miR-141-3p、KLF9异常表达对前列腺癌细胞株药物敏感性和雄激素受体表达的影响及靶向关系

目的观察miR-141-3p、Krüppel样因子9(KLF9)对前列腺癌细胞株药物敏感性、雄激素受体(AR)表达的影响,验证miR-141-3p、KLF9之间的靶向关系,以探讨miR-141-3p、KLF9对PCa药物敏感性的调控作用及机制。方法选择雄激素敏感且表达AR的LNCaP细胞株。将细胞分为miR-141-3p低表达组、miR-141-3p正常组、KLF9过表达组、KLF9正常组,采用脂质体转染法分别转染miR-141-3p-inhibitor、inhibitor阴性对照物(inhibitor-NC)、KLF9过表达质粒、空白质粒。上述各组细胞加入不同浓度(0、10、25、50、75、100µmol/L)比卡鲁胺或(0.5、1.0、2.5、5.0 nmol/L)多西他赛后培养48 h,检测各组细胞OD值,计算细胞增殖率(反映药物敏感性)。采用qRT-PCR和Western blotting法检测各组细胞中AR及AR-V7。采用TargetScan数据库预测miR-141-3p与KLF9是否存在结合位点,然后采用荧光素酶报告基因实验验证miR-141-3p与KLF9的靶向调控关系[将LNCaP细胞株分别分为A、B、C、D组,A组先后转染野生型KLF9荧光素酶报告基因质粒(KLF9-WT)、inhibitor-NC,B组先后转染KLF9-WT、miR-141-3p-inhibitor,C组先后转染突变型KLF9荧光素酶报告基因质粒(KLF9-Mut)、inhibitor-NC,D组先后转染KLF9-Mut、miR-141-3p-inhibitor,转染24 h后检测各组荧光素酶活性]。通过细胞功能回复实验进一步验证miR-141-3p通过靶向调控KLF9抑制前列腺癌细胞药物敏感性[将LNCaP细胞株分别分为a、b、c、d组,a组先后转染si-KLF9阴性对照(si-Ctrl)、inhibitor-NC,b组先后转染si-Ctrl、miR-141-3p-inhibitor,c组先后转染si-KLF9、inhibitor-NC,d组先后转染si-KLF9、miR-141-3p-inhibitor,转染24 h后分别使用75µmol/L比卡鲁胺或2.5 nmol/L多西他赛处理细胞48 h,使用CCK-8法检测细胞OD值,并计算细胞增殖率]。结果LNCaP细胞培养48 h,在无药物加入时,miR-141-3p低表达组细胞增殖率低于miR-141-3p正常组(P均<0.05),KLF9过表达组细胞增殖率低于KLF9正常组(P均<0.05);随着药物浓度升高,各组细胞增殖率呈下降趋势(P均<0.05);在同等药物浓度情况下,miR-141-3p低表达组细胞增殖率低于miR-141-3p正常组(P均<0.05),KLF9过表达组细胞增殖率低于KLF9正常组(P均<0.05)。LNCaP细胞培养48 h,与不加入药物的miR-141-3p正常组相比,加入75、100µmol/L比卡鲁胺的miR-141-3p正常组AR相对表达量升高(P均<0.05),加入50、75、100µmol/L比卡鲁胺的miR-141-3p正常组AR-V7相对表达量升高(P均<0.05);加入0.5、1.0、2.5、5.0 nmol/L多西他赛的miR-141-3p正常组AR及AR-V7相对表达量升高(P均<0.05)。miR-141-3p低表达组的AR及AR-V7相对表达量低于加入同药物浓度的miR-141-3p正常组(P均<0.05),KLF9过表达组的AR及AR-V7相对表达量低于加入同药物浓度的KLF9正常组(P均<0.05)。TargetScan数据库预测miR-141-3p与KLF9存在结合位点,双荧光素酶报告实验显示,B组的相对荧光活性高于A组、C组及D组(P均<0.05)。功能回复实验结果显示,d组的细胞增殖率高于b组(P均<0.05),低于c组(P均<0.05),但与a组差异无统计学意义(P>0.05)。结论miR-141-3p低表达、KLF9过表达均可增强LNCaP细胞株的药物敏感性,并可抑制LNCaP细胞株AR和AR-V7的表达,miR-141-3p和KLF9存在靶向关系,miR-141-3p可靶向KLF9抑制LNCaP细胞药物敏感性,可能是通过促进AR-V7的表达实现的。

