HDP患者血清PLGF、IFI16、ANGPTL2与不良妊娠结局关系及预测价值

目的:研究妊娠高血压疾病(HDP)患者血清胎盘生长因子(PLGF)、γ干扰素诱导蛋白16(IFI16)、血管生成素样蛋白2(ANGPTL2)水平及预测妊娠结局价值。方法:选取2020年1月-2023年1月在本院就诊并分娩的126例HDP孕妇,根据病情严重程度分为轻度组(58例)、重度组(68例),依据妊娠结局分为不良组(52例)、良好组(74例)。同期在本院健康分娩的孕妇60例为健康组。检测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、糖化血红蛋白(HbA1c)、PLGF、IFI16、Angptl2蛋白表达和尿液中24 h尿蛋白、尿酸(UA)、肌酐(Cr)水平,血清。Spearman分析PLGF、IFI16、Angptl2与HDP严重程度和妊娠结局的相关性;logistic分析不良妊娠结局影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析PLGF、IFI16、ANGPTL2对HDP孕妇不良妊娠结局的预测价值。结果:健康组、轻度组、重度组血清PLGF水平依次降低,IFI16、ANGPTL2依次升高;良好组舒张压、收缩压、24 h尿蛋白、IFI16、ANGPTL2低于不良组,PLGF高于不良组(均P<0.05)。HDP严重程度、不良妊娠结局与PLGF呈负相关,与IFI16、ANGPTL2呈正相关(P<0.05)。舒张压、收缩压、IFI16、ANGPTL2异常升高是影响HDP患者不良妊娠结局的危险因素,PLGF升高是保护因素(P<0.05)。PLGF、IFI16、ANGPTL2联合检测预测HDP患者不良妊娠结局的曲线下面积为0.905,灵敏度98.1%、特异度73.0%,价值高于单独指标检测(P<0.05)。结论:HDP患者血清PLGF较低,IFI16、ANGPTL2较高,PLGF、IFI16、ANGPTL2联合检测可提高不良妊娠结局预测价值。

初发多发性骨髓瘤患者骨髓活检病理形态学分析及IFI16表达的临床意义

目的探究初发多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓活检病理形态学分析及干扰素诱导蛋白16(IFI16)表达的临床意义。方法108例初发MM患者均行病理形态学分析,检测IFI16表达水平。使用Logistic及ROC分析骨髓活检病理形态学结果及预后影响因素。结果106例MM患者增殖模式分型结节型占比最多,成熟度分型Ⅰ型占比最多;预后不良组年龄≥60岁占比、诊断到治疗时间≥3个月占比、ISS分期Ⅲ期占比、成熟度Ⅲ型占比、弥漫型占比及IFI16高表达占比均高于预后良好组,Logistic显示除诊断到治疗时间≥3个月外,其余均为MM的独立危险因素(P<0.05);ROC显示病理形态学联合IFI16预测MM预后的AUC高于单独预测。结论初发MM患者病理形态学中成熟度Ⅲ型、弥漫型及IFI16高表达MM患者预后不良。

PE患者血清NfL、IFI16、TGF-β1水平变化及其预测妊娠结局价值

目的:探讨子痫前期(PE)患者血清神经丝轻链蛋白(NfL)、人γ干扰素诱导蛋白16(IFI16)、转化生长因子β1(TGF-β1)水平变化及其对不良妊娠结局的预测价值。方法:选择2021年1月-2023年1月本院接诊的PE患者97例临床资料为病例组,根据围产结局分为正常组32例,母体不良结局组27例,围生儿不良结局组38例;同期产前检查健康孕妇95例为对照组,分析各组血清NfL、IFI16、TGF-β1水平及其对PE患者妊娠结局的预测价值。结果:病例组血清NfL(4.89±0.56 pg/ml)、IFI16(17.84±2.14 ng/ml)、TGF-β1(84.21±9.41 pg/ml)水平高于对照组(4.41±0.16 pg/ml、13.35±1.28 ng/ml、68.71±5.98 pg/ml),妊娠结局正常患者、母体不良结局患者、围生儿不良结局患者血清中依次升高(均P<0.05);受试者工作特征曲线分析,预测PE患者不良妊娠结局,血清NfL的曲线下面积(AUC)为0.807,灵敏度82.7%,特异度85.0%,截断值4.64pg/ml;血清IFI16的AUC为0.973,灵敏度86.9%,特异度90.0%,截断值15.69 ng/ml;血清TGF-β1的AUC为0.921,灵敏度93.5%,特异度98.5%,截断值74.56 pg/ml。结论:PE患者血清NfL、IFI16、TGF-β1表达异常升高,且与不良妊娠结局有关,可作为评估妊娠结局的有效指标。

