肠出血性大肠杆菌O157:H7 intimin蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

本试验选择肠出血性大肠杆菌O157∶H7 LEE毒力岛上的eae基因原核表达产物intimin作为抗原免疫BALB/c小鼠,经过细胞融合和4次亚克隆后获得了5株杂交瘤细胞,分别命名为1E8、2B11、3B6、4C10、5D5,效价均在1∶128 000以上.杂交瘤细胞的染色体结果显示5株杂交瘤细胞的染色体数目在90～100条之间.Western blotting鉴定结果表明所制备的单克隆抗体能特异性识别肠出血性大肠杆菌O157：H7 intimin蛋白.间接免疫荧光显示单抗能够与肠出血性大肠杆菌O157∶H7表面抗原结合,荧光镜下可见明显绿色荧光.交叉试验结果显示制备的5株单克隆抗体均不与鸡的其它血清型大肠杆菌（O1、O2、O78、O157）及鸡白痢沙门菌等发生交叉反应,确定为肠出血性大肠杆菌O157∶H7特异性单克隆抗体.

肠出血性大肠杆菌O157∶H7 Intimin和Tir-Tccp蛋白质对小鼠的免疫保护性

为了研究不同浓度的肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7 Intimin和Tir-Tccp蛋白质对接受1010 CFUEHEC O157∶H7小鼠的免疫保护作用,将Intimin和Tir-Tccp蛋白质和佐剂充分乳化后,通过皮下多点注射免疫小鼠,对照组注射等量的磷酸盐缓冲液。共免疫2次,间隔14 d,末次免疫后14 d攻毒1只小鼠EHEC O157∶H7 1010CFU。每次免疫后的14 d通过断尾采血,用间接ELISA法检测血清抗体。攻毒后,观察小鼠精神状态,记录死亡数并检测排菌量。ELISA检测结果表明,Tir-Tccp蛋白质诱导小鼠产生IgG抗体水平明显升高,而Intimin诱导产生的IgG抗体升高不明显。攻毒后,各免疫组小鼠均死亡1只,存活14只,存活率为93.3%;对照组小鼠死亡4只,存活6只,存活率为60.0%。免疫组在攻毒后6 d,粪便中检测不到EHEC O157∶H7,对照组在攻毒后13 d仍有较高的排菌量。表明Intimin和Tir-Tccp蛋白质对小鼠起到了有效的免疫保护作用,能够减少EHEC O157∶H7在小鼠体内的定殖。

大肠杆菌O157:H7 IntC300 B细胞抗原表位的综合预测

目的预测肠出血型大肠杆菌O157∶H7 IntiminC端300氨基酸片段(IntC300)的B细胞抗原表位。方法采用计算机软件和网络服务器分析IntC300的亲水性、β-转角、柔韧性、表面可及性和抗原指数,判断其B细胞抗原表位。结果B细胞抗原表位可能在20-36、76-88、189-198、262-279和284-296残基或其附近。结论对EHEC O157∶H7 IntC300 B细胞抗原表位的综合预测,为研究诊断性单克隆抗体及多肽疫苗提供了理论工具。