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Simplified methods to isolate,culture and purify olfactory ensheathing cells 被引量:1
1
作者 Zhengfeng Lu Yixin Shen +3 位作者 Peng Zhang Zhihai Fan Qirong Dong Min Wang 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2010年第19期1495-1499,共5页
Conventional methods for harvesting, culturing and purifying olfactory ensheathing cells are complicated, time-consuming, and poorly reproducible. Olfactory bulbs were detached from adult Sprague Dawley rats and olfac... Conventional methods for harvesting, culturing and purifying olfactory ensheathing cells are complicated, time-consuming, and poorly reproducible. Olfactory bulbs were detached from adult Sprague Dawley rats and olfactory ensheathing cells were isolated using shearing, dispersion processes. After the primary cultures reached confluence, the cells were purified using a three-step process. The olfactory ensheathing cells attached and grew rapidly. The purity of the olfactory ensheathing cells increased following the three purification steps, eventually exceeding 95%. These cells could be maintained for an extended period time in culture. This simple, inexpensive, reproducible method of harvesting, culturing and purifying olfactory ensheathing cells shortens the culture cycle and provides sufficient olfactory ensheathing cells of controllable purity. 展开更多
关键词 olfactory ensheathing cells SHEARING isolation primary culture PURIFICATION in vitro olfactory bulb rats
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花鲈肠上皮细胞原代培养及鉴定方法的探讨研究 被引量:1
2
作者 李莎 刘紫严 +4 位作者 杨红玲 蔡国鹤 聂庆杰 张春晓 孙云章 《水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期381-389,共9页
