IL-2、IL-4基因转染后肿瘤细胞表面ICAM-1分子的表达及其作用

为了进一步研究细胞因子基因转染后肿瘤细胞体内致癌原性、免疫原性变化的分子 机制，将ＩＬ－２、ＩＬ－４ 基因转染入Ｂ１６黑色素瘤细胞，观察了其体内接种后致瘤原性变化，通过 ＦＡＣＳ法检测了其细胞表面粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）的表达水平，分析了其细胞表面 ＩＣＡＭ－１表达水 平以及它们与肿瘤细胞对ＬＡＫ、ＣＴＬ等免疫效应细胞杀伤敏感性变化的关系。结果表明，ＩＬ－２、ＩＬ－ ４基因转染后Ｂ１６细胞体内致瘤原性明显降低，其细胞表面ＩＣＡＭ－１的表达高于野生型Ｂ１６细胞， 且对ＬＡＫ、ＣＴＬ细胞的杀伤敏感性增加。抗ＩＣＡＭ－１单抗可以阻断ＩＬ－２、ＩＬ－４基因转染后Ｂ１６细 胞对ＬＡＫ、ＣＴＬ杀伤敏感性的增强效应。表明细胞因子基因转染后Ｂ１６细胞体内致瘤原性改变除 与其诱导或增强机体的抗肿瘤免疫反应有关外，还与细胞表面ＩＣＡＭ－１分子的表达增加从而使其 对免疫效应细胞的杀伤敏感性增强有关。

人IL-4重组逆转录病毒载体的构建及在人肿瘤细胞中的表达

利用多聚酶链反应（ＰＣＲ）方法，从ＰＣＤ－ｈＩＬ－４质粒中扩增得到人白细胞介素４（ｈＩＬ－４）的ｃＤＮＡ－。ＤＮＡ序列测定证实此片段包含完整的ＩＬ－４开放阅读框架。应用ＤＮＡ重组技术，将此ｃＤＮＡ重组于逆转录病毒载休ＬＸＳＮ。用脂质体转染法将此重组质粒导入病毒包装细胞ＰＡ３１７。得到滴度为２．５ｘ１０ＣＦＵ／ｍｌ的感染性病毒。病毒感染人白血病细胞株ＨＬ－６０、Ｋ５６２及Ｂｕｒｋｉｔ淋巴瘤细胞株Ｒａｊｉ，使之表达并分泌ＩＬ－４。逆转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）法证实ｈＩＬ－４ｃＵＮＡ可在上述肿瘤细胞中持续转录。ＥＬＩＳＡ怯证实病肿瘤细胞分辨ＩＬ一４水平可高达３００Ｐ／１０细胞．２４小时。本研究为进一步探讨转ＩＬ一４基因用于血液系统恶性肿瘤免疫治疗的价值提供了基础。

白细胞介素4基因转移的肿瘤细胞体外生物学特性及体内致瘤性的研究

观察了白细胞介素４（ＩＬ－４）基因转移的肿瘤细胞体内致瘤性的变化。构建了含５００ｂｐ的小鼠ＩＬ－４ｃＤＮＡ的真核表达载体ＢＭＧＮｅｏ－ＩＬ－４．用该表达载体将ＩＬ－４基因转移至小鼠Ｂ１６黑色素瘤细胞，通过Ｇ４１８抗性筛选、有限稀释法及ＩＬ－４活性检测，获得了高分泌ＩＬ－４的黑色素瘤细胞克隆株并经Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹鉴定，将其接种于小鼠皮下后观察到肿瘤生长缓慢、小鼠存活期延长，表明高分泌ＩＬ－４的细胞克隆株体内致瘤性显著下降。该结果为进一步研究肿瘤的ＩＬ－４基因治疗打下了基础。

白细胞介素4基因转移的肿瘤细胞体内增强巨噬细胞功能的实验研究

观察了小鼠接种高分泌ＩＬ－４的黑色素瘤细胞后腹腔内巨噬细胞功能的变化。荷瘤小鼠腹腔内巨噬细胞杀伤性在荷瘤后第４天及第１２天出现两个高峰；荷瘤后第１５天小鼠腹腔内巨噬细胞的吞噬能力及ＭＨＣⅡ类抗原的表达增强，抗原提呈能力增高；荷瘤后第４天及第１２天腹腔内巨噬细胞经诱导的ＩＬ－１水平出现两个高峰，经诱导的ＴＮＦ水平变化不明显。此实验结果表明，高分泌ＩＬ－４的黑色素瘤细胞体内生长受抑制的原因之一是ＩＬ－４基因的导入及ＩＬ－４的分泌使体内巨噬细胞的抗原提呈能力增强及杀伤活性的显著提高，因而使机体抗肿瘤免疫功能得以增强。