胎膜早破孕妇血清IL-22 R1、sICAM-1、IFI16变化及临床意义

目的探讨胎膜早破孕妇血清白细胞介素-22受体1(IL-22 R1)、可溶性细胞间黏附分子1(sICAM-1)、γ干扰素诱导蛋白16(IFI16)变化及临床意义。方法选取2021年7月—2023年7月南阳市中心医院收治的72例胎膜早破孕妇作为研究对象。将上述研究对象作为胎膜早破组(n=72),另选同期72例正常健康足月分娩孕妇作为健康对照组(n=72)。比较胎膜早破组与健康对照组孕妇的IL-22 R1、sICAM-1、IFI16水平。按照是否合并绒毛羊膜炎将胎膜早破组孕妇分为感染组(n=42)与未感染组(n=30)。比较感染组与未感染组孕妇的IL-22 R1、sICAM-1、IFI16水平。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析IL-22 R1、sICAM-1、IFI16诊断胎膜早破孕妇是否合并绒毛羊膜炎的敏感度、特异度。结果胎膜早破组孕妇的IL-22 R1、sICAM-1、IFI16水平均高于健康对照组孕妇(P<0.05);感染组孕妇的IL-22 R1、sICAM-1、IFI16水平均高于未感染组孕妇(P<0.05);ROC曲线分析显示,IL-22 R1诊断胎膜早破孕妇是否合并绒毛羊膜腔感染的曲线下面积(AUC)、敏感度、特异度分别为0.725、61.90%、76.67%;sICAM-1诊断胎膜早破孕妇是否合并绒毛羊膜腔感染的AUC、敏感度、特异度分别为0.795、73.81%、83.33%;IFI16诊断胎膜早破孕妇是否合并绒毛羊膜腔感染的AUC、敏感度、特异度分别为0.744、83.33%、63.33%。结论胎膜早破孕妇IL-22 R1、sICAM-1、IFI16呈现出高水平表达,IL-22 R1、sICAM-1、IFI16水平对预测绒毛羊膜炎有一定临床意义。

IFI16在子痫前期孕妇胎盘组织和血清中的表达及其与子痫前期发病的相关性

目的:探讨人γ干扰素诱导蛋白16(IFI16)在子痫前期(PE)孕妇胎盘组织和血清中的表达及其与PE发病的相关性。方法:分别采用免疫组化法、实时荧光定量PCR技术和蛋白印迹法检测胎盘组织中IFI16表达;ELISA法检测血清IFI16及重组IFI16(r IFI16)处理后内皮细胞培养上清液中内皮素-1(ET-1)和可溶性血管内皮黏附分子(s VCAM-1)的浓度,分析PE孕妇血清IFI16水平与临床指标之间的相关性。结果:IFI16在PE组胎盘组织中的阳性表达率明显高于对照组(P<0.05);与对照组相比,PE组胎盘组织中IFI16 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01);IFI16在PE组孕妇血清中的水平显著高于对照组(P<0.01),且与孕妇收缩压(r=0.62,P<0.001)、24h尿蛋白定量(r=0.723,P<0.001)及相应胎盘组织中IFI16 mRNA表达水平(r=0.527,P<0.05)呈正相关;r IFI16处理后,细胞培养上清液中ET-1和s VCAM-1浓度明显升高。结论:IFI16在PE孕妇胎盘组织和血清中的水平明显升高,并与内皮细胞损伤相关,提示IFI16可能通过损伤血管内皮细胞参与了PE的发病。