为探究建立稳定可靠的花鲈肠上皮细胞原代培养方法,通过组织块法和酶消化法培养花鲈肠上皮细胞,确定酶消化法的最佳消化液及消化时间,所得细胞悬液于L-15培养液中进行培养。利用形态学观察、透射电镜观察和碱性磷酸酶染色方法对细胞进... 为探究建立稳定可靠的花鲈肠上皮细胞原代培养方法,通过组织块法和酶消化法培养花鲈肠上皮细胞,确定酶消化法的最佳消化液及消化时间,所得细胞悬液于L-15培养液中进行培养。利用形态学观察、透射电镜观察和碱性磷酸酶染色方法对细胞进行鉴定。结果显示:组织块法细胞迁出情况不稳定,且迁出时间较长;酶消化法的最佳消化液为胶原酶Ⅰ、Ⅳ联合消化液,最佳消化时间为45 min;胶原酶Ⅰ、Ⅳ联合消化法获得的细胞连接紧密、排列整齐、呈上皮细胞典型的“铺路石”状,细胞相对独立、界限清晰。透射电镜观察和碱性磷酸酶染色进一步证实所培养的细胞为肠上皮细胞。总之,经胶原酶Ⅰ、Ⅳ联合消化液消化45 min、培养48 h可得到初始条件一致、生长旺盛的花鲈原代肠上皮细胞。 展开更多
关键词 花鲈 肠上皮细胞 原代培养 组织块法 酶消化法
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鸡肠上皮细胞体外模型的构建及应用 被引量:1
3
作者 岑明珠 刘宇航 +3 位作者 欧建存 丘婷 郑朝军 张辉华 《中国畜牧杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期52-57,共6页
鸡肠上皮细胞作为体内更新最快的细胞,具有消化、吸收、分泌等重要的生理功能。细胞体外模型的建立为肠道疾病、营养物质的吸收消化机制及上皮细胞的凋亡、增殖、分化等研究提供了一套快速可靠的方法,为研究生理、营养、疾病控制及其他... 鸡肠上皮细胞作为体内更新最快的细胞,具有消化、吸收、分泌等重要的生理功能。细胞体外模型的建立为肠道疾病、营养物质的吸收消化机制及上皮细胞的凋亡、增殖、分化等研究提供了一套快速可靠的方法,为研究生理、营养、疾病控制及其他未知因素提供理想模型。本文对营养性添加、非营养性添加和病原微生物在肠上皮细胞中的研究作用机制进行综述,以期为禽业、兽药改良和研发提供参考。 展开更多
关键词 肠上皮细胞 分离培养 体外细胞模型
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In vitro assessment of gastrointestinal viability of two photosynthetic bacteria,Rhodopseudomonas palustris and Rhodobacter sphaeroides 被引量:4
4
作者 ZHOU Xu-xia PAN Yuan-jiang +1 位作者 WANG Yan-bo LI Wei-fen 《Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology)》 SCIE CAS CSCD 2007年第9期686-692,共7页
The objectives of this study were to assess the potential of two photosynthetic bacteria (PSB), Rhodopseudomonas palustris HZ0301 and Rhodobacter sphaeroides HZ0302, as probiotics in aquaculture. The viability of HZ... The objectives of this study were to assess the potential of two photosynthetic bacteria (PSB), Rhodopseudomonas palustris HZ0301 and Rhodobacter sphaeroides HZ0302, as probiotics in aquaculture. The viability of HZ0301 and HZ0302 in simulated gastric transit conditions (pH 2.0, pH 3.0 and pH 4.0 gastric juices) and in simulated small intestinal transit conditions (pH 8.0, with or without 0.3% bile salts) was tested. The effects of HZ0301 and HZ0302 on the viability and permeability of intestinal epithelial