雄激素受体剪接变异体7检测方法的研究进展

去势抵抗型前列腺癌(CRPC)治疗方法包括:以紫杉烷为基础的化疗、新型内分泌治疗、免疫疗法和镭233。目前尚无能预测CRPC患者治疗疗效并指导用药的临床生物标志物,大量研究显示雄激素受体剪接变异体(AR-V7)与阿比特龙、恩杂鲁胺耐药相关,而与紫杉烷类药物的耐药不相关,有望成为预测临床疗效、指导用药选择的一种临床实用的肿瘤标志物。然而,AR-V7的检测方法成为其应用于临床的挑战之一。本文就现有的AR-V7检测方法做一综述,并对AR-V7临床应用进行展望,以期推进AR-V7从实验室走向临床。

白细胞介素-7选择性剪接变异体的研究

目的 寻找人肿瘤细胞选择性的白细胞介素 7(Interleukin 7,IL 7)剪接变异体。方法 运用自行设计的IL 7引物 ,采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术 ,分离正常肝组织、原发肝癌组织、正常胃组织和胃癌组织IL 7mRNA ,再对电泳所获条带进行克隆、测序。结果 正常肝组织、原发肝癌组织、正常胃组织和胃癌组织都能检测到IL 7mRNA ,而且从肝癌组织、胃癌组织中各分离出一条新带 ,经亚克隆及测序 ,证实这两条带分别是人IL 7基因cDNA第 4外显子 (肝癌组织 )和第 5外显子 (胃癌组织 )缺乏所致。结论 肝癌组织和胃癌组织存在不同选择性IL 7剪接变异体。这些变异体的发现 ,为肿瘤病人的免疫调节紊乱以及肿瘤病人的临床免疫治疗提供了新的研究方向。

白细胞介素7(IL-7)选择性剪接变异体的筛选和序列测定

目的:寻找人肿瘤细胞选择性的白细胞介素7(Interleuk in-7)剪接变异体。方法:运用自行设计的IL-7引物,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,分离正常肝组织、原发肝癌组织、正常胃组织和胃癌组织IL-7 mRNA,再对电泳所获条带进行克隆、测序。结果:正常肝组织、原发肝癌组织、正常胃组织和胃癌组织都能检测到IL-7 mRNA,而且从肝癌组织、胃癌组织中各分离出一条新带,经亚克隆及测序,证实这两条带分别是人IL-7基因cDNA第四外显子(肝癌组织)和第五外显子(胃癌组织)缺乏所致。结论:肝癌组织和胃癌组织存在不同选择性IL-7剪接变异体。这些变异体的发现,为肿瘤病人的免疫调节紊乱以及肿瘤病人的临床免疫治疗提供了新的研究方向。

AR-V7水平改变与转移性前列腺癌患者应用地塞米松联合阿比特龙治疗的敏感性及其与预后的关系

目的:探讨雄激素受体剪接变异体7(AR-V7)表达改变与转移性前列腺癌(mPC)患者应用阿比特龙联合地塞米松(AA+D)治疗的敏感性及其与预后的关系。方法:选取80例mPC患者为研究对象,依照免疫组织化学检测结果分为AR-V7阳性组(n=29)与AR-V7阴性组(n=51),两组患者均予以AA+D治疗。比较两组患者临床病理特征及预后,分析影响预后的相关因素。结果:AR-V7阳性组病程长于AR-V7阴性组(P<0.05);舒张压水平、浸润深度、mGPS评分高于AR-V7阴性组(P<0.05);肿瘤最大径≥2 cm、有吸烟史、淋巴结转移患者比例高于AR-V7阴性组(P<0.05)。随访1~5年,AR-V7阳性组PFS及OS短于AR-V7阴性组(P<0.05)。多因素Cox回归分析显示,T分期和AR-V7阳性是影响mPC患者总生存期的独立因素(P<0.05)。结论:AR-V7表达情况与mPC患者的病情严重程度紧密相关,同时影响地塞米松联合阿比特龙的治疗效果,可作为衡量mPC预后的敏感标志物之一。

