白纹伊蚊和埃及伊蚊defensin A基因克隆及序列分析

应用PCR技术从白纹伊蚊和埃及伊蚊基因组中扩增出defensinA基因 ,并与文献报道的defensinA的5个型的cDNA序列进行同源性比较 ,发现此两序列中存在内元 ;从埃及伊蚊体内扩增的片段为蚊虫defen sinAl的前体AaDefAl;从白纹伊蚊体内扩增的片段为defensinA的 1个新型 ,命名为DefA6。

白纹伊蚊和埃及伊蚊防御素(defensin)成熟肽基因克隆及结构推测

应用PCR技术从白纹伊蚊和埃及伊蚊基因组中扩增出defensin成熟肽基因并对其分子生物学特性进行分析 ,发现埃及伊蚊 (BoraBora株、海口株 )、白纹伊蚊 (成都株、宜兴株、广州株 )推导的氨基酸序列与埃及伊蚊defensinA相同 ;通过Chou Fasman预测法对defensinA成熟肽的二级结构进行预测 ,可以看出在defensin成熟肽氨基酸序列的 15～ 2 3位有一个α 螺旋 ,35～ 39位有一个 β 折叠 ,32～ 34位有一个转角 ;

九香虫防卫素基因CcDef1的克隆及特征分析

九香虫 Coridius chinensis是一种重要的资源昆虫,防卫素是抗菌肽家族中一个重要的成员。本文从九香虫中克隆了一种防卫素基因 CcDef1 ,其cDNA的长度为395 bp,包含一个300 bp的开放阅读框,编码99个氨基酸。CcDef1的前体由信号肽、前体肽和成熟肽组成,成熟CcDef1形成包含1个α-螺旋、2个β-折叠片和3个二硫键的三维结构。CcDef1蛋白的相对分子量为4589.37Da,总净电荷量为+1,理论等电点为7.84。同源性和聚类分析显示,CcDef1与红尾碧蝽 Palomena prasina 防卫素的亲缘关系最近。该研究为进一步明确 CcDef1 基因的功能及开发新型抗菌药物奠定基础。

九香虫防卫素CcDef3基因的克隆与表达分析

【目的】探明九香虫防卫素基因CcDef 3的生物信息学特征及其在九香虫体内的表达模式,揭示CcDef 3基因的调控规律,为进一步研究该基因的功能及开发新型药物奠定基础。【方法】采用反转录PCR克隆CcDef 3基因并使用生物信息学软件和方法对其进行序列分析,采用实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测其时空表达模式及细菌诱导后的表达模式。【结果】九香虫防卫素基因CcDef 3的cDNA长度为522 bp,包含一个长351 bp的开放阅读框,编码116个氨基酸残基;CcDef3多肽由1个信号肽、2个前肽及1个成熟肽组成,成熟肽形成1个α-螺旋,2个β-折叠片和3个二硫键的三维分子结构;九香虫防卫素CcDef 3与红尾碧蝽防卫素的亲缘关系最近;CcDef 3在九香虫不同发育时期均表达,其中在5龄若虫中表达水平最高,在所检测的组织中皆表达,在脂肪体中表达水平最高;用细菌诱导九香虫成虫后CcDef 3的表达水平上调,在12 h时达到峰值,而后下调至48 h时趋向于诱导前表达水平。【结论】该研究克隆了九香虫防卫素CcDef 3基因,并进行了特征分析,解析其表达模式。CcDef 3基因的表达受到自身免疫的调控,还可以被诱导而参与免疫应答反应。

抗菌肽在食品防腐剂中的研究应用

抗菌肽是生物防御系统产生的一类对抗外源性病原体的肽类物质,对细菌、部分真菌、病毒、原虫、肿瘤细胞都具有杀伤作用,它的杀菌和安全无毒害作用的优势使得它具有做天然食品防腐剂的潜在应用价值。本文分析综述了不同抗菌肽在食品防腐中的应用。

昆虫防御素A的分子改造及其在噬菌体表面的展示

目的 :实现对昆虫防御素A的分子改造及改造后分子的噬菌体表面展示 ,为进一步设计构象型肽库 ,研究分子间相互作用奠定基础。方法 :分子改造包括以下内容 :分子截短 ,突变碱性氨基酸 ,减少半胱氨酸的数目等。利用InsightⅡHomology系统对改造后分子结构进行预测。然后再将合成的改造蛋白基因插入到pCANTAB 5E载体中 ,采用Western印迹鉴定该蛋白在噬菌体表面展示。结果与结论 :模建结果显示改造后蛋白仍保持原有三维结构不变 。

葱蝇防御素基因的鉴定及针刺对基因表达的影响

【目的】分析葱蝇(Delia antiqua)防御素基因家族的序列特征、分子进化和基因表达模式,了解防御素基因在滞育期的免疫应答特征。【方法】利用生物信息学方法,从转录组数据库中搜索防御素基因家族的序列,并进行基因鉴定、系统发育、选择压力及针刺刺激对基因表达的影响分析。【结果】共鉴定出3个防御素前体序列及由此形成的40个氨基酸残基组成的成熟肽DaDef1,DaDef2和DaDef3,理论分子量分别为4.09,4.12 4.09kDa;等电点分别为8.71,8.69和8.35;它们具有昆虫防御素的典型的保守结构域,有3对分子内二硫键,均为外分泌型、稳定多肽。系统发育分析显示葱蝇防御素成熟肽Dadef1与新陆原伏蝇(Protophormia terraenovae)、丝光绿蝇(Lucilia sericata)和家蝇(Musca domestica)防御素亲缘关系最近并聚为一枝,再与Dadef2和Dadef3聚为一枝。基因表达分析表明针刺能明显影响葱蝇防御素基因的表达。【结论】葱蝇防御素基因家族序列保守性高,具有典型的家族特征;它们的表达模式在冬滞育和非滞育蛹的不同发育时期存在明显差异,说明葱蝇冬滞育蛹和非滞育蛹的免疫应答存在差异。研究结果为进一步研究昆虫防御素类抗菌肽的结构特征、进化以及滞育条件下免疫活动提供理论基础。