cell in primary culture of tilapias, Oreochrornis nilotica, were also detected. All the treatments were deter- mined with three replicates. The simulated gastric transit tolerance of HZ0301 and HZ0302 strains was pH-dependent and correspondingly showed lower viability at pH 2.0 after 180 min compared with pH 3.0 and pH 4.0. Both HZ0301 and HZ0302 were tolerant to simulated small intestine transit with or without bile salts in our research. Moreover, there was no significant difference (P〉0.05) among three treatments including the control and the groups treated with HZ0301 or HZ0302 both in intestinal epithelial cell viability and membrane permeability, showing no cell damage. In summary, this study demonstrated that HZ0301 and HZ0302 had high capacity of upper gastrointestinal transit tolerance and were relatively safe for intestinal epithelial cells of tilapias. 展开更多
关键词 Photosynthetic bacteria PROBIOTICS primary culture intestinal epithelial cell Oreochromis nilotica
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鸡肠上皮细胞的分离及原代培养方法 被引量:29
5
作者 马玉龙 许梓荣 +2 位作者 郭彤 尤萍 姜俊芳 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期74-76,80,共4页
取18日龄鸡胚,研究鸡肠上皮细胞(IEC)分离及原代培养的方法。结果表明:较好的分离条件是肠组织经0.1g/L中性蛋白酶和300U/mL胶原酶Ⅺ联合消化;较佳的培养条件是细胞在含2.5%~5%胎牛血清的DMEM培养基中,39℃、5%~7.5%CO... 取18日龄鸡胚,研究鸡肠上皮细胞(IEC)分离及原代培养的方法。结果表明:较好的分离条件是肠组织经0.1g/L中性蛋白酶和300U/mL胶原酶Ⅺ联合消化;较佳的培养条件是细胞在含2.5%~5%胎牛血清的DMEM培养基中,39℃、5%~7.5%CO2下培养,IEC可在1~2d贴壁,6~7d明显增殖,11~12d汇合成片。 展开更多
关键词 肠上皮细胞 分离 原代培养 鸡胚
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胎鼠肺细胞的分离纯化及原代培养 被引量:43
6
作者 祝华平 常立文 +2 位作者 李文斌 刘汉楚 张谦慎 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期597-600,共4页