NLRP3、AIM2、IFI16炎症小体在慢性乙型病毒性肝炎患者PBMC中的活化水平和与HBV感染的相关性分析

目的:探讨乙肝病毒(HBV)是否激活了慢性乙型病毒性肝炎(CHB)患者外周血单个核细胞(PBMCs)内核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、黑色素瘤缺乏因子2(AIM2)和干扰素诱导蛋白16(IFI16)炎症小体,分析HBV影响炎症小体活化的可能机制.方法:收集感染内科临床确诊CHB患者35例.同时选取健康住院医师28例为对照.以常规淋巴细胞分层液密度梯度离心法分离健康对照组和CHB患者组静脉血得到PBMCs,采用逆转录、实时荧光定量PCR检测CHB患者组和健康对照组PBMCs NLRP3、AIM2、IFI16、凋亡相关的斑点样蛋白(ASC)、半胱天冬酶1(CASP1)、IL-1β、IL-18 mRNA表达水平,ELISA法检测两组血清中IL-1β蛋白分泌水平.结果:CHB患者组和健康对照组PBMCs ASC、NLRP3、AIM2、IL-1β、IL-18 mRNA表达水平及两组血清IL-1β蛋白分泌水平无显著性差异.CHB患者组PBMCs IFI16、CASP1 mRNA表达水平显著上调,且IFI16 mRNA表达水平与患者血清HBV DNA载量显著正相关(r=0.699 8,P<0.01).结论:慢性HBV感染未导致CHB患者PBMCs NLRP3、AIM2炎症小体的活化;尽管HBV DNA可能诱导了CHB患者IFI16炎症小体的高表达,但通过抑制pro-caspase-1的活化、IL-1β的表达,HBV阻断了IFI16炎症小体的活化效应.

CENPK、IFI16表达与中晚期宫颈癌患者预后的关系

目的探讨着丝粒蛋白K(CENPK)、干扰素诱导核蛋白16(IFI16)表达与中晚期宫颈癌患者预后的关系。方法选取行同步放化疗的106例中晚期宫颈癌患者宫颈癌组织,以同期40例因子宫脱垂或子宫肌瘤行全子宫切除的正常宫颈组织为对照。免疫组织化学检测组织中CENPK、IFI16蛋白表达。比较不同临床病理特征中晚期宫颈癌患者CENPK、IFI16蛋白表达差异。Kaplan-Meier方法分析CENPK、IFI16表达与中晚期宫颈癌预后的关系。Cox回归分析影响中晚期宫颈癌患者预后的影响因素。结果宫颈癌组织中CENPK、IFI16蛋白阳性表达率分别为70.75%(75/106)、67.92%(72/106),高于正常宫颈组织的10.00%(4/40)、15.00%(6/40),差异有统计学意义(P均<0.05)。不同肿瘤最大径、FIGO分期及淋巴结转移中晚期宫颈癌患者癌组织中CENPK、IFI16表达比较差异有统计学意义(P均<0.05)。CENPK阳性者5年累积生存率低于CENPK阴性者(P<0.05),IFI16阳性者5年累积生存率亦低于CENPK阴性者(P<0.05)。FIGO分期Ⅲ~Ⅳ、淋巴结转移、CENPK阳性表达、IFI16阳性表达是影响中晚期宫颈癌患者预后的独立因素(P均<0.05)。结论中晚期宫颈癌组织中CENPK、IFI16表达升高,二者表达与肿瘤最大径、FIGO分期及淋巴结转移有关,是影响患者不良预后的独立因素。

IFI16 siRNA对干扰素α诱导的人脑血管外膜成纤维细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨干扰素诱导蛋白16(IFI16)siRNA对干扰素α(IFN-α)诱导的人脑血管外膜成纤维细胞(HBVAF)增殖与凋亡的影响。方法在HBVAF中转染IFI16 siRNA 48 h后,用2×106U/L IFN-α处理转染IFI16siRNA的细胞24 h,流式细胞术测定细胞周期及凋亡,real-time PCR和Western blot测定细胞中IFI16 mRNA和蛋白表达水平。结果转染IFI16 siRNA后,HBVAF中IFI16 mRNA和蛋白表达水平下调,同时抑制细胞G/S期转换。IFN-α诱导HBVAF中IFI16 mRNA和蛋白表达上调,抑制细胞G/S期转换,促进细胞凋亡。但在转染IFI16 siRNA的HBVAF中IFN-α的上述作用受到了抑制。结论 IFN-α抑制HBVAF增殖,促进其凋亡可能与促进IFI16表达有关。

