小麦叶片胞间洗脱液的蛋白质组学检测分析

植物叶片胞间液蛋白主要是一些低丰度蛋白,其中某些种类在植物抗病反应中起着重要的作用。通过改进已有的技术方法,结合超滤和丙酮沉淀处理,从500 g抗条锈病近等基因系小麦Taichung29*6/Yr5的叶片中获得了1.5 mg可溶性的胞间洗脱液蛋白。SDS-PAGE电泳分析显示,胞间洗脱液蛋白样品和总蛋白样品存在着明显的差异。进一步的双向电泳分析证实,两个样品在胶图上可分别检测到1 241±59(n=3)和1 849±138(n=3)个蛋白点,其中胞间洗脱液样品有1 042±47(n=3)个不同于总蛋白样品的蛋白点,与总蛋白样品共有的蛋白点仅198±13(n=3)个。随意取100个差异蛋白点进行MALD I-TOF质谱分析,鉴定到一些已被确证存在于小麦胞间液中的蛋白质,如-β1,3-葡聚糖酶、葡聚糖--βD-1,3-葡萄糖苷内切酶、几丁质酶、过氧化物酶等。从蛋白质组学角度初步分析了小麦叶片胞间洗脱液的组成,为进一步探索小麦叶片胞间液中低丰度蛋白的抗病功能提供依据。

一种简易高效的小麦叶片胞间液蛋白提取方法的建立

植物细胞间液中的蛋白在植物生长发育和抗病抗逆反应及其信号传导过程中发挥着重要作用,是植物学研究的新热点。由于细胞间液含量低,容易因组织细胞损伤性受到胞内成分污染,高纯度的细胞间液蛋白的提取相对困难,参考相关文献报道,建立了一种简易高效的小麦叶片细胞间液蛋白的提取方法。选取小麦品种"铭贤169"幼苗叶片为材料,用50mmol/LNaAc缓冲液充分浸润,负压处理20 min后,30×g离心5 min除去叶片表面缓冲液,随后2 000×g离心15 min,收集小麦叶片胞间液。将获得的小麦叶片胞间液冷冻干燥后,进行SDS-PAGE分离分析。电泳胶图上显示出细胞间液提取物与叶片组织提取物的蛋白质组成有极显著差异,使用MALD-TOF/TOF MS技术分析SDS胶上的细胞间液蛋白条带,共鉴定到9种非高丰度或假定的蛋白,其中有两种是已报道过的植物细胞间液蛋白。试验结果表明,本方法简易高效,适用于小麦蛋白质组学研究中高纯度的细胞间液蛋白的提取。