白细胞介素7剪接变异体的克隆和序列分析

目的:克隆白细胞介素-7(IL-7)剪接变异体,筛选出在IL-7开放阅读框内剪接变异体,为其生物活性的研究打基础。方法:运用自行设计的IL-7引物,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,分离正常培养的肝癌细胞株HepG2、结肠癌细胞株HT29IL-7mRNA,再对电泳所获条带进行克隆、测序和分析。结果:肝癌细胞株HepG2、结肠癌细胞株HT29都能检测到IL-7mRNA,而且从培养癌细胞株分离出多条新带,经亚克隆及测序,证实这些条带是来源人IL-7基因、但缺乏不同外显子的IL-7剪接变异体cDNA;通过和IL-7cDNA比对分析,发现其中5个剪接变异体在IL-7开放阅读框内。结论:IL-7剪接变异体广泛存在于各种肿瘤细胞中。对其进一步的研究,将为癌症病人的免疫调节紊乱和临床免疫治疗提供新的研究方向。

转移性去势抵抗性前列腺癌临床治疗标志物——雄激素受体剪接变异体7

随着越来越多的转移性前列腺癌患者对去势治疗抵抗,进入去势抵抗性前列腺癌(CRPC)阶段,治疗方案的合理选择及对治疗效果的预测变得越来越重要。大量研究发现雄激素受体变异体7(ARV7)参与CRPC发生与进展的过程。研究发现ARV7在CRPC中表达水平明显高于激素敏感性前列腺癌,在对阿比特龙、恩扎鲁胺治疗抵抗以及紫杉烷类药物化疗逃逸的机制中发挥了重要作用。此外,部分临床研究发现,ARV7的水平可提示不同治疗方案的预后:循环肿瘤细胞(CTC)ARV7阴性预示新型内分泌治疗与紫杉烷类化疗效果有效,而CTC ARV7阳性则预示新型内分泌治疗效果不佳。这些发现预示ARV7可成为临床医生对于CRPC治疗方案的选择以及判断预后等方面的生物标志物。

雄激素受体剪接变异体7在去势抵抗性前列腺癌中的作用及其临床意义

去势抵抗性前列腺癌(CRPC)是经过初次持续内分泌治疗后仍然进展的前列腺癌。CRPC的发生和发展机制极其复杂,目前尚未完全研究清楚,但雄激素受体(AR)信号的持续激活仍是重要因素。雄激素受体剪接变异体7(AR-V7)是AR重要的变异体之一,其与CRPC发生、发展存在密切联系,在促进AR的再活化、肿瘤的生长转移以及耐药性的产生中起着重要作用,与内分泌治疗的敏感性和总体存活率降低相关,是一种潜在评价指标,深入研究AR-V7与CRPC的关系,不仅可以指导现阶段CRPC的用药,还可以为CRPC的治疗提供新的途径和方向。