宫颈局部IFI16、STAT1蛋白、T-bet蛋白表达与HPV16/18感染转归相关性及联合检测价值分析

目的探讨宫颈局部干扰素诱导蛋白16(IFI16)、信号传导和转录激活因子1(STAT1)蛋白、T-box基因家族的新型转录因子T-bet蛋白表达与人乳头瘤病毒(HPV)16/18感染转归相关性及联合检测价值。方法选取2020年5月至2021年12月该院收治的110例人乳头瘤病毒(HPV)16/18感染患者,均根据病情并结合患者意愿给予药物、高强度聚焦超声(HIFU)、宫颈环形电切术(LEEP)治疗,统计3种方法治疗后的转阴率,并根据治疗后HPV16/18感染转归情况,分为转阴组(60例)、未转阴组(50例)。比较两组宫颈局部IFI16、STAT1蛋白、T-bet蛋白表达,多因素Logistic回归分析HPV16/18感染转归的相关影响因素,受试者工作特征曲线及曲线下面积(AUC)分析IFI16、STAT1蛋白、T-bet蛋白及联合检测预测HPV16/18感染转归价值。结果转阴组采取HIFU、LEEP治疗方法的患者占比与采取药物治疗方法的患者占比比较,差异有统计学意义(P<0.05);未转阴组IFI16、STAT1蛋白表达高于转阴组,T-bet蛋白表达低于转阴组,差异有统计学意义(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示,阴道炎、治疗方法、IFI16、STAT1蛋白、T-bet蛋白表达均与HPV16/18感染转归有关(P<0.05);IFI16、STAT1蛋白、T-bet蛋白联合检测预测HPV16/18感染未转阴的AUC最大,三者联合检测的灵敏度为88.00%,特异度为85.00%;IFI16、STAT1蛋白高表达患者转阴率低于IFI16、STAT1蛋白低表达患者,T-bet蛋白高表达患者转阴率高于T-bet蛋白低表达患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论宫颈局部IFI16、STAT1蛋白、T-bet蛋白表达与HPV16/18感染转归有关,三者联合检测可作为预测HPV16/18感染转归的一个可靠方案,在保证转阴率的同时,又避免过度治疗增加患者负担。

子宫内膜异位症患者血清FGF21、IFI16水平及其诊断价值

目的:探究子宫内膜异位症(EMT)患者血清成纤维细胞生长因子21(FGF21)、γ干扰素诱导蛋白16(IFI16)水平及其诊断价值。方法:以本院2021年1月—2022年12月收治的EMT患者80例为EMT组,体检健康女性80例为对照组,采用酶联免疫吸附法测定血清FGF21、IFI16和炎症因子白细胞介素-6(IL-6)、IL-8、肿瘤坏死因子(TNF-α)水平;采用pearson分析血清FGF21、IFI16水平与炎症因子水平相关性;采用多因素logistic回归分析发生EMT的影响因素;采用受试者工作特征曲线分析血清FGF21、IFI16水平诊断EMT诊断价值。结果:与对照组相比,EMT组IL-6、IL-8、TNF-α水平升高,痛经和流产发生增加,血清FGF21水平(94.65±13.53 pg/ml)低于对照组(120.62±16.41 pg/ml),IFI16水平(16.25±2.73 ng/ml)高于对照组(12.76±2.19 ng/ml),且Ⅲ-Ⅳ期EMT患者血清FGF21水平低于Ⅰ-Ⅱ期EMT患者,IFI16水平高于Ⅰ-Ⅱ期EMT患者(均P<0.05);pearson分析显示,EMT组血清FGF21水平与IL-6、IL-8、TNF-α水平呈负相关,IFI16水平与IL-6、IL-8、TNF-α水平呈正相关(均P<0.05);高水平FGF21为EMT的独立保护因素,高水平IFI16、IL-6、IL-8、TNF-α均为EMT的独立危险因素(均P<0.05);血清FGF21、IFI16诊断EMT的曲线下面积(AUC)分别为0.875、0.838,两者联合诊断AUC为0.932,优于单独指标诊断(P<0.05),其特异性85.2%,敏感性86.1%。结论:EMT患者血清FGF21水平下调、IFI16水平上调,二者联合诊断EMT较高临床价值。