目的 建立一套可靠的胎鼠肺细胞分离、纯化和培养技术 ,用于体外研究肺发育和早产儿肺部疾病。方法采用胰酶和胶原酶消化 19d胎鼠肺组织块 ,经差速离心和反复贴壁法 ,分离、纯化胎鼠肺泡Ⅱ型细胞 (AECⅡ )和肺成纤维细胞 (LF) ,并进行... 目的 建立一套可靠的胎鼠肺细胞分离、纯化和培养技术 ,用于体外研究肺发育和早产儿肺部疾病。方法采用胰酶和胶原酶消化 19d胎鼠肺组织块 ,经差速离心和反复贴壁法 ,分离、纯化胎鼠肺泡Ⅱ型细胞 (AECⅡ )和肺成纤维细胞 (LF) ,并进行原代培养。用细胞角蛋白 (cytokeratin)和波形蛋白 (vimentin)免疫细胞化学染色和透射电镜对所分离的细胞进行鉴定。结果 该方法所得细胞产量大、纯度高。免疫细胞化学鉴定 ,AECⅡ细胞cytokeratin染色阳性 ,vimentin染色阴性 ,LF则相反。透射电镜观察AECⅡ ,可见细胞内板层小体。结论 该方法是一种可靠的胎鼠肺细胞的分离纯化培养技术 。 展开更多
关键词 胎鼠 肺细胞 分离 纯化 原代培养
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鸡胚小肠上皮细胞的分离及原代培养研究 被引量:12
7
作者 洪智敏 贾永杰 +2 位作者 瞿明仁 黎观红 刘思国 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期1164-1170,共7页
取18日龄的SPF鸡胚,分别采用组织块培养法、胰蛋白酶、胶原酶I和嗜热菌蛋白酶消化法分离和体外培养小肠上皮细胞。结果表明:组织块培养法所获得的上皮细胞纯度较低;胰蛋白酶消化后多为单细胞,细胞贴壁和生长能力较弱;胶原酶Ⅰ单独消化50... 取18日龄的SPF鸡胚,分别采用组织块培养法、胰蛋白酶、胶原酶I和嗜热菌蛋白酶消化法分离和体外培养小肠上皮细胞。结果表明:组织块培养法所获得的上皮细胞纯度较低;胰蛋白酶消化后多为单细胞,细胞贴壁和生长能力较弱;胶原酶Ⅰ单独消化50 min或嗜热菌蛋白酶单独消化110 min以及胶原酶Ⅰ、嗜热菌蛋白酶联合消化后均可得到大量隐窝细胞团块,经低速离心去除单细胞、差速贴壁除去成纤维细胞,可获得较纯的上皮细胞。分离的细胞接种培养12~24 h贴壁,48~72 h细胞团中的细胞向四周蔓延,形成一群群的细胞集落,6~7 d细胞汇合成片,成"铺路石样",细胞多呈扁平多角状,椭圆状,单层生长,边界清晰,互不重叠。经形态学观察、扫描电镜鉴定、碱性磷酸酶染色和免疫组化鉴定为上皮细胞。 展开更多
关键词 鸡小肠上皮细胞 分离 原代培养 鸡胚
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兔小肠上皮细胞体外分离培养 被引量:12
8
作者 刘飞飞 车东升 +4 位作者 穆成龙 张海全 王波 孙泽威 秦贵信 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期429-432,共4页
选用新生未哺乳仔兔,应用胶原酶Ⅳ消化法对小肠上皮进行分离培养,得到兔小肠上皮细胞后,联合应用相差消化法和相差贴壁法对兔小肠上皮细胞进行纯化。通过形态学观察及细胞免疫组织化学方法对所得到的纯化兔小肠上皮细胞进行鉴定。结果表... 选用新生未哺乳仔兔,应用胶原酶Ⅳ消化法对小肠上皮进行分离培养,得到兔小肠上皮细胞后,联合应用相差消化法和相差贴壁法对兔小肠上皮细胞进行纯化。通过形态学观察及细胞免疫组织化学方法对所得到的纯化兔小肠上皮细胞进行鉴定。结果表明:应用胶原酶Ⅳ消化法得到的兔小肠上皮细胞生长状况良好,纯化后得到95%以上纯度的兔小肠上皮细胞,纯化所得的兔小肠上皮细胞经形态学观察及细胞角蛋白8单克隆抗体鉴定为阳性。 展开更多
关键词 小肠上皮细胞 原代培养 鉴定
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胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞分离、原代培养与鉴定 被引量:14
9
作者 陈慧 王振花 +1 位作者 张建平 杨冬梓 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期496-499,505,共5页