AR-V7在前列腺癌细胞耐药中的作用

目的:探讨雄激素受体剪接变异体7(AR-V7)在前列腺癌细胞耐药中的作用及分子机制。方法:运用Lipofectamine2000转染法将AR-V7 siRNA(siAR-V7)转染至4株前列腺癌细胞中,命名为PC3-siAR-V7、DU145-siAR-V7、LNCaP-siAR-V7和ArCaP-siAR-V7细胞,以转染无关序列(NC siRNA)为阴性对照。运用real-timePCR和Westernblot实验分别检测转染前后细胞中AR-V7的mRNA和蛋白表达水平;运用MTT法和Transwell法分别检测细胞活力和细胞迁移率;运用萤光素酶报告基因实验和Western blot实验分别检测AR的启动子活性及下游靶基因前列腺特异性抗原(PSA)和FK506结合蛋白5(FKBP5)的蛋白表达。构建耐比卡鲁胺的前列腺癌细胞系LNCaP-DR,运用免疫荧光观察LNCaP、LNCaP-siAR-V7和LNCaP-DR细胞中AR和AR-V7的亚细胞定位;运用蛋白质免疫共沉淀实验检测AR-V7与热休克蛋白90(HSP90)的相互作用。结果:4株前列腺癌细胞中的AR-V7 mRNA水平显著高于正常前列腺上皮细胞RWPE-1(P<0.05);PC3-siAR-V7、DU145-siAR-V7、LNCaP-siAR-V7和ArCaPsiAR-V7细胞中AR-V7蛋白水平、细胞活性及细胞迁移率显著低于NCsiRNA转染的细胞(P<0.05)。随着比卡鲁胺剂量的增加,所有细胞活力逐渐降低,而下调AR-V7表达显著增强前列腺癌细胞对比卡鲁胺的敏感性(P<0.05)。Westernblot结果显示下调AR-V7表达显著抑制AR启动子活性,其下游PSA和FKBP5蛋白水平明显降低(P<0.05)。免疫荧光结果发现AR和AR-V7主要存在于前列腺癌细胞核内,AR少量存在于细胞质中;下调AR-V7表达则抑制AR的核转运;AR存在于耐药细胞核中,AR-V7在耐药细胞中高表达。免疫共沉淀结果显示内源性AR-V7与HSP90相互作用。结论:AR-V7在前列腺癌细胞中高表达,下调AR-V7的表达显著抑制前列腺癌细胞活力和迁移;前列腺癌细胞耐药与AR-V7高表达相关,其机制可能通过AR-V7与HSP90相互作用介导AR-V7的核转运,激活AR信号通路调控下游靶基因的转录活性最终导致细胞耐药。

白细胞介素7剪接变异体蛋白的表达、复性和纯化

目的表达、复性和纯化重组人白细胞介素7剪接变异体蛋白(interleukin-7 splice variants,IL-7splice variants),为下一步功能研究奠定基础。方法在IL-7剪接变异体(IL-7δ4/5以及IL-7δ3/4)cDNA克隆的基础上进行亚克隆,插入细菌表达载体pET-21b中,构建相应的原核表达载体,阳性克隆测序,证实其构建成功,转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,对各蛋白表达条件进行优化、复性及纯化,利用Western blot鉴定重组蛋白。结果各表达蛋白与预期相对分子质量(10.3 ku、9.3 ku)相符,纯化后蛋白纯度高达95%以上,并经免疫印迹鉴定证实表达的蛋白为IL-7δ4/5和IL-7δ3/4。结论成功获得高纯度的IL-7剪接变异体复性蛋白。

外周血中AR-V7 mRNA与前列腺癌患者预后关系的Meta分析

目的 系统评价外周血雄激素受体剪接变异体7(AR-V7)检测在预测去势抵抗性前列腺癌患者预后中的作用。方法 计算机检索PubMed、EMBASE、Cochrane library、中国期刊全文数据库(CNKI),检索时间均从建库至2018年5月,纳入探究外周血AR-V7检测与激素抵抗性前列腺癌预后关系的临床研究。根据纽卡斯尔-渥太华(NOS)量表对纳入文献进行质量评价,采用RevMan5.3软件进行Meta分析,研究结局为无进展生存期(PFS)和总生存期(OS)。结果 最终纳入英文文献6篇,共计483例患者。固定效应模型显示:AR-V7阳性患者较AR-V7阴性患者预后差。临床或影像PFS:[ HR =3.28,95% CI (2.38,4.51), P < 0.000 1 ],OS:[ HR =2.68,95% CI (1.89,3.80), P < 0.000 1 ]。根据治疗药物不同对OS进行亚组分析,结果显示:紫杉醇类化疗药物[ HR =1.35,95% CI (0.56,3.25), P =0.50],激素类药物:[ HR =3.05,95% CI ( 2.09 , 4.47 ), P < 0.000 1 ],提示对于ARV7阳性患者,紫杉醇类化疗药物较激素类药物可降低风险比。结论 外周血AR-V7阳性前列腺癌患者与AR-V7阴性者相比预后较差,血中检测AR-V7可作为前列腺癌患者预后预测指标,并可对前列腺癌的治疗方案选择提供指导意义。

