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Intein介导的重组昆虫毒素BmKIT在大肠杆菌中的可溶性表达、纯化及活性分析
被引量:
4
1
作者
许成钢
范晓军
+2 位作者
张志云
付月君
梁爱华
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第6期989-994,共6页
为获得重组蝎昆虫毒素BmKIT,通过PCR方法在BmKIT基因的3′端融合了编码6个组氨酸残基的核苷酸序列,将其插入原核表达载体pTWIN1的内含肽Ssp DnaB Intein基因下游的多克隆位点(MCS)。将获得的表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱...
为获得重组蝎昆虫毒素BmKIT,通过PCR方法在BmKIT基因的3′端融合了编码6个组氨酸残基的核苷酸序列,将其插入原核表达载体pTWIN1的内含肽Ssp DnaB Intein基因下游的多克隆位点(MCS)。将获得的表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导融合蛋白表达。用Ni-NTA亲和层析柱从菌体裂解液中纯化了CBD-Intein-BmK IThis6融合蛋白,并在柱上诱导Intein自剪切,成功去除融合子CBD-Intein。通过Superdex75凝胶过滤层析获得了纯度达95%以上的BmK IThis6蛋白,该蛋白不仅具有正确的二级结构而且有生物活性。
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关键词
东亚钳蝎昆虫毒素
原核表达
intein自剪切
虫试实验
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职称材料
1种高效纳米抗体生产方法的建立
2
作者
贺生芳
付向晶
+5 位作者
刘阳坤
慕国辉
刘海金
王兴龙
杜恩岐
杨增岐
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第9期1487-1493,共7页
为实现纳米抗体的简单、高效、低成本表达,在已有的商品化原核表达载体的基础上,对其进行改造,在靶蛋白N端分别融合3种不同串联融合标签His-Intein、His-Sumo-Intein和His-Trx-Intein,以本实验室筛选的抗猪圆环病毒2(PCV2)Cap蛋白的纳...
为实现纳米抗体的简单、高效、低成本表达,在已有的商品化原核表达载体的基础上,对其进行改造,在靶蛋白N端分别融合3种不同串联融合标签His-Intein、His-Sumo-Intein和His-Trx-Intein,以本实验室筛选的抗猪圆环病毒2(PCV2)Cap蛋白的纳米抗体基因为靶蛋白,构建了pHSIE-Nb(His-Sumo-Intein)、pHSIE-intein-Nb(His-Intein)和pET32a-intein-Nb(His-Trx-Intein)3种表达载体。分别转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导融合蛋白表达,在不同表达条件下比较,选取可溶性表达最好的载体大量表达,用Ni-NTA金属螯合层析柱进行纯化,并利用Intein自剪切去除标签,纯化纳米抗体。且用制备的纳米抗体作为包被抗体,做双抗体夹心ELISA检测其反应原性。结果显示3种不同融合标签的纳米抗体都可成功表达,而融合His-Trx-Intein标签的载体可溶性表达量最高。融合蛋白经pH7、25℃剪切24h后可以得到不含融合标签的纳米抗体。双抗体夹心ELISA检测,统计学分析,制备的抗PCV2Cap纳米抗体蛋白包被的样品组与阳性对照组差异不显著(P>0.05),因此制备的纳米抗体是有活性的。本研究成功建立一种高效表达、纯化纳米抗体的方法,可以增加蛋白表达量、可溶性和简化蛋白纯化过程,获得具有活性的无标签的纳米抗体。为其进一步的纳米抗体理论研究和生产应用提供技术支持。
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关键词
纳米抗体
融合标签
自剪切
intein
表达纯化
双抗夹心ELISA
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职称材料
题名
Intein介导的重组昆虫毒素BmKIT在大肠杆菌中的可溶性表达、纯化及活性分析
被引量:
4
1
作者
许成钢
范晓军
张志云
付月君
梁爱华
机构
山西大学生物技术研究所
出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第6期989-994,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(Nos30700534
30670282and30470239)
山西省自然科学基金项目资助(Nos20051065and20041033)~~~
文摘
为获得重组蝎昆虫毒素BmKIT,通过PCR方法在BmKIT基因的3′端融合了编码6个组氨酸残基的核苷酸序列,将其插入原核表达载体pTWIN1的内含肽Ssp DnaB Intein基因下游的多克隆位点(MCS)。将获得的表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导融合蛋白表达。用Ni-NTA亲和层析柱从菌体裂解液中纯化了CBD-Intein-BmK IThis6融合蛋白,并在柱上诱导Intein自剪切,成功去除融合子CBD-Intein。通过Superdex75凝胶过滤层析获得了纯度达95%以上的BmK IThis6蛋白,该蛋白不仅具有正确的二级结构而且有生物活性。
关键词
东亚钳蝎昆虫毒素
原核表达
intein自剪切
虫试实验
Keywords
Buthus martensii Karsch insect toxin (BmK IT), prokaryotic expression,
intein
self-cleavage, insect bioassay
分类号
S482.3 [农业科学—农药学]
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职称材料
题名
1种高效纳米抗体生产方法的建立
2
作者
贺生芳
付向晶
刘阳坤
慕国辉
刘海金
王兴龙
杜恩岐
杨增岐
机构
西北农林科技大学动物医学院
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第9期1487-1493,共7页
基金
西北农林科技大学引进人才科研启动基金(Z111021006)
文摘
为实现纳米抗体的简单、高效、低成本表达,在已有的商品化原核表达载体的基础上,对其进行改造,在靶蛋白N端分别融合3种不同串联融合标签His-Intein、His-Sumo-Intein和His-Trx-Intein,以本实验室筛选的抗猪圆环病毒2(PCV2)Cap蛋白的纳米抗体基因为靶蛋白,构建了pHSIE-Nb(His-Sumo-Intein)、pHSIE-intein-Nb(His-Intein)和pET32a-intein-Nb(His-Trx-Intein)3种表达载体。分别转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导融合蛋白表达,在不同表达条件下比较,选取可溶性表达最好的载体大量表达,用Ni-NTA金属螯合层析柱进行纯化,并利用Intein自剪切去除标签,纯化纳米抗体。且用制备的纳米抗体作为包被抗体,做双抗体夹心ELISA检测其反应原性。结果显示3种不同融合标签的纳米抗体都可成功表达,而融合His-Trx-Intein标签的载体可溶性表达量最高。融合蛋白经pH7、25℃剪切24h后可以得到不含融合标签的纳米抗体。双抗体夹心ELISA检测,统计学分析,制备的抗PCV2Cap纳米抗体蛋白包被的样品组与阳性对照组差异不显著(P>0.05),因此制备的纳米抗体是有活性的。本研究成功建立一种高效表达、纯化纳米抗体的方法,可以增加蛋白表达量、可溶性和简化蛋白纯化过程,获得具有活性的无标签的纳米抗体。为其进一步的纳米抗体理论研究和生产应用提供技术支持。
关键词
纳米抗体
融合标签
自剪切
intein
表达纯化
双抗夹心ELISA
Keywords
nanobody(Nb)
fusion tags
self-cleavage
intein
expression and purification
doubleantibody sandwich ELISA
分类号
Q789 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Intein介导的重组昆虫毒素BmKIT在大肠杆菌中的可溶性表达、纯化及活性分析
许成钢
范晓军
张志云
付月君
梁爱华
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007
4
下载PDF
职称材料
2
1种高效纳米抗体生产方法的建立
贺生芳
付向晶
刘阳坤
慕国辉
刘海金
王兴龙
杜恩岐
杨增岐
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
0
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职称材料
已选择
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