【目的】探讨胎鼠肺泡Ⅱ型细胞原代培养及鉴定方法,建立肺泡Ⅱ型细胞培养模型,为体外研究肺泡Ⅱ型细胞及胎儿肺发育提供实验手段。【方法】采用低浓度胰酶消化20d胎鼠肺组织,经差速离心和特异性免疫吸附后,分离、纯化胎鼠肺泡Ⅱ型细胞,... 【目的】探讨胎鼠肺泡Ⅱ型细胞原代培养及鉴定方法,建立肺泡Ⅱ型细胞培养模型,为体外研究肺泡Ⅱ型细胞及胎儿肺发育提供实验手段。【方法】采用低浓度胰酶消化20d胎鼠肺组织,经差速离心和特异性免疫吸附后,分离、纯化胎鼠肺泡Ⅱ型细胞,进行原代培养;根据细胞生长特点、形态特征、细胞表型和肺表面活性特异蛋白A的分泌,用免疫细胞化学染色、透射电镜及酶联免疫吸附法对分离的细胞进行形态学和功能鉴定。【结果】原代培养的肺Ⅱ型细胞12h开始贴壁,外观呈多边形,岛状生长。培养的24~48h,细胞连接成单层,胞浆内颗粒明显,培养的6 ̄7d细胞内颗粒大量减少;免疫细胞化学鉴定细胞肺表面活性特异蛋白A(surfactantproteinA,SP-A)染色阳性,透射电镜可见观察到细胞内板层小体,培养液中SP-A含量随培养时间延长逐渐增多,于培养36h达峰值,为80ng/mL;细胞纯度达(92±2)%,产量为(18.6±7)×106。【结论】差速离心和免疫黏附法是一种高效的分离和纯化胎肺Ⅱ型细胞的方法,所得细胞产量大、纯度高,可以用于体外研究肺泡Ⅱ型细胞和晚期胎肺发育的研究。 展开更多
关键词 胎鼠 肺泡Ⅱ型细胞 原代培养 分离 鉴定
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胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离及原代培养 被引量:9
10
作者 付红敏 许峰 +4 位作者 黄波 杨鸣 符跃强 方芳 匡凤梧 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期586-589,共4页
目的:探讨胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(Alveolar epithelial cell typeⅡ,AECⅡ)的分离、纯化及原代培养方法,为有关胎儿肺发育及新生儿肺部疾病的研究奠定基础。方法:采用胰酶结合胶原酶的消化方法,分离肺组织细胞成份,然后经差速离心和差速... 目的:探讨胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(Alveolar epithelial cell typeⅡ,AECⅡ)的分离、纯化及原代培养方法,为有关胎儿肺发育及新生儿肺部疾病的研究奠定基础。方法:采用胰酶结合胶原酶的消化方法,分离肺组织细胞成份,然后经差速离心和差速贴壁的方法纯化AECⅡ,进行原代培养;通过台盼蓝染色检测细胞活力,倒置相差显微镜观察细胞生长特点及形态特征,透射电镜鉴定,改良巴氏染色检测细胞纯度以及免疫荧光技术检测表面蛋白C(Surfactant proteinc,SPC)的表达。结果:每3~5只胎鼠可获得AECⅡ(36±5)×106,活力98%±2%。镜下观察原代AECⅡ呈岛状生长,外观呈多边形或立方形。透射电镜可见特征性的板层小体,改良巴氏染色见胞质内有较多颗粒,纯度为96%±3%,呈现SPC绿色免疫荧光的细胞占96%以上。结论:利用胰酶和胶原酶消化,以及差速离心和差速贴壁的方法可成功分离出高产量、高纯度的胎鼠AECⅡ,能满足体外进一步实验的需要。 展开更多
关键词 胎鼠 肺泡Ⅱ型上皮细胞 原代培养 分离
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鸡肠上皮细胞体外原代培养研究 被引量:19
11
作者 杨文平 高峰 +3 位作者 许辉堂 施传信 赵国刚 周光宏 《江西农业学报》 CAS 2007年第5期113-115,118,共4页
取1月龄三黄鸡十二指肠的上皮细胞(intestinal epithelial cell,IEC),经分离纯化进行培养。结果表明:胰蛋白酶-EDTA配合使用、短时间消化收获细胞法可获得大量的健全肠绒毛隐窝单位,进一步培养获得的IEC完全可供相关实验研究之用。
关键词 小肠 上皮细胞 体外原代培养
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大鼠小肠上皮细胞培养体系的建立及其影响因素的探讨 被引量:12
12
作者 冉新泽 粟永萍 +2 位作者 程天民 林远 刘晓宏 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 1997年第5期8-11,共4页