干扰素诱导蛋白16的生物学机制研究进展

干扰素诱导蛋白16(interferonγ-inducible protein 16,IFI16)是人类PYHIN(pyrin and HIN domain-containing protein)家族(也称干扰素诱导蛋白P200家族)成员之一,在人体器官组织中广泛存在,参与细胞周期调控、细胞衰老、细胞凋亡及免疫反应等多种生物过程。不同生理及病理状态下,IFI16的含量及定位均会发生改变,近年来研究发现,其在抗病毒、肿瘤、炎性疾病及其他多种疾病发生发展过程中可能发挥重要作用。该文对其机制及其在疾病中的研究现状进行综述,以期为深入研究IFI16提供参考。

IFI16在骨巨细胞瘤中的表达及临床意义

目的研究干扰素诱导p200蛋白家族(Interferon-inducible p200 family,IFI200)成员干扰素诱导蛋白16(IFI16)在骨巨细胞瘤(gaint cell tumor,GCT)中的表达,探讨其在骨巨细胞瘤表达特点及临床意义。方法以51例骨巨细胞瘤的组织蜡块切片和正常人的骨骼组织切片为材料,通过免疫组化S-P法检测IFI16在骨巨细胞瘤基质细胞的细胞核中的表达,观察对比IFI16在骨巨细胞瘤Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级中IFI16的阳性表达率。结果 IFI16蛋白的表达阳性反应主要位于骨巨细胞瘤的多核细胞的细胞核内,显色为棕黄色颗粒,少数病例胞浆中亦可阳性;单核基质细胞则少有阳性,IFI16表达总阳性率为32.4%,有67.6%的骨巨细胞瘤存在IFI16表达缺失,在骨巨细胞瘤Ⅰ级中阳性表达率为57.1%,Ⅱ级中为27.8%,Ⅲ级中为15.6.%,Ⅰ级和Ⅱ级、Ⅲ级之间有显著性差异(P<0.05),而在Ⅱ级和Ⅲ级之间没有显著性差异(P>0.05),IFI16蛋白在骨巨细胞瘤Ⅰ级中的阳性表达率均显著高于Ⅱ级和Ⅲ级(P<0.05),而对照组正常人的骨骼组织细胞核中IFI16蛋白的表达显示为阳性。结论 IFI16的表达随着骨巨细胞瘤的分级增高而降低,在肿瘤发生、发展的过程中起重要的作用,符合IFI16作为肿瘤抑制因子的作用。因此在判定骨巨细胞瘤恶性程度方面,IFI16低表达可作为指标之一。

磷酸化蛋白质组学联合蛋白质组学分析敲除维甲酸诱导蛋白16对人结肠癌细胞的影响

目的分析人结肠癌HCT116细胞敲除维甲酸诱导蛋白16(RAI16)后细胞内总蛋白及磷酸化蛋白质表达的差异,探究RAI16影响HCT116细胞蛋白质功能的可能机制及相关信号通路。方法收集并提取HCT116 KO和WT细胞蛋白,SDS-PAGE检验蛋白提取效果。利用胰蛋白酶酶解蛋白后,标记肽段并进行质谱分析。对鉴定到的差异蛋白及差异磷酸化蛋白质利用GO数据库、KEGG数据库和STRING数据库进行生物信息学分析。结果SDS-PAGE结果提示蛋白无明显降解,且实验组与对照组部分关键条带有明显差异;按Foldchange≥1.5或Foldchange≤1/1.5且P<0.05为条件进行差异蛋白的筛选,共筛选出147个上调差异蛋白和230个下调差异蛋白;并筛选到106个上调磷酸化位点和217个下调磷酸化位点。将去本底差异磷酸化位点功能GO富集分析,发现差异蛋白主要在核质、细胞核及细胞质组成,RNA、钙黏着蛋白及染色质结合,DNA修复、RNA剪接及DNA为模板转录的正调控等多个方面有显著富集趋势。KEGG富集结果显示,差异蛋白主要在核质转运、剪接体、细胞周期、细胞间紧密连接、病毒致癌作用和癌症中的微小RNA等通路具有显著富集趋势。蛋白互作网络主要以DDX17、NCL、EEF2、CDK1、SSRP1和SMARCC1为核心蛋白质。统计发现,SKP1、ORC1和BAD等两组学差异变化均上调,且磷酸化差异变化比蛋白差异变化更显著,RBL1、RB1、CDK1、CDC6、MCM4、TFDP1、CHD4和SNW1等两组学差异变化均下调,且磷酸化差异变化比蛋白差异变化更显著。结论RAI16可能通过SKP1、ORC1、RB1和CDK1等关键蛋白质在多方面生物功能和多条信号通路中发挥作用,影响细胞周期,进而影响癌症发生发展。