前列腺癌组织中雄激素受体剪接变异体7的表达及临床意义

目的探讨雄激素受体剪接变异体7(AR-V7)在前列腺癌组织中的表达及临床意义。方法收集2017年3月至2019年3月大连医科大学附属大连市中心医院泌尿外科48例患者的组织标本。其中良性前列腺增生18例(良性增生组)、局限性前列腺癌18例(局限癌组)、前列腺癌骨转移12例(骨转移癌组)。免疫组化染色检测各组AR-V7阳性表达;qRT-PCR检测各组AR-V7 mRNA的表达。结果免疫组化结果显示3组比较AR-V7阳性表达存在统计学差异(P<0.05)。qRT-PCR检测结果显示,与良性增生组比较,局限癌组AR-V7 mRNA表达增高(P<0.05);与良性增生组和局限癌组比较,骨转移癌组AR-V7 mRNA表达增高(P<0.05)。结论前列腺癌组织中AR-V7表达增高,且与前列腺癌的临床进展相关,提示AR-V7可能参与前列腺癌的临床进展和骨转移的发生。

雄激素受体变异体7在去势抵抗性前列腺癌中的功能和调节机制

雄激素受体(AR)在去势抵抗性前列腺癌(CRPC)的发生过程中具有关键的调控作用,其中以雄激素受体变异体7(AR-V7)为代表的组成型活性变异体水平在CRPC进展过程中不断升高,可以作为判断CRPC患者疾病进展和预后的分子标志物,是克服去势抵抗、提高患者生存质量和生存期的重要靶标。研究结果表明,AR-V7的生成与AR基因结构重排、基因扩增和AR基因转录本选择性剪接有关,且受转化生长因子-β(TGF-β)等多个信号通路分子的协同调节;AR-V7改变了AR蛋白的转运与核定位机制,并进一步影响下游靶基因的转录表达。AR-V7抗AR活性而阻断AR和雄激素驱动的分化过程,阻遏抑癌基因的表达,刺激肿瘤细胞增殖,从而促进前列腺癌进展。相关靶向研究目前主要集中在AR-V7蛋白降解、mRNA表达抑制和N端结构域靶向干预等3个方面。随着研究的深入开展,AR-V7在前列腺癌进展中的分子机制将逐步阐明,将对CRPC的预防和治疗起到更大的推动作用。

前列腺癌组织中雄激素受体剪接变异体7表达对转移性前列腺癌患者激素敏感时间的预测作用

目的 探讨前列腺癌组织中雄激素受体剪接变异体7（AR-V7）的表达对转移性前列腺癌患者激素敏感时间的预测作用.方法 回顾性收集2002年1月至2010年6月经前列腺穿刺活检确诊的113例晚期转移性前列腺癌患者的临床病理资料.确诊时年龄43 ～ 84岁,中位年龄70岁.确诊时血清PSA值3.0～6 006.2 μg/L,中位值120.0 μg/L.临床分期M1a期5例（4.4％）,M1b期94例（83.2％）,M1.期14例（12.4％）.患者均接受内分泌治疗.利用免疫组化技术和鼠抗人AR-V7特异性抗体检测前列腺癌组织中AR-V7的表达.利用Cox比例风险模型分析患者确诊年龄、确诊PSA值、确诊Gleason评分、临床分期、内分泌治疗过程中PSA最低值、到达PSA最低值时间以及PSA半衰期对激素敏感时间的预测作用.采用Kaplan-Meier法分析AR-V7的表达对激素敏感时间的影响,并用Log-rank法对结果进行显著性检验.结果 本组患者内分泌治疗过程中PSA最低值为0.0～143.0tμg/L,中位值0.7μg/L.到达PSA最低值的时间为0.9～71.0个月,中位时间8.1个月.PSA半衰期为0.1～41.0个月,中位值1.0个月.经过中位27（2～132）个月的随访后,100例患者进展至去势抵抗性前列腺癌,中位激素敏感时间为24（2～ 132）个月.113例前列腺癌组织中,23例（20.4％）阳性表达AR-V7.Cox多因素分析结果显示,前列腺癌组织中AR-V7的表达（P=0.004,HR=2.223）和内分泌治疗过程中PSA最低值（P=0.035,HR=1.011）是晚期转移性前列腺癌患者激素敏感时间的独立预测因素.前列腺癌组织中表达AR-V7和不表达AR-V7组患者的中位激素敏感时间分别为（16.0±3.4）和（30.0±6.0）个月,差异有统计学意义（P=0.001）.结论 前列腺癌组织中AR-V7的表达和内分泌治疗过程中PSA最低值为晚期转移性前列腺癌患者激素敏感时间的独立预测因素.AR-V7可能为晚期前列腺癌的治疗新靶点.