作者引进并建立了大鼠小肠上皮细胞(IEC-6)的培养传代和活性检测的实验方法,且对几种影响因素进行了探讨,实验发现,IEC-6在一定密度范围内与^3H-TdR参入量呈正相关变化;培养72h以内,参入量随时间延长而增加... 作者引进并建立了大鼠小肠上皮细胞(IEC-6)的培养传代和活性检测的实验方法,且对几种影响因素进行了探讨,实验发现,IEC-6在一定密度范围内与^3H-TdR参入量呈正相关变化;培养72h以内,参入量随时间延长而增加,^3H-TdR,55.5Kbq/孔内,计数值与剂量间呈线性关系,胎牛血清浓度以10%为宜,但不加胰岛素组显著降低,pH值以7.26最好,IEC-6在4~26Gy照射范围内。 展开更多
关键词 上皮细胞 培养方法 大鼠 小肠
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仔猪小肠黏膜上皮细胞体外分离培养及鉴定 被引量:11
13
作者 周传丽 刘铮铸 +1 位作者 俞英 张勤 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第21期4516-4524,共9页
【目的】阐明产肠毒素大肠杆菌F18(ETEC F18)引发仔猪腹泻的机理,针对其候选基因FUT1的CDS区第307位点处的突变(G→A),建立3个仔猪小肠黏膜上皮细胞系(GG、GA和AA)。【方法】首先以胎鼠和仔猪为试验材料,确定小肠上皮细胞的最佳分离方... 【目的】阐明产肠毒素大肠杆菌F18(ETEC F18)引发仔猪腹泻的机理,针对其候选基因FUT1的CDS区第307位点处的突变(G→A),建立3个仔猪小肠黏膜上皮细胞系(GG、GA和AA)。【方法】首先以胎鼠和仔猪为试验材料,确定小肠上皮细胞的最佳分离方法。采用XI型胶原酶和I型中性蛋白酶的联酶混合液,将胎鼠小肠组织机械剪碎后用联酶进行消化和直接将联酶灌注到仔猪小肠腔内消化的两种方法进行比较。针对仔猪小肠黏膜上皮细胞体外培养过程中成纤维细胞污染难以消除的问题,本研究采用局部画圈法逐步去除成纤维细胞。最后,用电镜和CK18免疫荧光染色对纯化后的原代仔猪小肠黏膜上皮细胞进行鉴定。【结果】两种小肠上皮细胞分离效率对比表明,后一种消化方式更为有效。进而取出生12 h内未吃初乳的大白仔猪,剖腹剪取其小肠段,使用联酶混合液灌注消化分离得到形态完整、容易贴壁生长的小肠绒毛细胞团。电镜和CK18免疫荧光染色结果均显示,小肠黏膜上皮细胞纯度达90%以上。经纯化处理,最后获得了FUT1基因型为GG和GA的两种小肠黏膜上皮细胞。仔猪原代小肠黏膜上皮细胞培养周期显示,7代前细胞生长状况良好,形态为典型的上皮细胞样,单层细胞呈铺路石排列,培养至第9代,细胞出现生长停滞、胞体空泡化等现象。【结论】最终获得了FUT1基因型为GG和GA的仔猪原代小肠黏膜上皮细胞。建立了仔猪小肠黏膜上皮细胞分离及培养方法,为后续的细胞建系工作奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 仔猪 小肠黏膜 上皮细胞 体外分离培养 细胞鉴定
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4种小鼠肠上皮细胞分离培养方法的比较 被引量:10
14
作者 孙秀梅 程帆 +4 位作者 刘维 孙涛 薛秀恒 李培英 王菊花 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2013年第5期25-31,共7页
【目的】比较4种小鼠肠黏膜上皮细胞(Intestinal epithelial cells,IECs)分离方法的分离效果,建立小鼠IECs的有效分离培养方法,获得小鼠IECs原代细胞,为后续研究做准备。【方法】分别采用组织块培养法、嗜热菌蛋白酶消化法、胶原酶Ⅺ和... 【目的】比较4种小鼠肠黏膜上皮细胞(Intestinal epithelial cells,IECs)分离方法的分离效果,建立小鼠IECs的有效分离培养方法,获得小鼠IECs原代细胞,为后续研究做准备。【方法】分别采用组织块培养法、嗜热菌蛋白酶消化法、胶原酶Ⅺ和中性蛋白酶Ⅰ联合消化法以及胶原酶Ⅰ和中性蛋白酶Ⅵ联合消化法共4种方法分离小鼠IECs并培养,通过细胞免疫组织化学法和细胞免疫荧光法对分离的IECs进行细胞特异性鉴定,比较4种方法的分离效果。【结果】组织块培养法所获IECs活力好,增殖能力强,但成纤维细胞污染较严重,细胞纯度低;胶原酶Ⅰ和中性蛋白酶Ⅵ分离法获得的IECs数量少且细胞增殖能力弱;嗜热菌蛋白酶消化法及胶原酶Ⅺ与中性蛋白酶Ⅰ联合消化法所获得的小鼠IECs纯度较高,原代培养时增殖能力稍弱于组织块培养法,但传代后增殖能力趋于稳定。通过细胞免疫组织化学法和细胞免疫荧光法对分离的细胞进行鉴定,结果表明,分离的细胞多数为小鼠IECs。【结论】嗜热菌蛋白酶消化法及胶原酶Ⅺ与中性蛋白酶Ⅰ联合消化法均适合肠道上皮细胞的分离和培养。 展开更多