视黄酸诱导蛋白16蛋白质结构功能分析

目的:分析Tec激酶区作用蛋白视黄酸诱导蛋白16(RAI16)的蛋白质结构和功能信息.方法:利用相应的计算机软件及数据库,对RAI16 cDNA序列进行分析和比较,并对编码的蛋白质氨基酸序列及其二级结构进行分析和预测.结果:RAI16 cDNA序列由2863个核苷酸组成,编码759氨基酸蛋白质,RAI16蛋白包括一段由31个氨基酸组成的信号肽,没有跨膜区,亚细胞定位于内质网上,有多种二级结构形式,为一紧密包裹的球状蛋白质,是一种分泌蛋白,有多个磷酸化和蛋白酶切位点.RAI16蛋白为不稳定蛋白,不稳定系数为53.11.疏水性GRAVY(grand average of hydropathicity)值为-0.136.结论:RAI16蛋白作为一种新的胞内信号蛋白,很可能在肝癌细胞的诱导分化信号转导转录中与Tec协同发挥重要作用.

支气管哮喘患者CC16与气道炎症及Th1/Th2细胞因子的关系

目的探讨支气管哮喘(哮喘)患者CC16与气道炎症及Th1/Th2细胞因子的关系。方法采取病例对照研究,收集25例哮喘急性发作期患者和33例健康对照组。采外周静脉血分离血浆,提取外周血单个核细胞(PBMC),用ELISA测定血浆中CC16、干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-4(IL-4)的水平;用RT-PCR法检测PBMC转录因子T-bet和Gata-3mRNA表达水平。结果 1.哮喘组CC16及IFN-γ分别为(21.96±7.31)ng/ml,(118.73±22.59)pg/ml,明显低于对照组[分别为(64.88±25.27)ng/ml和(145.53±29.50)pg/ml,(均P<0.01)],哮喘组IL-4(425.22±4.37)pg/ml高于对照组(69.72±10.15)pg/ml,(P<0.01)。2.哮喘组T-betmRNA、T-bet/GATA-3表达水平(0.12±0.01,0.25±0.04)显著低于对照组(0.48±0.12,1.894±0.65)(均P<0.01),GATA-3mRNA表达(0.45±0.05)较对照组明显升高(0.30±0.08)(P<0.01)。3.CC16与T-betmRNA表达水平、T-bet/GATA-3呈正相关(r分别为0.792,0.761,均P<0.01);与GATA-3mRNA无明显相关性(r=-0.146,P=0.551)。结论 CC16参与哮喘气道炎症反应,并以Th1/Th2细胞因子失衡为特点。

Tec激酶区作用蛋白RAI16的筛选和结构功能分析

目的筛选与Tec激酶结构域相互作用的蛋白分子,并获得其蛋白质结构及功能信息。方法通过酵母双杂交技术筛选作用蛋白,利用相应的计算机软件及数据库,对筛库所得蛋白进行生物信息学分析。结果筛选得到1种Tec激酶区作用蛋白RAI16,其cDNA序列由2863个核苷酸组成,编码759aa蛋白质,具有多个功能基序,其中包括3个酪氨酸磷酸化位点。结论推测RAI16蛋白与细胞分化有关,很可能在肝癌细胞的诱导分化信号转导转录中与Tec协同发挥重要作用。

