肾小管上皮细胞白细胞介素13和白细胞介素4受体的表达及其在肾小管损伤中的作用

目的:研究肾小管上皮细胞IL-4受体和IL-13受体的表达及IL-4和IL-13对肾小管上皮细胞形态和功能的影响,并探讨其作用机制。方法:借助人近端肾小管上皮细胞系(HK2),采用RT-PCR,免疫荧光方法检测HK2上IL-4受体和IL-13受体的表达。免疫荧光方法观察不同浓度IL-4和IL-13干预HK2细胞12～48h后HK2损伤标志物RANTES的变化情况。Western blot方法检测IL-4和IL-13干预HK2细胞后,JAK-STAT6信号通路的活化以及JAK-STAT6信号通路特异性抑制剂来氟米特对IL-4和IL-13作用HK2细胞的影响。结果:(1)RT-PCR和免疫荧光结果显示HK2有IL-4II型受体和IL-13I型受体mRNA和蛋白质表达。(2)IL-4和IL-13呈时间-剂量依赖性影响上皮细胞RANTES的表达。100ng/mlIL-4、50ng/mlIL-13作用48h对HK2的损伤作用最为明显。正常HK2细胞RANTES呈阴性,100ng/mlIL-4和50ng/mlIL-13干预48h后,阳性细胞显著增多。(3)Western blot方法结果显示JAK-STAT6磷酸化水平均在IL-4和IL-1350ng/ml作用10min时开始升高,IL-4100ng/ml作用20min达高峰,IL-1350ng/ml20min达高峰。JAK-STAT6信号通路特异性抑制剂来氟米特可阻断JAK-STAT6信号通路的活化,拮抗IL-4和IL-13诱导的HK2细胞RANTES表达。结论:(1)本研究首次证实人近端肾小管上皮细胞存在IL-4和IL-13受体的表达。(2)IL-4和IL-13可通过人近端肾小管上皮细胞上的相应受体造成细胞损伤,表现为RANTES表达增加。(3)IL-4和IL-13的上述作用与细胞内JAK-STAT6信号通路活化密切相关。

中国人群白细胞介素-13基因多态性与哮喘易感性关系的Meta分析

目的评价白细胞介素-13基因多态性与中国人群哮喘易感性的关系。方法检索中文及外文数据库,全面收集2010年8月之前发表的研究中国人群IL-13基因多态性与哮喘相关性的病例对照研究,对采纳的数据进行Meta分析。结果 9篇文献被纳入分析,其中涉及C1923T多态性的文献5篇、G2044A多态性的文献5篇。Meta分析计算合并比值比(95%可信区间):TT/CC基因型为4.15(2.83～6.09,P=0.000);CT/CC基因型为1.97(1.53～2.53,P=0.000);AA/GG基因型为1.92(1.00～3.72,P=0.051);GA/GG基因型为1.44(1.14～1.82,P=0.000)。TT/CC、AA/GG、GA/GG研究数据不存在发表偏倚(P值分别为0.175、0.968、0.633);CT/CC研究数据存在发表偏倚(P=0.010)。结论当前的研究支持IL-13+1923位点基因型TT和+2044位点基因型GA是哮喘发病的危险因素,+1923位点基因型CT和+2044位点基因型AA与哮喘发病尚无明确关系。

IL-13Rα2、VEGF和PTEN在人脑胶质瘤中的研究进展

胶质瘤是中枢神经系统发生率最高的恶性肿瘤,其治疗仍然是一大难题。近年来,对脑胶质瘤发病的相关分子机制和凋亡机制已进行了广泛而深入的研究,为进一步探讨胶质瘤的分子病因、分子分型、恶性进展、基因治疗及预后评估奠定了基础,尤其是对白细胞介素13受体α2(IL-13Rα2)、血管内皮生长因子(VEGF)及人10号染色体上缺失的磷酸酶和张力蛋白类似物(PTEN)的深入研究。本文总结了IL-13Rα2、VEGF和PTEN的研究进展及其临床意义。

重组白细胞介素13促进成纤维细胞增殖及胶原合成

目的:观察重组白细胞介素13(rIL-13)对3T3细胞的作用,探讨肺纤维化的发生机制。方法:3T3细胞分为实验组和对照组,分别加入rIL-13(80μg/L)及DMEM培养液,作用24h、48h,利用透射电镜观察成纤维细胞的超微结构,用Hoechst试剂盒观察细胞DNA形态;用MTT法测细胞增殖率,用Western blotting检测成纤维细胞分泌Ⅰ型胶原以及用放免法检测细胞上清中IL-6、IL-8水平。结果:实验组细胞DNA合成增加,细胞核增大,细胞质中可见较多核糖体及线粒体;rIL-13呈剂量依赖方式刺激成纤维细胞增殖,当rIL-13浓度在40-160μg/L时,细胞增殖率几乎呈直线式增长。对照组及实验组均可检测到Ⅰ型胶原(CoⅠ),对照组分泌胶原的量显著高于对照组(P<0·01)。细胞培养上清中,实验组IL-6、IL-8含量显著高于对照组(P<0·01)。结论:rIL-13通过促进成纤维细胞增殖及分泌炎性介质和Ⅰ型胶原,可能在肺纤维化的发病机制中发挥关键作用。

哮喘患儿血白细胞介素-10、13检测的临床意义

目的探讨哮喘患儿外周血白细胞介素-10(IL-10)、13的变化及其在哮喘发病机制中的作用。方法用ELISA双抗体夹心法测定20例哮喘患儿及18例正常儿童血浆IL-10、13的含量。结果哮喘组血浆IL-13水平明显高于正常对照组,IL-10水平明显低于正常对照组(p均<0.05)。结论IL-10、13等细胞因子参与儿童哮喘发病的病理生理过程,可为判断病情提供较好的实验室参数。

小鼠sIL-13Rα2基因的克隆及在毕赤酵母中的表达

目的克隆并在毕赤酵母中表达小鼠sIL-13Rα2基因。方法提取小鼠脾脏细胞总RNA,逆转录为cDNA,应用分段PCR的方法将sIL-13Rα2基因定向克隆至酵母表达质粒pPICZα-A,并转染至毕赤酵母GS115(his4)菌株,进行目的蛋白的诱导表达。表达的蛋白经SDS-PAGE和Western blot,进行分析。结果重组表达质粒pPICZα-A/sIL-13Rα2经酶切鉴定,表明目的基因为正向插入。重组酵母菌的PCR鉴定结果显示,目的基因片段已插入酵母染色体中。目的蛋白表达量约占菌体总蛋白的30%,每升发酵液约含2mg重组蛋白。重组蛋白可与兔抗小鼠sIL-13Rα2单抗发生特异性反应。结论已成功克隆并在毕赤酵母中表达了小鼠sIL-13Rα2基因,为应用sIL-13Rα2蛋白治疗哮喘及其他过敏性疾病奠定了基础。