人白细胞介素23受体基因的克隆和原核表达

目的:从外周血单个核细胞(PBMC)中克隆人白细胞介素23受体(hIL-23R)编码区序列,构建原核表达载体并在大肠杆菌中进行表达。方法:分离人外周血单个核细胞(PBMC),提取PBMC的总RNA,应用RT-PCR技术,以PBMC的cDNA为模版,扩增出hIL-23R的编码区(1890bp),将其克隆至pMD 19-T载体,经酶切和测序鉴定后,亚克隆于pGEX-4T-1中构建原核表达载体pGEX-4T-1-hIL-23R,转化大肠杆菌感受态细胞BL-21(DE3),异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后收集菌体蛋白,经Western-blot对融合蛋白进行鉴定。结果:获得了hIL-23R编码区序列,构建原核表达载体并在大肠杆菌中表达,表达的融合蛋白主要以包涵体形式存在,其相对分子质量Mr为97KDa。结论:成功构建hIL-23R原核表达载体并在大肠杆菌中表达hIL-23R融合蛋白。

白细胞介素-23受体基因多态性与炎症性肠病关系的初步研究

目的初步探讨白细胞介素-23受体（IL23R）基因中两个单链核苷酸多态性（SNP）位点（rs11209026和rs11805303）的遗传多态性和炎症性肠病（IBD）的发病易感性之间的关系。方法采用聚合酶链反应（PCR）直接测序法检测50名健康人和81例IBD患者（其中克罗恩病41例，溃疡性结肠炎40例）的两个SNP位点基因多态性。结果rs11209026位点基因型频率和等位基因频率在克罗恩病患者分别为7．3％和3．7％，在溃疡性结肠炎患者分别为15．0％和7．5％，在对照组分别为14．0％和7．0％，三组间差异均无统计学意义（P值均〉0．05）。rs11805303位点的基因型频率和等位基因频率在克罗恩病患者分别为22．0％和52．4％、在溃疡性结肠炎患者分别为15．0％和41．2％，在对照组分别为34．0％和59．0％，三组间基因型频率比较差异均无统计学意义（P值均〉0．05），而等位基因频率在溃疡性结肠炎患者和对照组间差异有统计学意义（P=0．018）。rs11805303位点基因多态性与溃疡性结肠炎患者的发病年龄、性别、疾病的活动性及发病部位均无关（P值均〉0．05）。结论IL23R两个SNP位点基因多态性与克罗恩病无相关性。rs11805303位点的多态性可能为溃疡性结肠炎患者的一个遗传标志，但与该病病变特点无显著相关。

白细胞介素-23受体基因多态性与中国江苏地区汉族炎症性肠病的关系

目的研究中国江苏汉族人群炎症性肠病（IBD）发病易感性和白细胞介素-23受体（IL-23R）rs1004819、rs1495965、rs1884444、rs2201841、rs6677188、rs7517847、rs753051]、rs10489629、rs10889677、rs11209026位点单核苷酸多态性（SNP）间的关系。方法采用多重SNaPshot SNP分型技术，检测134名健康志愿者、135例溃疡性结肠炎（UC）和43例克罗恩病（CD）患者的基因多态性。实验数据使用SPSS17．0软件进行分析。结果UC组rs7530511位点CC基因型频率、CT基因型频率、C等位基因频率、T等位基因频率分别为99．26％（134／135）、0．74％（1／135）、99．63％（269／270）、0．37％（1，／270），正常对照组则分别为94．03％（126／134）、5．97％（8／J34）、97．01％（260／268）、2．99％（8／268），两组基因型频率比较P=0．040、OR=0．118、95％CI：0．014～0．953，两组等位基因频率比较P=0．043、0R：0．121、95％CI：0．015-0．973。在rs6677188野生型和突变型的UC患者中，各年龄段的分布比例不同，突变型者中青年患者较多，野生型者中中年患者较多．P值分别=0．032和0．001。UC患者中rs6677188AT基因型者多处于内镜缓解期（P=0．032）。结论IL-23Rrs7530511位点突变是UC的保护性因素。rs6677188多态性与患者年龄和内镜下缓解与否有关。