关键词 小鼠 小肠上皮细胞 原代培养 组织块分离培养法 酶学分离培养法
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SD大鼠肾小管上皮细胞的原代培养和鉴定 被引量:7
15
作者 何锦园 曾国华 +3 位作者 吴文起 钟文 桂志明 麦赞林 《东南大学学报(医学版)》 CAS 2010年第4期395-399,共5页
目的:探讨大鼠肾小管上皮细胞的体外培养及鉴定方法,为肾结石病的研究提供实验平台。方法:采用机械研磨、Ⅰ型胶原酶消化法分离出肾小管节段,在含10%胎牛血清和1%上皮细胞生长因子的上皮细胞培养基中培养,0.25%胰蛋白酶消化后传代培养,... 目的:探讨大鼠肾小管上皮细胞的体外培养及鉴定方法,为肾结石病的研究提供实验平台。方法:采用机械研磨、Ⅰ型胶原酶消化法分离出肾小管节段,在含10%胎牛血清和1%上皮细胞生长因子的上皮细胞培养基中培养,0.25%胰蛋白酶消化后传代培养,并用原代和传1代细胞做免疫细胞化学染色鉴定。结果:细胞培养至第3天完全贴壁,4~7d处于对数生长期,为多边鹅卵石样;免疫细胞化学染色显示cytokeratin18表达阳性。结论:机械研磨、Ⅰ型胶原酶消化法结合使用上皮细胞培养基可以培养得到较纯的肾小管,是大鼠肾小管上皮细胞原代培养的理想方法,为进一步研究泌尿系结石病因和机制提供了实验基础。 展开更多
关键词 肾小管上皮细胞 原代培养 CK18 大鼠
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新生大鼠小肠上皮细胞分离培养研究 被引量:14
16
作者 戴定威 吴圣楣 +2 位作者 李敏 廖贤平 刘再涌 《细胞生物学杂志》 CSCD 1997年第1期31-34,共4页
本实验比较了4种分离大鼠IEC的方法,结果显示联合应用粗胶原酶和中性蛋白酶分离效果最好,细胞贴壁生长能力强。胶原涂膜改善玻璃培养瓶或盖玻片表面的性状有利于细胞贴壁生长。细胞的增殖依赖于培养液的质量、成分及细胞间的相互作用。... 本实验比较了4种分离大鼠IEC的方法,结果显示联合应用粗胶原酶和中性蛋白酶分离效果最好,细胞贴壁生长能力强。胶原涂膜改善玻璃培养瓶或盖玻片表面的性状有利于细胞贴壁生长。细胞的增殖依赖于培养液的质量、成分及细胞间的相互作用。培养细胞一般1~2天贴壁,7~8天明显增殖,10~14天汇合成片。培养细胞细胞角质蛋白、碱性磷酸酶染色阳性,光镜和电镜检查均显示为IEC。本文所建立的新生大鼠IEC体外培养方法为研究IEC生理和病理提供了一个十分有用的实验模型。 展开更多
关键词 小肠上皮细胞 分离技术 原代培养
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原代培养大鼠肝细胞分离方法比较研究 被引量:11
17
作者 唐智敏 杨玲 +1 位作者 金文银 聂广 《中西医结合肝病杂志》 CAS 1999年第4期19-21,共3页
目的:探索原代培养大鼠肝细胞的最佳分离方法。方法:对比观察不同的肝细胞分离技术的培养效果。培养前,以4%台盼蓝染色判定肝细胞活性,培养48h后,观察肝细胞贴壁及生长状况。结果:①灌流消化法优于剪切消化法;②在多种灌流消化法中,经... 目的:探索原代培养大鼠肝细胞的最佳分离方法。方法:对比观察不同的肝细胞分离技术的培养效果。培养前,以4%台盼蓝染色判定肝细胞活性,培养48h后,观察肝细胞贴壁及生长状况。结果:①灌流消化法优于剪切消化法;②在多种灌流消化法中,经门静脉灌流消化法优于经胆总管灌流消化法及经腹主动脉灌流消化法;③在门静脉灌流的基础上,0.1%胶原酶Ⅰ37℃热消化10~15分钟,效果最好,而0.25%胰蛋白酶消化10~12分钟次之,用含EDTA的D-Hank液直接灌流分离法效果极差。结论:原代培养肝细胞的得率及活性与不同分离法包括灌流途径、灌流液、消化时间等有关。 展开更多