组蛋白去乙酰化酶抑制剂CUDC-101对去势抵抗性前列腺癌雄激素受体剪切变异体7表达的影响

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂CUDC－101对去势抵抗性前列腺癌（castration－resistant prostate cancer，CRPC）雄激素受体剪切变异体7 （androgen receptor splice variant 7，AR－V7）表达的影响。方法2015年4月至2016年4月采用免疫印迹法检测前列腺癌细胞株PC－3、VCaP、22Rv1、LNCap中AR－V7蛋白表达情况，并选取表达量最高的细胞株进行后续实验。通过细胞增殖与活性实验对组蛋白去乙酰化酶抑制剂CUDC－101、组蛋白甲基化抑制剂DZNeP、DNA甲基化抑制剂吉西他滨、组蛋白乙酰化转移酶抑制剂MG149进行筛选，选出能够降低CRPC细胞中AR－V7蛋白表达的抑制剂。分别将30、300 nmol的CUDC－101与1、10、20μmol的MDV3100联合使用处理可表达AR－V7的细胞株，检测其对细胞生长的抑制作用。结果免疫印迹实验结果显示AR－V7蛋白仅在CRPC细胞株22Rv1中阳性表达。采用不同的表观遗传抑制剂处理22Rv1细胞，仅CUDC－101处理后AR－V7的表达量明显降低并趋于阴性，其他抑制剂对AR－V7的表达无影响。在细胞增殖与活性实验中，30 nmol CUDC－101与1、10、20μmol的MDV3100联合使用对22Rv1细胞株的抑制率分别为10%、35%和45%，高于单独使用MDV3100的5%、28%和42%，差异有统计学意义（P〈0.05）。300 nmol CUDC－101与1、10、20μmol MDV3100联合使用对22Rv1的抑制率分别为30%、60%和65%，明显高于单独使用MDV3100，差异有统计学意义（P〈0.05）。结论CUDC－101可以抑制CRPC中AR－V7的表达。

AR-V7表达与去势抵抗性前列腺癌阿比特龙治疗敏感性的相关性研究

目的:探讨去势抵抗性前列腺癌(CRPC)患者中雄激素受体剪切变异体7(AR-V7)的表达与阿比特龙治疗敏感性的相关性。方法:采用前瞻性队列研究对2016年1月至2019年1月北京大学肿瘤医院收治的年龄≥18岁,存在1≥处全身转移,拟使用阿比特龙治疗的新发CRPC患者行外周血循环肿瘤细胞(CTCs)AR-V7检测,根据检测结果将患者分为AR-V7阳性组和AR-V7阴性组,对两组患者PSA下降时间、PSA无进展生存(PFS)、临床状态PFS、影像学PFS以及总生存进行统计分析。结果:共入组77例患者,其中AR-V7阴性组49例,AR-V7阳性组28例。AR-V7阴性组PSA下降时间[(72.04±66.92)d与(190.11±102.44)d,P=0.000]、PSA无应答率[6.12%(3/49)与21.4%(6/28),P=0.040]明显小于AR-V7阳性组,而PSA PFS[(489.17±269.39)d与(130.56±120)d,P=0.010]、临床状态PFS[(551.91±322.05)d与(261.44±200.85)d,P=0.018]、影像学PFS[(523.7±223.28)d与(247.56±202.80)d,P=0.003]明显长于AR-V7阳性组。AR-V7阳性组和AR-V7阴性组的肿瘤特异性生存时间分别为(1246.89±375.65)d和(1001.42±248.94)d(P=0.159),总生存率分别为89.8%(44/49)和89.3%(25/28)(P=0.176),差异均无统计学意义。结论:CRPC患者中,AR-V7表达与阿比特龙治疗敏感性及患者预后密切相关,阳性表达患者阿比特龙治疗效果及预后较差。

