NK-22细胞及IL-22相关功能分子在类风湿关节炎滑膜细胞增殖中的作用

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者滑液(SF)自然杀伤(NK)细胞NK-22促成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖作用及相关信号通路。方法采用流式细胞术分选6例RA患者SF中NK-22细胞(2×104),体外悬浮培养2周,佛波酯(20 ng/ml)和离子霉素(0.5μmol/L)刺激后ELISA检测NK-22细胞培养上清IL-22浓度。组织块培养法原代培养RAFLS,NK-22细胞培养上清分别作用于RAFLS24、48、72 h,MTT法检测FLS增殖;同时加入IL-22抗体检测FLS增殖情况。RT-PCR检测rhIL-22及AG490作用后RAFLS Stat3 mRNA的表达,Western blot检测RAFLS p-Stat3蛋白含量。结果①流式分选2×104NK-22细胞,细胞纯度>90%;②PMA和ionomycin刺激后NK-22细胞培养上清中IL-22浓度为1273.42±254.48 pg/ml;③PMA和ionomycin刺激后NK-22细胞培养上清作用于RAFLS 24 h、48 h、72 h,可明显刺激RAFLS增殖(P<0.05)。IL-22抗体能明显抑制NKp44+NK细胞上清诱导的RA FLS增殖(P<0.01);④rhIL-22(1 ng/ml)能诱导RAFLS p-Stat3表达(P<0.05);⑤AG490能抑制rhIL-22诱导的RAFLS p-Stat3表达(P<0.05)。结论 RA患者SFNK-22细胞体外可分泌高浓度的IL-22,通过激活STAT3信号通路进而刺激RAFLS增殖。

NKp44^+NK细胞通过分泌IL-22介导Stat3信号途径依赖的RA FLS增殖效应

目的探讨类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者NKp44+自然杀伤(natural killer,NK)细胞促成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)增殖的作用机制。方法流式细胞术分选5例RA患者滑液NKp44+NK细胞(5×104/ml),ELISA检测NKp44+NK细胞培养上清IL-22含量。RA FLS加入NKp44+NK细胞培养上清,作用24、48、72 h后MTT法检测FLS增殖。观察不同质量浓度rh IL-22(1 500、3 000 ng/L)促RA FLS增殖作用,检测IL-22抗体及AG490对RA FLS增殖作用影响。RT-PCR检测rh IL-22及AG490作用后RA FLS Stat3 m RNA的表达,Western blot检测RA FLS Stat3、p-Stat3蛋白含量。结果 5例RA滑液NKp44+NK细胞体外分选纯度>90%,培养上清IL-22质量浓度为(1 603.210±332.079)ng/L。NKp44+NK细胞上清可刺激RA FLS增殖(P<0.01)。1 500、3 000 ng/L rh IL-22均能刺激RA FLS增殖。IL-22抗体及AG490能明显抑制NKp44+NK细胞上清诱导的RA FLS增殖(P<0.01)。AG490能抑制rh IL-22诱导的RA FLS Stat3、p-Stat3表达(P<0.05)。结论 RA患者NKp44+NK细胞可分泌IL-22,介导Stat3信号通路刺激RA FLS增殖。

白细胞介素22抗体抑制Snail1高表达对糖尿病肾病的影响

目的:探讨白细胞介素22(IL-22)在糖尿病肾病(DN)发生发展中的作用及机制。方法:将C57 BL/6小鼠随机分成正常对照(NC)组、DN组、重组IL-22(r IL-22)干预组(DN+r IL-22组)和IL-22中和抗体(anti-IL-22)干预组(DN+anti-IL-22组)。糖尿病造模成功8周后,DN+rIL-22组和DN+anti-IL-22组分别给予rIL-22(200μg/kg)和anti-IL-22(200μg/kg)腹腔注射,NC组和DN组分别给予等量的0.1%牛血清白蛋白腹腔注射,每周2次,连续4周。干预结束后,检测各组小鼠血糖、肾功能、24 h尿微量白蛋白(m-Alb)和24 h尿肌酐(UCr)水平,光镜下观察肾脏组织的病理结构改变,qPCR法检测肾脏组织Snail1的mRNA表达,Western blot法检测肾脏组织纤连蛋白(FN)和E-钙黏素(E-cadherin)的表达水平。结果:干预结束后,与NC组小鼠比较,各模型组24 hm-Alb/UCr比值均显著升高(P<0.05);相较于DN组,DN+rIL-22组24 hm-Alb和24 hUCr均显著升高(P<0.05);而DN+anti-IL-22组24 hm-Alb、24 h UCr和24 hm-Alb/UCr比值较DN组和DN+rIL-22组均得到改善(P<0.05)。光镜下可见糖尿病小鼠肾小管上皮细胞空泡变性、蛋白管型形成和肾小球系膜扩张,DN+rIL-22组上述病变更广泛,而DN+anti-IL-22组病变程度得以改善。qPCR发现糖尿病小鼠Snail1的mRNA表达显著升高(P<0.05),anti-IL-22阻断4周后Snail1的mRNA显著下降(P<0.05)。Western blot发现DN+rIL-22组细胞外基质蛋白FN较NC组和DN组显著升高(P<0.05),且肾小管上皮-间充质转化标志物E-cadherin显著下降(P<0.05)。结论:IL-22中和抗体可能通过抑制肾小管上皮细胞Snail1信号分子高表达,减轻DN小鼠微量白蛋白尿,延缓DN进程。