关键词 原代培养 大鼠 肝细胞 分离方法 比较研究
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鸡肠上皮细胞原代培养与鉴定 被引量:7
18
作者 王雪云 刘芳 +5 位作者 蒋大伟 韩志霞 马金玉 李克宇 张彬 许兰菊 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第11期10-12,284,共4页
为了探讨鸡肠上皮细胞体外分离培养方法,进一步研究鸡源志贺菌Ipa C毒力蛋白在鸡肠上皮细胞上的受体蛋白分子,试验分别无菌取14,16,18日龄鸡胚肠组织,用300 U/m LⅪ型胶原酶和0.1 mg/m LⅠ型中性蛋白酶混合搅拌消化25 min,用壁差法纯化... 为了探讨鸡肠上皮细胞体外分离培养方法,进一步研究鸡源志贺菌Ipa C毒力蛋白在鸡肠上皮细胞上的受体蛋白分子,试验分别无菌取14,16,18日龄鸡胚肠组织,用300 U/m LⅪ型胶原酶和0.1 mg/m LⅠ型中性蛋白酶混合搅拌消化25 min,用壁差法纯化鸡肠上皮细胞,贴壁时间差为3 h,分别种植于20%FBS包被过的和未包被过的一次性塑料细胞培养瓶中,在倒置显微镜下观察细胞生长状态,透射电镜下对培养细胞进行鉴定。结果表明:采用16日龄鸡胚肠组织用Ⅺ型胶原酶和Ⅰ型中性蛋白酶联合消化25 min,可获得较多的肠隐窝单位,肠上皮细胞在20%FBS包被过的一次性细胞培养瓶中贴壁效果良好,细胞生长状态良好;透射电镜下可见鸡肠上皮细胞的微绒毛,鉴定为鸡肠上皮细胞。 展开更多
关键词 鸡肠上皮细胞 鸡胚 肠隐窝单位 分离培养 鉴定
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鸡小肠上皮细胞的分离及体外培养研究进展 被引量:8
19
作者 王晓亮 顾宪红 郑冬梅 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第9期34-38,共5页
小肠是食物消化吸收的主要场所,而小肠上皮细胞(intestinal epithelial cells,IEC)在营养物质的消化吸收及转运、消化酶分泌及肠道免疫方面发挥着重要作用。利用体外培养方法分离培养IEC为研究其分化增殖、凋亡等生物学功能提供了重要... 小肠是食物消化吸收的主要场所,而小肠上皮细胞(intestinal epithelial cells,IEC)在营养物质的消化吸收及转运、消化酶分泌及肠道免疫方面发挥着重要作用。利用体外培养方法分离培养IEC为研究其分化增殖、凋亡等生物学功能提供了重要手段。作者综述了培养组织样的选择、分离IEC的常用方法、影响IEC培养的因素及IEC的鉴定方法等鸡IEC体外分离培养过程中的相关研究进展。 展开更多
关键词 小肠上皮细胞 分离 体外原代培养
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大鼠肝星状细胞的分离、培养与鉴定 被引量:3
20
作者 赵金满 张静 +4 位作者 张莹 赵立杰 施贵静 张铁英 傅宝玉 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期603-605,共3页
目的:改进大鼠肝星状细胞的分离、培养方法,提高其分离质量。方法:取成年雄性Wistar大鼠,用链蛋白酶、胶原酶体内门静脉灌注消化大鼠肝脏细胞,经Nycodenz密度梯度离心分离肝星状细胞。台盼蓝拒染实验鉴定细胞活力,Desmin免疫细胞化学染... 目的:改进大鼠肝星状细胞的分离、培养方法,提高其分离质量。方法:取成年雄性Wistar大鼠,用链蛋白酶、胶原酶体内门静脉灌注消化大鼠肝脏细胞,经Nycodenz密度梯度离心分离肝星状细胞。台盼蓝拒染实验鉴定细胞活力,Desmin免疫细胞化学染色鉴定细胞纯度。结果:肝星状细胞得率为2.8×107/肝。肝星状细胞存活率在90%以上。Desmin阳性细胞原代培养达90%以上,传代培养达95%以上。结论:改良大鼠肝星状细胞的分离、培养方法,有利于原代大鼠肝星状细胞的生物学研究。 展开更多
关键词 肝星状细胞 细胞分离 原代培养 大鼠
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