雄激素受体剪接变异体7与雄激素受体比值预测前列腺癌预后的意义分析

目的:探讨雄激素受体剪接变异体7(AR-V7)与雄激素受体(AR)比值(AR-V7/AR)对前列腺癌预后的预测价值。方法:选择2013年3月至2018年3月广东省高州市人民医院收治的105例接受内分泌初治的前列腺癌患者,以免疫组织化学法检测活检穿刺标本的AR、AR-V7表达情况,分析AR、AR-V7、AR-V7/AR与患者预后的关系,并对影响前列腺癌预后相关因素采用Cox模型进行分析。结果:AR阳性率为59.0%(62/105),AR-V7阳性率为19.0%(20/105)。随访15~61(44.8 ± 10.1)个月,AR-V7阳性者的无进展生存时间(PFS)以及总生存时间(OS)均较阴性者明显缩短[(10.8 ± 2.2)个月比(25.0 ± 3.4)个月、(20.3 ± 5.1)个月比(42.8 ± 7.4)个月],差异有统计学意义( P<0.01),而高AR-V7/AR者的PFS以及OS较低AR-V7/AR者亦明显缩短[(12.5 ± 3.2)个月比(24.9 ± 5.5)个月、(22.5 ± 4.6)个月比(42.1 ± 8.3)个月],差异有统计学意义( P<0.01)。Cox多因素分析提示T 4期( HR = 2.618,95% CI 1.362 ~ 4.986, P<0.01)、高AR-V7/AR( HR = 5.799,95% CI 2.541 ~ 13.253, P<0.01)可作为影响前列腺癌不良预后的独立危险因素。 结论:接受内分泌初治的前列腺癌患者如AR-V7阳性、高AR-V7/AR时则PFS、OS可缩短,高AR-V7/AR可成为评估该类患者预后不良的相关危险因素。

AR-V7对前列腺癌激素抵抗敏感时间的预测作用

目的:分析雄激素受体剪接变异体7(AR-V7)对前列腺癌激素抵抗敏感时间的预测作用。方法:将本院100例经活检穿刺证实为前列腺癌的患者纳入研究,所有患者均接受内分泌治疗,利用免疫组化方法检测前列腺癌组织AR-V7的表达情况,利用Cox模型分析患者各临床因素对前列腺癌激素抵抗敏感时间的影响,采用Kaplan-Meier法分析AR-V7对前列腺癌激素抵抗敏感时间的作用,同时利用Log-rank法对结果进行显著性检验。结果:(1)100例患者内分泌治疗过程中前列腺特异性抗原(PSA)最低值平均(1.1±0.08)μg·L-1;到达PSA最低值的时间平均(8.2±0.03)个月;PSA半衰期平均(1.2±0.4)个月。至随访结束有88例进展为去势抵抗性前列腺癌(CRPC),其激素敏感时间平均(28.5±1.8)个月。(2)AR-V7表达主要位于细胞核,仅有少数表达于细胞质中,100例前列腺癌患者中有25例患者AR-V7表达呈现阳性,75例患者表现为阴性。(3)Cox多因素分析显示PSA最低值、PSA半衰期及癌组织中AR-V7的表达量是影响激素敏感时间的因素,多因素分析结果显示PSA最低值(r=1.98,P=0.02)及AR-V7的表达量(r=2.93,P=0.003)是晚期前列腺癌患者激素敏感时间的独立预测因子。(4)AR-V7阳性患者的中位生存时间为(32±1.2)个月,ARV7阴性患者中位生存时间为(46±1.9)个月,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:AR-V7是影响前列腺癌激素抵抗敏感时间的预测因子,其可能作为前列腺癌治疗新靶向。