人IL-4基因修饰诱导肝母细胞瘤细胞凋亡及分化的研究

目的 研究人白细胞介素 4(IL 4)基因修饰对肝母细胞瘤细胞凋亡及分化的影响及可能机制。方法 以逆转录病毒为载体将人IL 4基因导入人肝母细胞瘤细胞系 (HepG2 )细胞。台盼蓝拒染、瑞氏染色、放射免疫测定、流式细胞仪细胞周期分析、原位杂交等方法检测人IL 4基因修饰后细胞形态、甲胎蛋白合成以及原癌基因c fos、c jun、c myc表达的变化。流式细胞仪AnnexinⅤ /PI双染色法及间接免疫荧光染色法检测凋亡细胞及凋亡调控基因p5 3、bcl 2的蛋白表达。结果 (1)人IL 4基因修饰较空载体修饰及野生型HepG2细胞的细胞周期发生G0 /G1期阻滞 ,甲胎蛋白分泌量及原癌基因c fos、c jun、c myc表达降低 (P <0 .0 0 1)。细胞在形态及功能上趋向正常肝细胞转化 ;(2 )较空载体修饰及野生型HepG2细胞 ,IL 4基因修饰后部分细胞形态上出现核固缩等典型凋亡细胞的特征 ,流式细胞仪亦检测到 18.5 %± 4.7%的凋亡细胞 ;(3)人IL 4基因修饰增加p5 3而抑制bcl 2表达 (P <0 .0 5 )。结论 人IL 4基因修饰可诱导肝母细胞的凋亡及分化 ,诱导凋亡细胞可能与上调p5 3蛋白及抑制bcl 2蛋白表达有关。

IL-4基因转染诱导肝母细胞瘤分化及抑制端粒酶活性

目的 研究人白细胞介素 4(human interleukin- 4,h IL- 4)基因转染对肝母细胞瘤细胞的诱导分化和对端粒酶活性的影响。方法 以逆转录病毒载体 (PL- IL- 4- SN)将 h IL- 4基因导入人肝母细胞瘤细胞系 Hep G2细胞。台盼蓝拒染、瑞式染色、放射免疫测定、流式细胞仪细胞周期分析、原位杂交、PCR-EL ISA等方法检测基因转染后细胞形态、甲胎蛋白合成、原癌基因的表达及端粒酶活性变化。结果 转染IL- 4基因后 Hep G2细胞生长速度减慢 (P<0 .0 5 ) ,细胞周期发生 G0 /G1 期阻滞 ,细胞形态趋于向正常肝细胞转化。甲胎蛋白分泌量 (3.2 6± 1.43ng· 10 6 cells- 1 · 2 4h- 1 )较未转基因细胞 (15 .6± 0 .6 7ng.10 6 ·cells- 1· 2 4h- 1 )降低 (P<0 .0 5 ) ;原癌基因表达及端粒酶活性降低 (P<0 .0 1)。结论 h IL- 4基因转染可诱导肝母细胞瘤分化及下调端粒酶活性。

IL-4基因修饰抗人脑胶质瘤效应的体外研究

目的 探讨人IL 4基因修饰对人脑胶质瘤的抑瘤效应及可能机制。方法 以逆转录病毒载体将人IL 4基因导入人脑胶质瘤细胞系SHG4 4细胞 ,用3H掺入法及流式细胞仪分析IL 4基因转染对人脑胶质瘤细胞增殖及细胞周期的影响 ;3H掺入法、51Cr释放法检测IL 4基因修饰瘤苗对健康人外周血单个核细胞 (PBMC)增殖、细胞毒性T细胞 (CTL)反应的影响。结果 与野生型瘤细胞比较 ,IL 4基因修饰瘤细胞增殖明显被抑制 (P <0 0 5 ) ,79 2 9%的瘤细胞滞留于G0 /G1期细胞 ,IL 4基因修饰瘤苗所诱导的PBMC增值反应及CTL杀伤活性分别是野生型瘤细胞的 3倍及 7倍 (P <0 0 5 ) ,并能促进瘤特异性CTL及其前体细胞分泌IL 2。用抗IL 4单克隆抗体 (Mab)可明显阻断其诱导的CTL反应 ,抗IL 2Mab则完全阻断此诱导反应。加入IL 4基因修饰瘤苗培养上清至野生型肿瘤培养中也能抑制肿瘤增殖、诱导PBMC增殖和CTL反应。结论 IL 4基因修饰可通过直接抑制脑胶质瘤细胞增殖 ,诱导PBMC增殖及CTL杀伤活性而发挥抗瘤效应 ,其对CTL杀伤活性的促进作用可能与诱导CTL及其前体细胞分泌IL