白细胞介素22介导转化生长因子-β1高表达与糖尿病肾纤维化相关性分析

目的 探讨白细胞介素22（IL-22）对糖尿病肾纤维化的作用及机制。方法 将C57 BL/6小鼠分为正常对照组（NC组）、糖尿病肾病对照组（DN组）、重组IL-22（rIL-22）组和IL-22中和抗体（Anti-IL-22）组，糖尿病造模成功8周后，按分组给予200 ng/g rIL-22、Anti-IL-22或等量0.1%牛血清白蛋白（BSA）腹腔注射，每周2次，连续4周。干预结束后，测定血糖、肾功能和24 h尿微量白蛋白/肌酐比值，光镜下观察小鼠肾脏病理学改变和胶原沉积情况，同时对肾组织硬化及纤维化指标进行半定量评定，实时荧光定量PCR分析肾脏组织转化生长因子-β1（TGF-β1）基因转录水平，Western印迹法检测肾脏组织α-平滑肌动蛋白（α-SMA）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）和纤连蛋白（FN）表达水平，免疫组化分析肾脏组织胶原纤维Ⅲ（collagen Ⅲ）表达水平。结果 干预4周后，Anti-IL-22组24 h尿微量白蛋白/肌酐比值显著降低（P〈0.05）。光镜下可见糖尿病小鼠肾小管上皮细胞空泡变性、蛋白管型形成和肾小球系膜扩张，rIL-22组上述病变更广泛，而Anti-IL-22组病变程度得以改善，胶原沉积情况与肾小管损伤分数一致。实时荧光定量PCR发现rIL-22组TGF-β1 mRNA显著升高（P〈0.01）。免疫印迹发现rIL-22组肾小管上皮-间充质转分化（EMT）标志物α-SMA显著升高（P〈0.05）和E-cadherin显著下降（P〈0.05），且细胞外基质（ECM）蛋白FN显著升高（P〈0.05）。免疫组化发现rIL-22组collagen Ⅲ显著升高（P〈0.05）。结论 IL-22可能通过介导肾小管上皮细胞TGF-β1的高表达，诱导EMT发生和促进ECM积聚，加速糖尿病肾纤维化。

Th22细胞及其分泌的细胞因子白细胞介素-22在乳腺癌中的作用

目的探讨在乳腺癌的发生发展过程中Th22细胞及其分泌的细胞因子白细胞介素(IL)-22的作用。方法原位接种小鼠乳腺癌4T1细胞建立乳腺癌模型,实验组20例在小鼠乳腺脂肪垫注射磷酸缓冲液(PBS)0.1ml,含4×105个4T1细胞;对照组20例在小鼠乳腺脂肪垫注射PBS0.1ml,不含细胞。应用流式细胞术检测其外周血中Th22细胞,酶联免疫吸附实验检测患者血清中IL-22的水平,比较两组Th22细胞和血清中IL-22水平差异,分析Th22细胞和IL-22相关性。实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测IL-22的mRNA表达水平。蛋白免疫印迹检测IL-22处理后的4T1细胞STAT3磷酸化水平。结果原位接种1周后有肿瘤长出,与对照组相比血清中的Th22细胞和IL-22表达明显升高并呈正相关(r=0.569,P<0.01或<0.05);肿瘤组与正常组相比,IL-22mRNA水平明显上升[(22.28±2.52)ng/L比(18.92±1.80)ng/L](P<0.01);IL-22处理后4T1细胞使得STAT3发生磷酸化。结论Th22细胞及其分泌的细胞因IL-22通过影响STAT3的磷酸化来促进乳腺癌的发生发展。

Th22细胞及其分泌因子IL-22的研究进展

Th22细胞是一类独立于Th1、Th2和Th17细胞，不分泌IFN-γ、IL-4、IL-17，而主要分泌IL-22、IL-26、IL-13等细胞因子的CD4^＋T细胞亚群，Th22细胞在机体感染病毒或细菌等病原体后，可以激活其他免疫细胞，并且帮助机体控制炎症对抗感染，因而在自身免疫性疾病和炎症性疾病中发挥重要的作用，IL-22作为其中的重要信号分子可能在识别和攻击入侵的病毒和病原体或针对发炎反应做好自我保护方面起着特殊的作用。Th22细胞的发现将为全面深入了解T细胞的功能，寻找更为合理有效治疗慢性炎症性疾病和自身免疫性疾病的策略提供理论依据。