雄激素受体剪接突变体7和雄激素受体表达量的比值在预测前列腺癌内分泌治疗预后中的作用

目的分析雄激素受体（androgen receptor, AR）和雄激素受体剪接突变体7（androgen receptor splice variant-7, AR-V7）表达量的比值（AR-V7/AR）预测前列腺癌内分泌治疗预后的作用。方法采用免疫组化染色法检测2010年1月至2015年12月我院行内分泌治疗的136例前列腺癌患者的活检穿刺标本，以HS评分评估其表达量。患者年龄53～96岁，中位年龄71岁。确诊时中位tPSA为110.00 ng/ml（2.61～4 003.40 ng/ml），中位fPSA为14.62 ng/ml（0.12～640.19 ng/ml），中位PSA密度为1.15 ng/（ml·cm^3）[0.02～62.63 ng/（ml·cm^3）]。Gleason评分≥8分88例（64.7%），7分39例（28.7%），〈7分9例（6.6%）；T3期57例（41.9%），T4期54例（39.7%），Tx期25例（18.4%）；N0期46例（33.8%），N1期62例（45.6%），Nx期28例（20.6%）；M0期30例（22.1%），M1期97例（71.3%），Mx期9例（6.6%）。利用Cox模型分析患者各临床因素对前列腺癌内分泌治疗预后的影响，采用Kaplan-Meier法分析AR-V7/AR对前列腺癌内分泌治疗预后的预测作用。结果本组136例中79例（58.1%）AR表达阳性，其中26例（19.1%）AR-V7表达阳性。Spearman相关性分析结果显示，AR与AR-V7的表达无相关性（r＝0.042, P＝0.629）。本组136例中位随访时间为44个月（15～71个月）。中位疾病无进展生存时间（PFS）为19个月（5～59个月）；中位总生存时间（OS）为31个月（12～61个月）。AR-V7阳性患者较阴性患者有较短的中位PFS（10.8个月与25.0个月，P〈0.001）和中位OS（20.3个月与42.8个月，P〈0.001）；高AR-V7/AR值患者较低AR-V7/AR值患者有较短的中位PFS（12.0个月与24.8个月，P〈0.001）和中位OS（22.5个月与42.8个月，P〈0.001）。在Cox单因素回归分析中，确诊时Gleason评分、前列腺癌T分期、tPSA、PSA密度、AR-V7/AR值可预测内分泌治疗的预后。在Cox多因素回归分析中，T4期（HR＝2.597，95% CI 1.351～4.995，P＝0.004）和高AR-V7/AR值（HR＝5.788，95% CI 2.530～13.242，P〈0.001）是前列腺癌内分泌治疗预后不良的独立危险因素。结论高AR-V7/AR值是预测前列腺癌内分泌治疗预后不良的独立危险因素。AR-V7阳性、高AR-V7/AR值患者的中位PFS和OS均明显缩短。

从AR/AR-V7信号通路探讨固本清源方联合雄激素剥夺治疗控制去势抵抗性前列腺癌的作用机制

目的:探讨固本清源方联合雄激素剥夺治疗(ADT)控制去势抵抗性前列腺癌作用及其机制。方法:建立去势抵抗性前列腺癌荷瘤小鼠模型,当瘤体体积达到100 mm3时,将50只BALB/c裸鼠随机分为模型组,ADT组,ADT+固本清源方低、中、高剂量组5组,每组10只小鼠,分组后保证各组动物之间,肿瘤体积差异无统计学意义。模型组给予等量生理盐水(10 mL·kg^(-1))灌胃,每日灌胃2次;其余组均给予比卡鲁胺(5 mg·kg^(-1))灌胃,每日1次,第10天腹腔注射醋酸戈舍瑞林(0.36 mg·kg^(-1));固本清源方组在ADT的基础上同时给予固本清源方低、中、高剂量(2.5,25,50 g·kg^(-1))灌胃,每日灌胃2次。连续给药25 d后剥离瘤体组织,记录荷瘤小鼠肿瘤的生长情况、计算肿瘤抑制率;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测肿瘤组织中雄激素受体(AR),雄激素受体剪接变异体-7(AR-V7),前列腺癌特异性抗原(PSA)的mRNA及蛋白表达。结果:ADT+固本清源方低、中、高剂量组的抑瘤率分别为27.95%,46.71%,44.46%,与ADT组比较,中、高剂量组抑瘤率明显升高(P<0.05)。进一步研究显示,与ADT组比较ADT+固本清源方中、高剂量组能明显下调AR,AR-V7,PSA的mRNA及蛋白表达水平(P<0.05)。结论:固本清源方联合ADT能控制去势抵抗性前列腺癌荷瘤小鼠的肿瘤生长,与AR/AR-V7信号通路的调控有关。