干扰素诱导蛋白16在结直肠癌中的表达及与p53、p21^(waf1/cip)表达的相关性

目的探讨结直肠癌组织中干扰素诱导蛋白16(IFI16)表达与p53及p21waf1/cip表达间的相关性。方法免疫组化SP法检测56例不同病理组织分化结直肠癌标本IFI16、p53、p21waf1/cip的蛋白表达,Pearson等级相关分析法分析及其表达间的相关性。结果在结直肠癌细胞中IFI16除呈现胞核表达外,尚存在胞质的异位表达。IFI16的表达与p21waf1/cip表达呈正相关(r=0.365,P<0.01),而异位的IFI16与p21waf1/cip表达呈负相关(r=-0.298,P<0.05);IFI16的表达与p53表达无显著相关性(r=0.056,P>0.05)。结论 IFI16可能通过细胞表达及定位调控p21waf1/cip及其下游路径激活参与结直肠癌的发生、发展。

RAI16基因真核表达载体的构建及在HepG2中的表达

目的构建人视黄酸诱导蛋白16(retinoic acid induced 16,RAI16)与增强型绿色荧光蛋白(enhanced greenfluorescent protein,EGFP)的融合基因真核表达载体pEGFP-C1-RAI16,使RAI16-EGFP融合蛋白在人肝癌细胞株HepG2中得到表达。方法采用PCR技术,从含有目的基因的质粒克隆模板中钓取并扩增出RAI16全长编码基因,构建RAI16与EGFP的融合基因真核表达载体pEGFP-C1-RAI16,用脂质体转染技术将pEGFP-C1-RAI16导入HepG2,激光共聚焦分析RAI16亚细胞定位及Western blot检测RAI16-EGFP融合蛋白的表达。结果经转化细菌、抽提质粒、酶切鉴定和DNA序列分析证实,RAI16基因已正确插入pEGFP-C1中EGFP基因的下游,获得融合基因表达载体pEGFP-C1-RAI16。将pEGFP-C1-RAI16导入HepG2细胞24 h后,激光共聚焦分析显示RAI16-EGFP融合蛋白主要表达于细胞质内。Western blot结果显示,转染pEGFP-C1-RAI16 24、48 h和72 h后,RAI16基因在蛋白水平的表达逐渐增高,而AFP的表达逐渐下调。结论成功构建了真核表达载体pEGFP-C1-RAI16,并在HepG2细胞中进行了表达。

Tec激酶区作用蛋白RAI16的原核表达和纯化

目的:利用原核表达系统构建Tec激酶区作用蛋白RAI16的融合蛋白表达载体,并进行表达条件的优化和初步纯化.方法:设计基因拼接引物,合成RAI16cDNA序列,将其连接于克隆载体pMD18-T中;将酶切、纯化的RAI16基因与pGEX4T-2载体相连接、转化、筛选.将鉴定阳性的重组子质粒转人大肠杆菌BL-21表达菌中,采用SDS-PAGE电泳分析不同浓度诱导剂异丙基硫代-D-半乳糖苷(IPTG)、不同诱导温度、不同诱导时间下目的蛋白的表达.结果:成功构建RAI16蛋白原核表达载体.采用0.4mmol/LIPTG、30℃诱导4h,获得较高表达目的蛋白.融合蛋白主要以包涵体形式表达,将包涵体进行尿素法变性复性和亲和层析柱处理后,获得可溶的高纯度GST-多肽融合蛋白.结论:Tec激酶区作用蛋白RAI16融合蛋白表达的载体和纯化,是制备RAI16多抗以及进一步验证与Tec体外结合作用实验的基础.

沉默干扰素诱导蛋白16对人主动脉外膜成纤维细胞凋亡的影响

目的探究沉默干扰素诱导蛋白16(IFI16)对人主动脉外膜成纤维细胞(HAAFs)凋亡的影响。方法检测HAAFs凋亡、IFI16、细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)及磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)蛋白表达。结果基因沉默组IFI16低于另两组(P<0.05),基因沉默组ERK1/2及p-ERK1/2蛋白表达高于另两组(P<0.05),阴性对照组及空白组HAAFs凋亡率、IFI16、ERK1/2及p-ERK1/2蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论沉默IFI16表达能够降低HAAFs凋亡率。