赖性抑制LPS诱导的NO分泌和i NOS、COX-2、MCP-1、TNF-α、IL-1β及IL-6的mRNA表达,25μmol·L-1豆蔻明可下调LPS诱导的i NOS、TLR4、My D88、p-NF-κB p65和p-IκBα蛋白表达及抑制IκBα降解。结论豆蔻明通过抑制TLR4/My D88/NF-κB/i NOS信号通路从而抑制NO的产生。

二硫戊环胍类和脒类化合物的合成及其iNOS/PAF双重抑制活性

目的 :寻找iNOS/PAF双重抑制剂。方法 :以PAF受体拮抗剂 2 ,4 二芳基 1,3 二硫戊环化合物为先导物 ,在其结构中引入有iNOS抑制活性的胍基和脒基 ,并测定目标化合物的iNOS抑制活性和PAF受体拮抗活性。结果和结论 :合成了二硫戊环胍类化合物 (WG1 10 )和二硫戊环脒类化合物 (WM1 4)。初步药理试验表明 ,化合物WG3、4、7-9具有显著的iNOS抑制活性 ,其中WG8的活性与正在Ⅲ期临床研究的对照药氨基胍相当 ,WG3、4、9的活性大于氨基胍。化合物WG1、7、10 、WM1、4具有显著的PAF受体拮抗活性。